白蚁内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、表达、纯化及酶学性质的研究

秦国梅; 张建珍; 黄艳燕; 韦宇拓; 杜丽琴; 庞宗文; 黄日波

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白蚁内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、表达、纯化及酶学性质的研究

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提取了台湾家白蚁总RNA并反转录获得cDNA,PCR扩增出白蚁内切葡聚糖酶的基因,并将目的基因分别克隆到大肠杆菌和酿酒酵母载体中,构建了产内切-β-1,4-葡聚糖酶的基因工程菌.由于大肠杆菌会有少量的泄漏表达,而所用的酿酒酵母表达载体是本实验室构建带有INU信号肽的表达载体,故都可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子.利用金属镍亲和层析对大肠杆菌表达的内切-β-1,4-葡聚糖酶进行纯化,CMC酶活检测显示纯化酶的最适温度和最适pH值分别为42 ℃、6.5;内切-β-1,4-葡聚糖酶的Vmax为0.071 mg/mL·min,Km值为80.2712 mg/mL.

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来源
《工业微生物》 |2009年第5期|30-38|共9页
作者
秦国梅; 张建珍; 黄艳燕; 韦宇拓; 杜丽琴; 庞宗文; 黄日波;
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作者单位

广西大学生命科学与技术学院;

广西大学生命科学与技术学院;

广西大学生命科学与技术学院;

广西大学生命科学与技术学院;

广西大学生命科学与技术学院;

广西大学生命科学与技术学院;

广西大学生命科学与技术学院;

广西科学院,广西南宁,530004;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
内切-β-1; 4-葡聚糖酶; 台湾家白蚁; 酿酒酵母;

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