小鼠cyclin A2正义和反义真核表达载体的构建及鉴定

秦文华; 付春景

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目的构建小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体.方法采用小鼠胚胎组织取材,提取总RNA.设计引物,采用RT-PCR方法扩增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA,将此DNA插入pGEM-T载体,转化入JM109感受态细菌.将鉴定得到的重组质粒进行扩增,EcoR Ⅰ酶切后,回收cyclin A2目的片段亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体.酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2.结果将小鼠基因的开放阅读框(ORF)重组到真核表达载体pcDNA3.1内,用EcoR Ⅰ酶切重组质粒后可得到一接近1660 bp的DNA条带,核酸测序证实和GenBank 所公布序列相符.HindⅢ酶切鉴定重组质粒后,证明分别为正向和反向插入载体的质粒.DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正确的.结论成功构建了小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体.

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来源
《中国现代医生》 |2012年第31期|1-37|共4页
作者
秦文华; 付春景;
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作者单位

中国平煤神马医疗集团总医院病理科,河南平顶山467000;

郑州大学基础医学院病理生理学教研室,河南郑州450001;

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正文语种 chi
中图分类 R346;
关键词
细胞周期蛋白A2; 正义; 反义; 真核表达载体;

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