人TRIM22基因真核表达质粒的构建和表达及TRIM22对Jurkat T细胞增殖的影响

段志坚; 高波; 徐薇; 周倩; 熊思东

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人TRIM22基因真核表达质粒的构建和表达及TRIM22对Jurkat T细胞增殖的影响

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研究TRIM22对Jurkat T增殖的影响,探讨TRIM22分子的生物学效应。分离人外周血单个核细胞,获得其细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增人TRIM22基因,经Nhe I和Hind III双酶切后插入pcDNA3.1/myc-His(-)真核表达载体,并对其进行酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达质粒pcDNA/TRIM22转染Jurkat T细胞,用Western blot方法鉴定TRIM22蛋白表达情况,用CCK-8试剂检测TRIM22对T细胞增殖的影响,用双荧光素酶报告基因方法检测TRIM22对IL-2基因启动子的转录活性,用半定量RT-PCR方法检测TRIM22对IL-2 mRNA表达水平的影响。结果:成功构建了C端带有myc标记的真核表达质粒pcDNA/TRIM22,质粒转染Jurkat T细胞后能够表达TRIM22蛋白,细胞增殖检测结果显示TRIM22能够降低Jurkat T细胞的增殖达30%左右,报告基因检测结果显示TRIM22能够抑制IL-2启动子活性达20%至50%,过表达TRIM22降低IL-2 mRNA表达水平,这些结果为进一步深入研究TRIM22的生物学特性奠定了基础。

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来源
《现代免疫学》 |2008年第4期|285-290|共6页
作者
段志坚; 高波; 徐薇; 周倩; 熊思东;
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作者单位

复旦大学免疫生物学研究所复旦大学上海医学院免疫学系;

上海200032;

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正文语种 chi
中图分类医学免疫学;
关键词
TRIM22; 真核表达; 细胞增殖; IL-2;

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