HBV反义全基因真核细胞表达载体的构建及在肝癌细胞内的表达

陈公英; 娄国强; 徐岱; 王信子; 陈智

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HBV反义全基因真核细胞表达载体的构建及在肝癌细胞内的表达

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@@1. 材料与方法：乳哺动物细胞表达载体pBK-CMV，长约4.5kb，带有T7公用序列。pCP10是pBR322 EcoRI位点中插入双拷贝头尾相接的HBV ayw亚型全基因HBV DNA重组质粒。PCR引物XI1：1428-1448 nt 5′CGT CCC GTC GGC GCT GAA TCC 3′，XI2：1672-1653 nt 5′AGT CCA AGA GTC CTC TTA AG 3′。人肝癌细胞系SMMC-7721，由上海细胞所提供。将EcoRⅠ酶切后回收的全基因HBV片段，在T4 DNA连接酶作用下，与EcoRⅠ酶切后的pBK-CMV粘端连接。利用pBK-CMV具有T7公用序列，选用XI2、T7作为引物，PCR出现1.7kb阳性条带为反接，并命名为pBK-AHBV。用FUGENETM6转染试剂转染SMMC-7721细胞。在含10%FCS的RPMI 1640（pH7.4）培养基中培养至60h后，用总RNA抽提试剂（Trizol Reagent）提取转染的SMMC-7721细胞，依次获得总RNA、DNA。

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来源
《中华肝脏病杂志》 |2000年第3期|187|共1页
作者
陈公英; 娄国强; 徐岱; 王信子; 陈智;
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作者单位

杭州市第六人民医院,310014;

杭州市第六人民医院,310014;

杭州市第六人民医院,310014;

浙江大学医学院附属一院传染病研究所;

浙江大学医学院附属一院传染病研究所;

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正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
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