南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立

邓俊花; 吴绍强; 林祥梅

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南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立

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为满足口岸对南非Ⅱ型口蹄疫检测、监测的需求,在对南非Ⅱ型口蹄疫抗原表位分析及相关基因合成的基础上,进行融合蛋白pGEX-VP1～VP3的体外表达,采用柱上酶切方法制备VP1～VP3蛋白.将纯化VPI~VP3抗原包被96微孔板,分别优化抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度,确定阴性临界值.经反复优化,建立的南非Ⅱ型间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为6.4ug/ml,血清最佳稀释度为1:200,酶标二抗最佳稀释度为1:4000,阴性临界值(OD450)为0.562.检测样品判定标准为:OD450>0.622为阳性,OD450<0.502为阴性,0.502≤OD450≤0.622为可疑.特异性试验结果表明,所建立方法与其它血清型口蹄疫间无交叉反应.南非Ⅱ型口蹄疫间接ELISA检测方法的建立为我国口岸口蹄疫检疫提供了新的查验方法.

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来源
《中国动物检疫》 |2011年第2期|34-3646|共4页
作者
邓俊花; 吴绍强; 林祥梅;
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作者单位

中国检验检疫科学研究院,北京,100029;

中国检验检疫科学研究院,北京,100029;

中国检验检疫科学研究院,北京,100029;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 S852.659.6;
关键词
口蹄疫病毒; 南非Ⅱ型口蹄疫; 酶联免疫吸附试验; 检测;

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