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非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达

         
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摘要

To establish the method of real-time PCR for detection of classical swine fever virus (CSFV) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) in food-oriented animal tissues, the specific primers and TaqMan fluorescent probes of CSFV and PRRSV were designed and synthesized, and the amplification systems were optimized. The duplex real-time RT-PCR was established based on dual labeled FAM or VIC fluorescent probes. The method established in this study showed better amplification efficiency in detecting CSFV and PRRSV with detection limit of 102 copies, which was 200 times more sensitive than the normal PCR methods and no any reaction with other related swine viruses. The intro-and inter reproducibility were 4.2% and 4.5%, respectively. Tested on 200 clinical samples by this method showed a complete coincidence with other detection methods. This specificity and sensitivity method could be used for detection of C SFV and PRRSV in food-orientedanimal tissues and clinical samples.ELISA coated with the purified recombinant N protein showed specificity for the detection of antibody against CDV.%为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96.6％～99.2％和97.9％～99.4％之间,与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93.2％～93.6％和96.4％～97.5％之间；在N基因系统发育进化树上,非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群,而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株.N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62ku,主要以包涵体的形式存在；用westem blot分析,重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应；以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2011年第8期|625-629|共5页
  • 作者

    毕振威; 王永山; 范红结; 王智群; 吴晓悠; 马金荣; 欧阳伟; 张海彬;

  • 作者单位

    江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

    江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;

    南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜病毒学;
  • 关键词

    犬瘟热病毒; 非典型; 核衣壳蛋白基因; 序列分析; 原核表达;

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