1,3-丙二醇脱氢酶-步纯化与杂化凝胶固定化的初步研究

彭益强; 罗菊香; 张磊; 方柏山

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1,3-丙二醇脱氢酶-步纯化与杂化凝胶固定化的初步研究

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转录表达来源于Klebsiella.pl,3-丙二醇脱氢酶(PDH)基因片段的E.coli工程菌,在5L发酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min(微氧)条件下培养20h;发酵菌体经破碎分离后所得样品通过HisTrap HP柱亲和层析一步纯化得到电泳纯的PDH,纯化倍数为2.94倍,活性回收率为50%,经SDS-PAGE电泳鉴定获得一条清晰条带,表达蛋白亚基相对分子质量约为41kDa.用改进的溶胶-凝胶法(杂化凝胶)包埋纯化酶,考察正硅酸乙酯(TEOS)浓度、海藻酸盐(ALG)浓度、CaCl2浓度及ALG与TEOS体积比等因素对酶固定化效果的影响,结果表明,较优包埋条件为:p(TEOS)=20g/L,p(ALG)=30g/L,p(CaCl2)=40g/L,V(ALG):V(TEOS)=3:1;由此制备的PDH的ALG-SiO2杂化凝胶保藏60天后酶活仍保持80%,进行批次反应时,反应3批后酶活保持7013%,反应第6批时酶活剩余29.8%.

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来源
《化工进展》 |2008年第2期|284-288293|共6页
作者
彭益强; 罗菊香; 张磊; 方柏山;
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作者单位

华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建,泉州,362021;

华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建,泉州,362021;

华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建,泉州,362021;

华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建,泉州,362021;

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正文语种 chi
中图分类酶的分离与提纯;
关键词
1,3-丙二醇脱氢酶; 纯化; 杂化凝胶; 固定化;

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