一种快速提取组织外泌体的分离富集方法

王建立; 张子怡; 秦伟伟; 王程程; 杨瑞

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本文提供一种快速提取组织外泌体的分离富集方法。通过将目标组织用机械法切碎,加入组织消化酶进行组织解离和过滤,将获得的组织细胞悬液依次进行差速离心、超离、尺寸排阻和超滤,实现组织高质量外泌体的富集纯化。组织解离方法比较试验中,采用组织消化酶解离组织得到的蛋白质含量更高,获得的外泌体组织来源的蛋白质污染小。富集小鼠心组织、小鼠肝组织、小鼠肾组织、人结肠癌组织、人乳腺癌组织和动脉粥样硬化组织的外泌体,并对其进行纳米粒径追踪和透射电镜观察。结果显示,外泌体的粒径均在30~150 nm内,结构清晰明确。对小鼠肝组织富集的外泌体进行蛋白质印迹分析。结果显示,阳性蛋白质标志物CD9、ALIX和CD63的表达,TSG101弱表达,阴性蛋白质标志物Calnexin无表达。本方法集合多种分离措施,能够达到分离纯化外泌体的作用,同时简化了分离组织外泌体的步骤,相对于其他方法,全程只需要4~5 h,节省了富集时间,所富集的外泌体纯度高、可溶性杂蛋白质污染小,实用性更加广泛。使用微量组织样本富集的外泌体即可满足后续纳米粒径追踪、蛋白质印迹、透射电镜和转录物组等分析。

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2022年第3期|365-371|共7页
作者
王建立; 张子怡; 秦伟伟; 王程程; 杨瑞;
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作者单位

农业应用新技术北京市重点实验室;

北京农学院植物科学技术学院;

北京102206;

北京恩泽康泰生物科技有限公司;

北京102206;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 Q291;
关键词
组织; 外泌体; 分离; 富集;

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