淋病奈瑟菌主要外膜蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果观察

廖芳; 贺超; 刘海鹏; 宋启发; 严杰

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目的克隆淋病奈瑟菌孔蛋白I B型（PIB）基因并构建其真核表达载体pC I-PIB,了解pC I-PIB免疫接种后诱导小鼠特异性体液和细胞免疫反应的效果。方法采用聚合酶联反应（PCR）扩增淋病奈瑟菌主要外膜蛋白PIB全长基因片段（960 bp）,构建表达PIB的真核表达载体pC I-PIB。pC I-PIB肌内注射免疫BALB/c小鼠65只,100μg次//只,亲和素-生物素-过氧化酶复合物（ABC）法检测其中10只pC I-PIB免疫小鼠肌细胞中PIB的表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）和特异性淋巴细胞增殖反应（MTT）法检测余下pC I-PIB免疫小鼠的特异性体液和细胞免疫应答效果。采用玻片凝集试验和补体溶菌试验检测pC I-PIB免疫小鼠血清的抗菌活性。结果PCR可扩增出预期大小的全长PIB基因片段（960 bp）,与报道PIB基因序列（GenBank No:AF090801）比较,重组质粒pC I-PIB中目的插入片段的核苷酸序列同源性可达99.28%。免疫小鼠的肌细胞能摄取pC I-PIB并表达PIB。pC I-PIB免疫小鼠的血清中可产生较高效价的特异性IgG（1∶4000）,并产生特异性T细胞增殖反应,增殖指数（4.031）明显高于对照组（1.127）（t=71.71,P＜0.05）。pC I-PIB免疫小鼠血清及阴道冲洗液均有凝集淋病奈瑟菌的作用,在补体参与下可杀灭细菌。结论本研究成功地构建了淋病奈瑟菌PIB基因重组真核表达载体pC I-PIB。pC I-PIB接种小鼠后可有效地引起特异性体液和细胞免疫反应,具有作为淋病奈瑟菌候选DNA疫苗的应用前景。

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来源
《中华预防医学杂志》 |2006年第6期|422-426|共5页
作者
廖芳; 贺超; 刘海鹏; 宋启发; 严杰;
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作者单位

1. 华中科技大学同济医学院病原生物学系 2. 浙江大学医学院病原生物学教研室;

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正文语种 chi
中图分类淋病;
关键词
奈瑟氏球菌; 淋病; 细菌外膜蛋白质类; 疫苗; DNA; 免疫性;

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