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2株产气肠杆菌临床株对厄他培南耐药机制的研究

         
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目的 研究2株产气肠杆菌临床株Ea293和Ea2880对厄他培南耐药的机制.方法 采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),应用K-B法检测菌株对美罗培南、亚胺培南及厄他培南的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;聚合酶链反应(PCR)扩增碳青霉烯酶基因(KPC,IMP-1、2组,VIM)和广谱及超广谱β-内酰胺酶基因(TEM,SHV,CTX-M-1、2、9组ESBLs),并进行序列分析;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行细菌外膜蛋白分析,并对外膜蛋白基因OmpE36进行PCR扩增及序列分析.结果 药物敏感试验显示,产气肠杆菌Ea293和Ea2880均对厄他培南耐药.PCR扩增4种碳青霉烯酶基因和5种广谱及超广谱β-内酰胺酶基因,仅Ea2880的SHV和CTX-M-9组ESBLs基因阳性,SHV基因的PCR产物测序为SHV-11型广谱酶.细菌外膜蛋白SDS-PAGE结果显示,与碳青霉烯类抗生素敏感的产气肠杆菌Ea1885相比,Ea293和Ea2880均缺失42 kD左右的条带,即OmpE36.PCR扩增外膜蛋白基因OmpE36,Ea2880可见预期片段,DNA序列分析显示其与GenBank公布的产气肠杆菌标准株ATCC 13048的相似性为87%,氨基酸序列的相似性亦为87%;而Ea293未扩增出预期片段.结论 产气肠杆菌临床株Ea293与Ea2880对厄他培南耐药的主要原因可能是外膜蛋白基因OmpE36缺失,同时Ea2880可能还有CTX-M-9组ESBLs参与.

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