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阿司匹林和氯吡格雷联合应用对小鼠脑缺血恢复期RAGE及sRAGE表达的影响

         
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目的 探索阿司匹林和氯吡格雷联合应用对小鼠大脑中动脉远端缺血再灌注模型恢复期晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)及可溶性晚期糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycation end products,sRAGE)表达的影响及其机制。方法 60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、溶剂组、阿司匹林和氯吡格雷联合组(双抗组),每组20只。通过压迫大脑中动脉远端制作脑缺血再灌注模型(缺血60 min再灌注),再灌注即刻灌胃,溶剂组给予饮用水100μL,双抗组给予阿司匹林(剂量12 mg/kg,每只实际用量0.3 mg)与氯吡格雷(剂量12 mg/kg,每只实际用量0.3 mg)混悬液100μL,每日1次,连续21 d。缺血1、3、5、7、9、11、14、21 d对小鼠进行神经功能评价。缺血21 d取材,酶联免疫吸附法检测小鼠血清sRAGE表达水平;免疫印记检测脑组织RAGE表达水平;实时荧光定量PCR检测CD16、CD32、CD11b、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric-oxide synthase,iNOS)、CD206、精氨酸酶1(arginase1,Arg1)、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、几丁质酶样蛋白(chitinase-like 3,Chil3/Ym1/2)等炎症因子及RAGE的mRNA表达情况;免疫荧光染色标记RAGE、神经元特异核蛋白(neuronal nuclei,NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP),观察RAGE与神经元和星形胶质细胞共定位情况。结果 双抗组小鼠3 d时胡须碰触评分和神经功能总分、9 d时神经功能总分优于溶剂组,差异有统计学意义(P=0.0067、0.0140、0.0406)。缺血再灌注21 d时,双抗组小鼠血清sRAGE表达水平高于溶剂组(1.099±0.541 ng/mL vs.0.319±0.341 ng/mL,P=0.0120);脑组织iNOS(1.250±0.318vs.1.843±0.301,P=0.0164)及RAGE(2.105±0.300 vs.2.732±0.249,P=0.0071)的mRNA相对表达较溶剂组下降。在小鼠脑梗死周边区RAGE与神经元具有共定位,与星形胶质细胞无共定位;双抗组RAGE~+NeuN~+细胞数量少于溶剂组(328.798±35.183个/平方毫米vs.814.437±165.758个/平方毫米,P=0.0012)。结论 阿司匹林和氯吡格雷联合应用可能通过下调RAGE、上调sRAGE的表达水平,减轻炎症反应,从而发挥脑保护作用。

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