信号肽

摘要： 为提高大肠杆菌异源表达β-葡萄糖苷酶的底物可及性,本研究以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主细胞,使用信号肽OprI、OsmY、PelB、OmpA将纳豆芽孢杆菌的β-葡萄糖苷酶基因bglH锚定到大肠杆菌BL21(DE3)外膜和周质上。然后使用启动子T7、Trc、LacUV5诱导表达Ⅱ型分泌途径的SecB伴侣蛋白,进而实现全细胞催化糖苷型底物水解。本研究通过表征不同细胞定位的β-葡萄糖苷酶活性,发现信号肽PelB分泌效果明显高于其他信号肽,LacUV5启动子与SecB伴侣蛋白组合表达bglH的重组菌株全细胞催化酶活性最高。此外,添加甘氨酸至质量分数为1.0%时,全细胞催化β-葡萄糖苷酶活性最高。并且通过优化诱导条件确定了β-葡萄糖苷酶的最优发酵条件:初始细胞密度(OD_(600))为1.0,发酵温度为25°C,发酵时间为24 h,发酵pH为6.5,最终全细胞催化β-葡萄糖苷酶活性可达2.55 U/ml。

摘要： 本试验运行真核生物分泌蛋白预测流程EuSecPred 2.0在中华绒螯蟹微孢子虫全基因组范围内预测分泌蛋白,同时分析分泌蛋白的序列特征,注释功能。结果表明,分泌蛋白序列长度大多为30~300 aa;信号肽长度为11~23 aa;信号肽切割位点处主要由疏水性氨基酸组成;对预测所得蛋白质功能的注释,发现了多种关键蛋白,如血凝素酯酶、甲基转移酶EZH1和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶等。基序分析发现,信号肽中存在基序S[NS]N[TI][FI]VI[IGD][RG]VRC。预测获得的这些重要分泌蛋白与中华绒螯蟹微孢子虫侵染宿主、调控宿主细胞周期及免疫反应等生理活动相关,可为筛选致病相关候选因子和探究其侵染机理提供重要依据。

摘要： 藤黄节杆菌(Athrobacter luteu)β-1,3-葡聚糖酶(βglⅠ)能够特异性的作用于β-葡聚糖中的β-1,3-糖苷键,在酵母裂解活性上具有突出优势,但是βglⅠ在生产上存在表达低、生产成本高的问题。作者利用无缝克隆技术构建表达载体,实现了βglⅠ在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,并通过比较不同Tat类型和Sec类型信号肽、RBS、5′UTR等表达元件来提高βglⅠ的胞外产量。结果表明,信号肽SPLipA使得βglⅠ表达水平提高了0.4倍,在此信号肽基础上继续比较各RBS和5′UTR序列,其中cry3A 5′UTR使βglⅠ产量高出出发菌株1.2倍。此外,利用Ni2+亲和层析柱纯化βglⅠ并对其酶学性质进行研究,结果表明该酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为6.0,在0~45°C、pH 4.0~9.0的范围内稳定性较好,比活为973 U/mg。

摘要： 猪胸膜肺炎放线杆菌细胞毒素ApxⅡ(Actinobacillus.pleuropneumoniae toxin,Apx)作为亚单位疫苗可较好抵抗养猪业五大疾病之一的猪胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)。谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)是食品级安全微生物,疫苗蛋白表达潜力巨大。为实现重组ApxⅡ在谷氨酸棒杆菌中分泌表达,截取全长ApxⅡ中抗原表位序列获得ApxⅡ截短片段(ApxⅡ#5)并将其构建至谷氨酸棒杆菌表达载体pXMJ19中表达。为进一步提升ApxⅡ分泌表达水平,优化ApxⅡ表达盒中启动子和信号肽元件。结果表明,全长ApxⅡ未在谷氨酸棒杆菌中表达,截短ApxⅡ可在其中分泌表达。为进一步提高产量,通过启动子筛选,选用诱导型启动子tac,其表达强度为全合成启动子H36的1.58倍;通过信号肽筛选,选用CspB信号肽,其分泌表达强度为对照组CgR0949信号肽的5.48倍。在谷氨酸棒杆菌中表达截短ApxⅡ摇瓶水平产量达到51.1 mg·L^(-1),可与猪抗ApxⅡ阳性血清特异性免疫。研究结果可为兽用疫苗产业提供质量可靠、低成本表达体系。

摘要： 背景与目的:信号肽(signal peptide,SP)是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链,能够调节前体蛋白的折叠和转移,在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来,靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞在白血病治疗中取得了重大突破,关于CAR结构的胞内域改造方面也有诸多研究,而对单链可变片段(scFv)的N端SP研究进展缓慢。探讨4种不同SP的CD19-CAR在T细胞表面表达及对CD19+靶细胞的杀伤作用。方法:通过基因合成和分子克隆技术,构建含4种不同SP(SP1、SP2、SP3、SP4)的靶向CD19抗原的CAR载体,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染T细胞,利用流式细胞术检测细胞转染效率,采用钙黄绿素释放法检测该细胞对靶细胞的杀伤作用,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌水平。结果:成功构建4种不同SP的重组慢病毒载体,将4种慢病毒转导T细胞后,结果显示,分别有20.9%、22.6%、31.5%、38.6%的T细胞表面能够表达CD19-CAR(分别命名为SP1-CD19、SP2-CD19、SP3-CD19和SP4-CD19细胞),进一步杀瘤实验证明,SP4-CD19细胞对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞(P0.05)。结论:SP4-CD19细胞的转染效率、细胞因子分泌水平及对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用均显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞,该研究成果为CAR-T优化改造及其高效的临床应用奠定了科学基础。

摘要： 【目的】探索嗜热α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGTase)在枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis RIK1285)中的高效胞外表达条件。【方法】以来源于枯草芽胞杆菌的173种信号肽为基础构建信号肽文库,筛选获得9条表达效率更高的信号肽,其中citH信号肽引导分泌效率最高。在此基础上,为进一步优化α-CGTase的分泌表达,对信号肽citH的Gly2、Asn3及Thr4进行饱和突变,并比较不同突变体的引导分泌效率。【结果】突变体G2R-NK-T4LCGT的引导分泌效率最高,重组枯草芽胞杆菌的胞外α-CGTase活力高达(14.2±0.11)U·mL^(−1),相比未突变信号肽[(9.6±0.29)U·mL^(−1)],分泌效率提高了47.9%;是野生菌株嗜热地芽胞杆菌Geobacillus caldoxylosilyticus.CHB1(0.66 U·mL^(−1))的21.5倍。重组α-CGTase的最适反应pH值为6.0,最适反应温度为60°C,在50°C以内稳定;Mg^(2+)、Ca^(2+)对α-环糊精酶活性具有一定的激活作用。【结论】信号肽对环糊精酶在芽胞杆菌中的高效表达具有重要影响,为外源蛋白在芽胞杆菌中的表达提供一定借鉴。

摘要： 目的鉴定马尔尼菲篮状菌(TM)的分泌蛋白,并初步分析其生物学功能。方法基于质谱技术对TM菌株(ATCC18224)培养上清进行分泌蛋白组鉴定,利用生物信息学手段预测所鉴定蛋白的亚细胞定位和信号肽剪切位点,以及分析其生物学功能和信号通路。结果通过2次独立重复实验,共鉴定得到21个分泌蛋白;功能注释结果显示分泌蛋白主要参与超氧化物代谢、压力应对、金属离子转运等生物学过程;预测结果显示,分泌蛋白主要定位于细胞核、细胞外、质膜、线粒体和细胞膜,且仅有6个蛋白存在信号肽序列。结论TM分泌蛋白可能与其免疫逃逸、真菌毒性密切相关,且部分蛋白功能尚不明确,需要深入研究。

摘要： 目的在CHO-S细胞中表达抗白细胞分化抗原47(CD47)抗体Hu5F9,并对抗体纯化后进行鉴定。方法将编码Hu5F9抗体轻、重链基因构建至真核表达载体,瞬转CHO-S细胞进行表达,取细胞上清检测后利用其人源Fc标签纯化抗体蛋白,并进行Western blot鉴定。结果经双酶切及基因测序验证Hu5F9载体构建成功,细胞上清经SDS-PAGE检测,可见抗体轻链、重链和完整抗体条带,抗体纯化后Western blot鉴定结果显示条带大小与预期一致。结论在CHO-S细胞中成功表达了抗CD47抗体Hu5F9,为后续的药物研发提供研究依据。

摘要： 胶原蛋白独特的三股螺旋结构,使其具有良好的力学性能和生物相容性,在生物医学材料等方面有广泛应用。利用微生物表达重组胶原蛋白,具有发酵周期短、成本低、便于遗传操作等优点,近些年发展迅速,但分泌带有三股螺旋结构的重组胶原蛋白仍是研究的难点。该研究以来源于化脓性链球菌的胶原蛋白V-B为对象,搭建了谷氨酸棒杆菌分泌表达重组胶原蛋白的平台。在重组胶原蛋白V-B前端引入6种不同信号肽(CspB、PorB、Cg1514、CgR0949、Cg2052或TorA),构建重组表达载体,并转入食品级表达宿主谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum ATCC 13032中,结果显示PorB信号肽介导的分泌效果最好。此外,对PorB信号肽介导的分泌表达进行培养基、起始诱导菌浓度、诱导时长、IPTG浓度、溶氧的优化,最终胶原域B在摇瓶水平产量达到30 mg/L,是优化前的3倍,并通过圆二色谱表征,验证其正确折叠为三股螺旋。该研究为重组胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中的高效分泌表达奠定了基础。

摘要： 活性肽是一类具有皮肤护理功效的功效成分,近几年为市场和消费者所推崇。为了解全球肽原料在个人护理用品中的应用现状,文章回顾了肽的简短应用历史,以及在个人护理用品中所应用肽的定义,比较了我国《已使用化妆品原料目录(2021年版)》和《国际化妆品原料字典和手册(2018版)》中肽原料的情况,调研了2016—2020年全球个人护理用品市场上含有肽成分的产品情况及肽应用广泛的企业。进一步研究了使用频率较高的14种肽,并按其作用机理分为三类:信号肽、神经递质抑制肽、载体肽,还简述了其他一些活性肽。文章还对肽在个人护理用品中的应用趋势进行了展望,以期为功效性肽原料的进一步研究开发和应用提供一定的参考价值。

摘要： 猪乙型脑炎病毒(JEV)是一种人畜共患的虫媒病毒,具有传染性和危险性,研究这类病毒需要一种安全的研究代替工具,假型病毒技术为解决这些问题提供了一种有效的研究手段.为了构建1种高包装滴度的JEV假型病毒,设计并包装出了3种乙脑假型病毒(JEVpv),分别是融合表达了水泡口炎病毒(VSV)囊膜蛋白强信号肽和JEV囊膜蛋白(ME)的VSVMEpv,带有乙脑自身弱信号肽及ME蛋白的SPMEpv,以及不带有信号肽的MEpv.蛋白免疫印迹结果显示,3种JEVpv均能成功表达JEV的E蛋白及HIV的p24蛋白;透射电镜观察显示,3种JEVpv的粒子直径在120～180nm;Realtime RT-PCR结果显示,VSVpv的包装滴度是MEpv的17倍,而SPMEpv的包装滴度是MEpv的6倍,说明信号肽能够显著增强病毒的包装滴度,同时强信号肽的增强效果高于弱信号肽;对绿色荧光蛋白及荧光素酶的表达检测显示,3种JEVpv均能感染293T及BHK-21细胞,且感染滴度没有显著差异(P＞0.05),说明信号肽不影响JEVpv的感染能力.因此,我们的研究提供了一种经济高效的日本乙型脑炎假型病毒的包装方法,为乙脑的入侵机制研究奠定了基础.

摘要： 木聚糖酶能够催化木聚糖的β-1.4-糖苷键水解生产木糖，在饲料中添加木聚糖酶能够增加饲料的黏度、提高饲料消化吸收利用率和减少排泄物对环境的污染。但是利用微生物自身产生的酶无法满足工业化应用需求，因此工业化水平的异源表达成为产酶的主要方式。本研究分别构建了含有牛β-酪蛋白信号肽和酿酒酵母α交配因子信号肽的木聚糖酶酵母表达载体。转化毕赤酵母后筛选出单拷贝转化子，在转录和翻译水平对这两种信号肽引导蛋白分泌的能力进行了系统比较。

摘要： 本研究分别构建了携带黑曲霉β-葡萄糖苷酶自身信号肽和腮腺分泌蛋白信号肽的真核细胞表达载体，并在CHO细胞中进行分泌表达，结果发现，两个载体表达的酶活性均不高，其中携带黑曲霉β-葡萄糖苷酶自身信号肽的重组酶活性略低于猪腮腺分泌蛋白信号肽的重组酶。下一步工作可以考虑在猪的腮腺细胞中表达这两个改造的真核表达载体并比较它们的表达差异，进而为有效生产并利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶奠定更好的基础。

摘要： 本文根据GcnBank上注册的短小乳酸杆菌S-层蛋白基因序列设计一对引物，采用PCR法获得了S-层蛋白信号肽基因，将其克隆到pMDl8-T载体并测序。序列分析表明序列全长为370bp，其中编码信号肽部分的90bp的碱基与GenBank中的完全相同，生物信息学分析也表明这是一段信号肽基因，氨基酸序列分析也表明它具备信号肽的典型特征，结果表明本试验克隆得到了短小乳酸杆菌S-层信号肽基因。

摘要： 根据GenBank上注册的短小乳酸杆菌S-层蛋白基因序列设计一对引物,采用PCR法获得了S-层蛋白信号肽基因,将其克隆到pMD18-T载体并测序.序列分析表明序列全长为370bp,其中编码信号肽部分的90bp的碱基与GenBank中的完全相同,生物信息学分析也表明这是—段信号肽基因,氨基酸序列分析也表明它具备信号肽的典型特征,结果表明本试验克隆得到了短小乳酸杆菌S-层信号肽基因.

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征给养猪业造成了巨大的经济损失，是危害养猪业的重要传染病之一。持续性感染可能是控制该病的一个最大的障碍。为了研究GP5蛋白的信号肽和非中和表位对其诱导中和抗体的影响，构建了表达缺失非中和表位(A)和/或信号肽序列的3个重组腺病毒，即：表达缺失非中和表位(aa27-31)的GP5(rAd-GP5△27/31)、表达缺失A表位及A表位与中和表位(B)中间的序列(aa27-36)的GP5(rAd-GP5△27/36)、以及表达缺失B表位之前的序列(包括信号肽，aa2-36)的突变体(rAd-GP5△2/36)，利用BALB/c小鼠评估它们诱导的体液免疫应答特性。结果为：3株重组体接种小鼠后产生了明显的抗PRRSV抗体的应答和明显的中和抗体，其滴度达到1∶30、1∶19、1∶14(56dpi)，明显高于表达野生型GP5的重组腺病毒rAd-GP5诱导的中和抗体(1∶8)。表明去除GP5蛋白A表位能提高其诱导产生中和抗体，而且，信号肽序列及A表位周围的序列能影响中和抗体的产生水平。

摘要： 本文综述了小RNA促心肌肥大或抗肥大的研究进展,并对细胞内信号肽的级联反应、泛素化,以及肌节组成的影响和促进细胞间通讯的作用进行了阐述。

摘要： 本文首先从六种不同信号肽amyX,bpr,vpr,yvgO,wapA和nprE中筛选出最适合碱性果胶酶胞外表达的信号肽bpr,胞外酶活达到313.7 UmL-1.在此基础上使用强启动子P43表达碱性果胶酶,将碱性果胶酶产量提高到446.3 UmL-1.最后,通过3L罐发酵,碱性果胶酶胞外产量达到632.6 UmL-1,首次实现碱性果胶酶在枯草表达系统中的高效表达.

摘要： 本实验利用RT PCR技术首次克隆到牦牛的ZP3基因的编码区序列共1266 by，编码421个氨基酸，包含N-端22个氨基酸的信号肽。与牛相应区域比对发现，共存在20个碱基差异，12个同义突变，8个错义突变，而8个氨基酸的差异有可能发生ZP3蛋白质结构和功能的变化，也证实了透明带卵巢组织的特异性。

摘要： 公开了融合蛋白和编码融合蛋白的核酸分子。公开了包含与IL-15蛋白序列连接的非IL-15信号肽的融合蛋白和包含与非IgE蛋白序列连接的IgE信号肽的融合蛋白。公开了包含所述核酸分子的载体以及包含所述载体的宿主细胞；还公开了编码融合蛋白的重组疫苗和减毒活病原体及其使用方法。公开了在给予IL-15和CD40L之后，在有或没有免疫原的情况下的免疫调节效应，也公开了用于传递所述蛋白的各种核酸分子及其组合物与所述组合物的使用方法。

摘要： 本发明提供了翡翠贻贝抗菌肽Pernalins、抗菌肽Pernalins的信号肽、抗菌肽Pernalins的编码基因及应用，所述翡翠贻贝抗菌肽Pernalins选自Pernalin A、Pernalin B、Pernalin C和Pernalin D中的一种或几种；所述Pernalin A、Pernalin B、Pernalin C和Pernalin D的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4所示。翡翠贻贝在感染副溶血弧菌后，血淋巴细胞中的抗菌肽Pernalins能够响应免疫防御，长时间、持续的起到免疫防御作用，维持机体免疫反应。

摘要： 本发明提供了一种引入信号肽的抗菌肽串联基因及其应用，涉及抗菌肽技术领域。本发明提供了一种引入信号肽的抗菌肽串联基因、串联基因的构建方法、包含所述串联基因的重组表达载体和抗菌重组毕赤酵母。本发明通过将来源于扣囊复膜孢酵母的2个信号肽经过序列改良和优化后，用于鸡源抗菌肽的在毕赤酵母中串联表达，得到抗菌重组毕赤酵母，通过发酵罐发酵，实现抗菌肽产品的高密度发酵和高效表达，实现很强的抑菌效果。

摘要： 本发明属于蛋白质工程和基因工程领域，涉及一类强分泌性信号肽增强小肽模序及其应用。本发明的强分泌性信号肽增强小肽模序，其具有如下通式的氨基酸序列：M（αXβYγ/αYβXγ）n，其中X代表酸性氨基酸；Y代表碱性氨基酸；α为0‑2个中性氨基酸；β代表0‑2个中性氨基酸；γ代表1‑10个中性氨基酸；n为1‑3。本发明所述的强分泌性信号肽增强小肽模序的应用，即将本发明所述的强分泌性信号肽增强小肽模序用于构建一种增强普通信号肽分泌能力的载体，以提高其分泌表达外源蛋白的方法。

摘要： 本发明属于蛋白质工程和基因工程领域，涉及一类强分泌性信号肽增强小肽模序及其应用。本发明的强分泌性信号肽增强小肽模序，其具有如下通式的氨基酸序列：M(αXβYγ/αYβXγ)

摘要： 本发明的一个目的是提供新型信号肽以及利用所述信号肽有效地积累期望蛋白的技术。还提供编码包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或相对于SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸的缺失、取代、添加或插入的氨基酸序列的肽的核酸。

摘要： 公开了融合蛋白和编码融合蛋白的核酸分子。公开了包含与IL－15蛋白序列连接的非IL－15信号肽的融合蛋白和包含与非IgE蛋白序列连接的IgE信号肽的融合蛋白。公开了包含所述核酸分子的载体以及包含所述载体的宿主细胞；还公开了编码融合蛋白的重组疫苗和减毒活病原体及其使用方法。公开了在给予IL－15和CD40L之后，在有或没有免疫原的情况下的免疫调节效应，也公开了用于传递所述蛋白的各种核酸分子及其组合物与所述组合物的使用方法。

摘要： 本发明提供了翡翠贻贝抗菌肽Pernalins、抗菌肽Pernalins的信号肽、抗菌肽Pernalins的编码基因及应用，所述翡翠贻贝抗菌肽Pernalins选自Pernalin A、Pernalin B、Pernalin C和Pernalin D中的一种或几种；所述Pernalin A、Pernalin B、Pernalin C和Pernalin D的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：4所示。翡翠贻贝在感染副溶血弧菌后，血淋巴细胞中的抗菌肽Pernalins能够响应免疫防御，长时间、持续的起到免疫防御作用，维持机体免疫反应。

摘要： 本发明公开了一种信号肽在增强重组猪干扰素和胸腺肽融合蛋白高效表达的应用。所述信号肽选自猫科干扰素ω信号肽，其包含23个氨基酸序列，该信号肽序列用于引导猪干扰素α1和胸腺肽α1的融合蛋白(poIFNα1‑Tα1)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中高效表达。与猪干扰素α1(poIFNα1)自身信号肽相比，携带猫科干扰素ω信号肽的重组猪干扰素α1和胸腺肽α1(rpoIFNα1‑Tα1)的融合蛋白在CHO细胞中的分泌表达显著提升。

摘要： 本发明提供了一种引入信号肽的抗菌肽串联基因及其应用，涉及抗菌肽技术领域。本发明提供了一种引入信号肽的抗菌肽串联基因、串联基因的构建方法、包含所述串联基因的重组表达载体和抗菌重组毕赤酵母。本发明通过将来源于扣囊复膜孢酵母的2个信号肽经过序列改良和优化后，用于鸡源抗菌肽的在毕赤酵母中串联表达，得到抗菌重组毕赤酵母，通过发酵罐发酵，实现抗菌肽产品的高密度发酵和高效表达，实现很强的抑菌效果。