黑曲霉葡萄糖氧化酶基因改造及其在毕赤酵母中的表达

聂金梅; 李阳源; 刘金山; 王勇; 唐业

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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因改造及其在毕赤酵母中的表达

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为构建并筛选高效表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株,采用PCR法从黑曲霉基因组中获得葡萄糖氧化酶全长基因(GOD),采用定点突变法和重叠PCR法获得GODmut基因,将其插入到pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-GODmut,经PmeI线性化后,用电击法转化毕赤酵母菌株X33,经大量筛选,获得1株高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GODmut,在此基础上,去除GOD基因的信号肽,用同样的试验方法构建并筛选高效分泌表达的工程菌株X33-pPIC-GODnew,结果表明:X33-pPIC-GODmut的产酶水平为460.3 U/mL,X33-pPIC-GODnew的产酶水平为714.9 U/mL,是前者的1.52倍,该酶的最适作用温度和最适作用pH值分别为40℃和5.0,成功获得1株高效稳定表达的葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母工程菌株.

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来源
《江苏农业科学》 |2018年第20期|17-21|共5页
作者
聂金梅; 李阳源; 刘金山; 王勇; 唐业;
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作者单位

广东溢多利生物科技股份有限公司;

广东珠海519060;

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广东珠海519060;

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正文语种 chi
中图分类基因工程的应用;
关键词
葡萄糖氧化酶; 黑曲霉; 毕赤酵母表达系统; 信号肽;

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