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原发性胆汁性肝硬化患者外周血NKT细胞体外活化及相关细胞因子表达分析

         
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目的分析与评价PBC患者外周血TCRVα24+Vβ11+NKT数量和功能状态及其与PBC发生的关系。方法制备60例PBC患者（PBC组）和60名年龄及性别匹配健康人（健康对照组）PBMC,以FACS检测TCRVα24+Vβ11+NKT数量;以α半乳糖酰基鞘胺醇（α-galcer）和IL-2诱导PBMC中NKT的扩增活化,用ICS-FC检测细胞内表达IL-4和IFN-γ的NKT比值;用ELISpot和ELISA定量检测细胞内及上清液IL-4和IFN-γ的表达量。结果 FACS检测PBC组和健康对照组TCRVα24+Vβ11+NKT扩增前后的比率分别为[0.16（0.11～0.26）]%、[0.82（0.61～0.89）]%、[0.33（0.27～0.38）]%、[27.40（23.52～33.87）]%,前组显著低于后组（Z值分别为6.563、7.707,P＜均0.01）。扩增活化后PBC组和健康对照组TCRVα24+Vβ11+NKT的扩增倍数分别为扩增活化前的[96.05（80.50～100.27）]倍和[134.65（121.60～142.13）]倍,PBC组明显低于健康对照组（Z=6.462,P＜0.01）。同时于活化后用ICS-FC检测细胞内细胞因子,PBC组和健康对照组IFN-γ+与TCRVα24+Vβ11+NKT比分别为[38.98（36.73～42.98）]%、[34.56（30.12～36.78）]%,前组显著高于后组（Z=3.158,P＜0.05）;PBC组和健康对照组IL-4+与TCRVα24+Vβ11+NKT细胞比分别为[0.193（0.179～0.218）]%和[34.36（30.93～38.77）]%,前组显著低于后组（Z=6.476,P＜0.01）。ELISpot和ELISA定量检测扩增活化后PBC组分泌IFN-γ的斑点形成细胞数（SFC）和上清液IFN-γ分泌量分别为[410（380～500）]SFC/1×10~6PBMC、（67.21±11.27）ng/L,健康对照组[340（280～390）]SFC/1×10~6 PBMC、（31.45±8.17）ng/L,前组的IFN-γ斑点形成细胞数及分泌量显著高于后组（Z=4.312,P＜0.05、t=27.25,P＜0.01）;PBC组的IL-4斑点形成细胞数和分泌量分别为[73（60～100）]SFC/1×10~6 PBMC、（12.65±4.17）μg/L,健康对照组[245（230～280）]SFC/1×10~6 PBMC、（28.31±6.31）μg/L,PBC组IL-4却显著低于健康对照组（Z=5.112,P＜0.01、t=25.34,P＜0.01）。结论 PBC组外周血TCRVα24+Vβ11+NKT数量较健康对照组明显减少,经α-galcer及IL-2体外活化后扩增倍数及分泌细胞因子IL-4的功能较健康对照组显著降低,而分泌IFN-γ能力却显著高于健康对照组,NKT数量的减少及免疫调节功能的紊乱可能是PBC发病的重要因素之一。

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