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信号肽C—端和成熟蛋白N—端氨基酸序列的变化时α—淀粉酶分泌作用的影响

         

摘要

本文利用pAmy413质粒通过定点诱变技术,在α-淀粉酶基因的287和291位分别引入1个G和C,代替原来的T和G,构建成质粒pAmy413B,使成熟的α-淀粉酶N-端(7)Leu(8)Met变为(7)Arg(8)Ile。pAmy413Lα-淀粉酶信号序列因引入1个多酶切点接头而比pAmy413的29个氨基酸增加了13个氨基酸,创造了1个新的信号肽酶I识别窗口Ala-Gln-Ala↓Ser,利用计算机对该信号肽进行了二级结构分析。这两株突变株产酶能力分别为野生株(pAmy413)的3%和36%;胞外α-淀粉酶的分子量同于野生株;末端分析显示,成熟酶第一个氨基酸为Ala,表明信号肽酶I在野生型识别窗口Ala-Ala-Ala↓Ala处切割。结果还表明,B.licheniformisα-淀粉酶在B.

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