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miR-21下调程序性死亡细胞4对抑制裸鼠肾细胞癌肿瘤转化和增殖的实验研究

         

摘要

目的 研究微小核糖核酸-21(miR-21)下调程序性死亡细胞4(PDCD4)对裸鼠肾细胞癌的影响和关系.方法 将24只BALB/c雄性裸鼠按随机数字表法分为以下3组:阴性对照(NC组,n=8)、miR-21模拟物组(n=8)和miR-21抑制剂组(n=8).将肾细胞癌786-O细胞皮下移植到小鼠的腋下,然后每天注射NC小干扰RNA(siRNA),前体-miR-21(模拟物)或抗-miR-21(抑制剂).786-O细胞移植后16 d,从小鼠中取出肿瘤并称重.使用逆转录一定量PCR分析癌组织中miR-21和PDCD4 mRNA的表达.采用免疫组织化学和Western blot检测PDCD4蛋白在癌组织中的表达,用PDCD4 siRNA或NC siRNA转染786-O细胞,观察沉默PDCD4对肿瘤细胞生长、增殖和侵袭的影响.雌性软琼脂克隆形成、EdU细胞增殖测定和Transwell迁移和侵袭测定.另取16只BALB/c雄性裸鼠随机分为2组:NC(n=8)和PDCD4 siRNA(n=8).将786-O细胞皮下移植到小鼠的腋下,每天注射NC siRNA或PDCD4 siRNA.移植后16 d取出肿瘤并称重.结果 与NC组相比,miR-21模拟组的肿瘤重量显著增加,miR-21抑制剂组中的肿瘤重量显著降低(P<0.01).裸鼠肾癌模型中的miR-21表达在miR-21模拟组中显著上调,与NC组相比显著降低(P<0.01).在miR-21抑制剂组中,miR-21模拟组PDCD4蛋白水平显著降低,miR-21抑制剂组显著增加(P<0.01),而PDCD4 mRNA表达没有显著改变(P>0.05).在EdU增殖测定中,NC siRNA组中的新细胞合并EdU的平均百分比为28.6%,并且在PDCD4 siRNA转染的细胞中显著增加至44.7%(P<0.05).在软琼脂克隆形成实验中,Transwell和迁移和侵袭实验显示,PDCD4 siRNA转染细胞的集落形成、迁移和侵袭能力显著增加,与NC组相比,肿瘤重量在PDCD4 siRNA组中显著增加(P<0.01).结论 miR-21可促进裸鼠肾癌模型癌细胞增生和增殖,转录后下调PDCD4蛋白表达可抑制癌细胞增生和增殖,提示增加PDCD4表达或抑制miR-21表达可能成为治疗肾癌的有效新治疗策略.

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