采用RACE-PCR 方法,从鲢(Hypophthalmichthys molitrix)头肾SMART cDNA中获得了679 bp IL-8 cDNA序列.结果显示:该序列包含169 bp 的5′非编码区,213 bp 3′端非编码区和297 bp 的开放阅读框;鲢IL-8的开放阅读框编码98个氨基酸残基,其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸.RT-PCR结果显示鲢:IL-8 mRNA主要在胰、肝脏和头肾中表达.将鲢IL-8不含信号肽的成熟多肽克隆到原核融合表达载体pQE30上,转入大肠杆菌M15内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示,重组融合蛋白在分子量约11kD处有一明显表达带,与预期计算的分子量大小相一致.
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