貂源绿脓杆菌流行株toxA基因克隆序列分析及原核表达

张传美; 王颖; 秦晓冰; 杨海燕; 秦志华; 单虎

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貂源绿脓杆菌流行株toxA基因克隆序列分析及原核表达

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为了研究貂源绿脓杆菌流行株toxA基因的遗传变异情况,并将toxA基因进行原核表达,本试验以貂源绿脓杆菌DNA为模板,经PCR扩增表达外毒素A蛋白的toxA基因,约1917 bp的片段,将产物克隆与pM D-18T载体并测序.结果表明,12株流行株的序列与GenBank中的标准产毒株PA103株和PA01株的遗传关系较近,显示外毒素A毒性的氨基酸均未发生突变,流行株变异不大.将该基因亚克隆到原核表达载体pET32a,转化BL21(DE3)感受态细胞,经不同浓度的IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE与Western Blot鉴定,结果表明,可产生相对分子量约为78 kDa的表达产物,成功地构建了外毒素A蛋白的重组表达系统.

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来源
《中国兽医杂志》 |2015年第10期|38-41|共4页
作者
张传美; 王颖; 秦晓冰; 杨海燕; 秦志华; 单虎;
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作者单位

青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109;

烟台市动物卫生监督所,山东烟台 264000;

青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109;

青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109;

青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109;

青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109;

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正文语种 chi
中图分类病原细菌;
关键词
绿脓杆菌; toxA基因; 克隆; 序列分析; 原核表达;

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