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小干扰RNA抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因的表达

     
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摘要

目的:分析小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)抑制neuro-2a细胞内源β位淀粉样前体蛋白裂解酶1基因(Beta-site APP cleaving enzyme protein,BACE1)的表达情况.方法:实验于2004-12/2006-06在中山大学中山医学院和上海交通大学农业与生物学院完成.①用脂质体将EGFP基因表达载体pEGFP-C1 Vector和体外转录合成的针对EGFP基因的小干扰RNA(siEGFP)分别或同时转染neuro-2a细胞,在倒置荧光显微镜下计算EGFP在neuro-2a细胞中的表达率.②将体外转录合成的siBACE1-1,siBACE1-2,siBACE1-3转染neuro-2a细胞,干扰24,48,72 h后分别用Real time RT-PCR定量分析siBACE1对内源BACE1基因表达的抑制率和干扰的时效性.结果:①外源EGFP基因转染neuro-2a细胞后,43%neuro-2a细胞高表达EGFP蛋白.通过转染siEGFP则可有效抑制EGFP基因表达.②3个干扰位点的siBACE1对BACE1基因表达有不同的抑制效率,siBACE1-3使BACE1 mRNA表达水平下降60%,siBACE1-1为13%,siBACE1-2对BACE1 mRNA无明显的抑制作用.③siBACE1抑制内源BACE1基因的表达与干扰时间相关,siBACE1干扰24 h、48 h后BACE1 mRNA的表达与正常组无明显差异(P＞0.05),但干扰72 h后,siBACE1-3和siBACE1-1均使BACE1 mRNA表达量下降.结论:体外转录合成的siBACE1能有效抑制neuro-2a细胞内源BACE1基因表达,其抑制率与BACE1基因的干扰位点和干扰时间相关.

著录项

  • 来源
    《中国组织工程研究》|2007年第19期|3771-3774|共4页
  • 作者

    张小勤; 李峰; 赵艳; 彭映基; 潘玉春; 崔芳岩; 孟和;

  • 作者单位

    中山大学中山医学院解剖学教研室,广东省广州市,510080;

    中山大学中山医学院解剖学教研室,广东省广州市,510080;

    中山大学中山医学院解剖学教研室,广东省广州市,510080;

    中山大学中山医学院解剖学教研室,广东省广州市,510080;

    上海交通大学农业与生物学院,上海市,200240;

    上海交通大学农业与生物学院,上海市,200240;

    上海交通大学农业与生物学院,上海市,200240;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 R34;
  • 关键词

    RNA干扰; BACE1; 基因; 神经元;

  • 入库时间 2023-07-24 16:10:37

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