NPM1K263SUMO化位点在PEDV N蛋白与NPM1共定位中的作用

季朝阳; 石达; 陈建飞; 王潇博; 时洪艳; 张鑫; 冯力

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To identify the necessarily amino acid for co-localization of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) N protein with NPM1 in Vero E6 cells,the mutant NPM1 genes were obtained by in vitro PCR site directed mutagenesis,and cloned into eukaryotic expression vector pDsReD2-N1 to generate the recombinant plasmids pDsReD2-NPM1 (T199A),pDsReD2-NPM1 (K230R),pDsReD2-NPM1 (K263R).Vero E6 were transfected with plasmids pDsReD2-NPM1 (T199A),pDsReD2-NPM1 (K230R)and DsReD2-NPM1 (K263R).Furthermore,confocal microscopy observation indicated that the PEDV N protein were co-localized with DsReD2-NPM1 (T199A) and DsReD2-NPM1 (K230R) in nucleolus,however,DsReD2-NPM1 (K263R) were distributed into cell nucleus.The results would provide the basis for further studies of PEDV replication and pathogenesis mechanism.%为阐明细胞核仁蛋白NPM1与猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N蛋白)共定位的关键位点.本实验通过设计突变引物,利用重叠延伸PCR方法对NPM1氨基酸位点T199、K230和K263进行定点突变,分别将其克隆至真核表达载体pDsRed2-N1中,获得重组质粒pDsRed2-NPM1 (T199A)、pDsRed2-NPM1 (K230R)、pDsRed2-NPM1 (K263R).随后分别将pDsRed2-NPM1 (WT)、pDsRed2-NPM1 (T199A)、pDsRed2-NPM1 (K230R)、pDsRed2-NPM1 (K263R)与重组质粒pAcGFP-N共转染Vero E6细胞.共聚焦结果显示NPM1 (T199A)、NPM1(K230R)、野生型NPM1均与N蛋白共定位于细胞的核仁中.虽然NPM1 (K263R)与N蛋白具有共定位现象,但两者共定位于细胞核中.该实验结果为进一步研究核仁蛋白NPM1参与PEDV复制的分子机制奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2017年第11期|940-942|共3页
作者
季朝阳; 石达; 陈建飞; 王潇博; 时洪艳; 张鑫; 冯力;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队,黑龙江哈尔滨150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队,黑龙江哈尔滨150069;

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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队,黑龙江哈尔滨150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队,黑龙江哈尔滨150069;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
猪流行性腹泻病毒; 核衣壳蛋白; 核仁蛋白NPM1; 定点突变;

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