猪α干扰素的原核表达及抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定

闫若潜; 赵雪丽; 赵明军; 盛敏; 吴志明

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猪α干扰素的原核表达及抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定

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为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究采用PCR技术自猪肝脏总DNA中扩增、克隆猪α干扰素(PoIFN-α)成熟肽基因并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪α干扰素(rPoIFN-α)蛋白通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用细胞病变抑制法分别测定rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗水泡性口炎病毒(VSV)增殖活性及在Marc-145细胞上抑制高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的增殖活性,以分别评价rPoIFN-α的活性单位及其体外抑制高致病性PRRSV增殖所需的最低浓度.结果表明,克隆的PoIFN-α.成熟肽基因全长501 bp,编码166个氨基酸;表达的rPoIFN-α蛋白分子量大小20.7 ku左右,与预期大小相一致;经纯化后的蛋白纯度在95%以上;纯化的rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗VSV病毒活性单位为1.4482×1044 IU/mL(5.2×106 IU/mg),在Marc-145细胞上能完全抑制高致病性PRRSV增殖所需的rPoIFN-α蛋白最低有效剂量为640 U/mL(2.3×104U/mg).这些研究结果为新型基因工程抗病毒制剂的开发以及用于高致病性PRRSV性疾病的预防和治疗奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2008年第7期|570-574|共5页
作者
闫若潜; 赵雪丽; 赵明军; 盛敏; 吴志明;
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作者单位

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008;

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008;

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008;

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008;

河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008;

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正文语种 chi
中图分类 S852.4.2;
关键词
猪α干扰素; 表达; 纯化; 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒; 抗病毒活性;

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