长双歧杆菌C16 bif黏附基因敲除菌株的构建

谭颖; 陈晓倩; 付恒芳; 朱旭萌; 李春; 刘丽波

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长双歧杆菌C16 bif黏附基因敲除菌株的构建

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长双歧杆菌是定植于人体肠道中的优势菌株,与人体肠道健康密切相关。黏附是长双歧杆菌定植于肠道的前提,研究长双歧杆菌的黏附机制尤为重要。bif黏附基因作为长双歧杆菌的一类胞外黏附因子,其敲除后黏附效力是否丧失尚未明确。本试验利用同源重组技术,以长双歧杆菌为研究对象,构建bif黏附基因敲除突变株,验证该基因的黏附作用。首先以长双歧杆菌C16基因中的bif黏附基因和PBR322为模版,扩增bif黏附基因上、下游同源臂和tet抗性基因,然后分别将它们连接到pMD19-t simple Vecter上,对中间载体pMD19-up、pMD19-down、pMD19-tet进行双酶切,并将回收片段连接到PUC18上构成敲除载体PUC18-up-tet-down。通过电转化的方式导入宿主菌株中,利用同源重组筛选获得长双歧杆菌bif黏附基因缺失菌株。菌落PCR和测序结果均显示bif黏附基因敲除菌株构建成功,为进一步研究长双歧杆菌bif基因的黏附作用奠定基础。

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来源
《中国食品学报》 |2021年第7期|52-59|共8页
作者
谭颖; 陈晓倩; 付恒芳; 朱旭萌; 李春; 刘丽波;
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作者单位

东北农业大学乳品科学教育部重点实验室;

哈尔滨150030;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类矿床学;
关键词
bif; 黏附; 同源重组; 敲除;

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