分泌蛋白

摘要： 目的通过不同方法在基因及蛋白质水平探究CRELD2在小鼠各组织中的表达水平,为研究CRELD2在各组织中的生物学功能提供依据。方法通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western Blot,WB)测定C57BL/6J小鼠的肝、胰腺、胃、肺等组织中CRELD2 mRNA与CRELD2蛋白的含量,实现在不同水平上探究CRELD2在各组织中的表达情况。结果RT-PCR及WB测定结果显示,CRELD2在小鼠的肝、胰腺、胃、肺组织中均有表达,表达量在各组织间存在差异;基因水平的相对表达量排序为:胰腺>胃>肝>肺;蛋白水平的相对表达量排序为:胰腺>肝>胃>肺。检测结果表明CRELD2在各组织中普遍存在,但组织间相对表达量的排序并不完全一致,推测与转录调控相关。结论CRELD2在小鼠的肝、胰腺、胃、肺组织中均有表达,且相对表达量在基因与蛋白质水平不完全平行。

摘要： 从数据库中检索出CG13551基因氨基酸序列信息,生理生化分析显示:SK_(66)蛋白含有107个氨基酸残基,分子量约11948.3Da,理论等电点为8.96。该蛋白中,甘氨酸(Gly)含量最高,为14.0%;其次为谷氨酸(Glu)和丙氨酸(Ala),分别为11.2%和9.3%。SK_(66)蛋白是一个亲水蛋白质但不是一个分泌蛋白。SK_(66)蛋白不存在跨膜结构域。蛋白质二级结构包括57.96%α-螺旋、10.28%β-折叠、β-转角以及31.78%无规则卷曲等构象。进化树显示,主要分成两类,较为高等的动物分为第一类,包括人、小鼠、河豚;而较为低等的动物归为一类,包括斑马鱼、果蝇。这与物种的进化程度相一致。

摘要： 分泌蛋白究竟在哪种核糖体合成?囊泡又是如何精准定位的?从核糖体、内质网、高尔基体的结构和功能出发,对真核细胞分泌蛋白合成和运输的过程作一简介。

摘要： 本试验运行真核生物分泌蛋白预测流程EuSecPred 2.0在中华绒螯蟹微孢子虫全基因组范围内预测分泌蛋白,同时分析分泌蛋白的序列特征,注释功能。结果表明,分泌蛋白序列长度大多为30~300 aa;信号肽长度为11~23 aa;信号肽切割位点处主要由疏水性氨基酸组成;对预测所得蛋白质功能的注释,发现了多种关键蛋白,如血凝素酯酶、甲基转移酶EZH1和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶等。基序分析发现,信号肽中存在基序S[NS]N[TI][FI]VI[IGD][RG]VRC。预测获得的这些重要分泌蛋白与中华绒螯蟹微孢子虫侵染宿主、调控宿主细胞周期及免疫反应等生理活动相关,可为筛选致病相关候选因子和探究其侵染机理提供重要依据。

摘要： 新发现的肝富集基因1(live enriched-gene 1,LEG1)在斑马鱼肝脏发育及鸭嘴兽的先天性免疫应答过程中发挥着重要的调控作用,但是LEG1在真兽亚纲物种(如小鼠和人)中的功能鲜有报道。本研究以猪为模型,对猪的肝富集基因1a蛋白(pLEG1a)进行了分子鉴定。实验首先制备并验证了pLEG1a蛋白的兔源多克隆抗体,并验证了pLEG1a在猪唾液腺和肺部的表达。同时,在唾液中检测到了pLEG1a蛋白的信号,表明pLEG1a蛋白可能是一种分泌蛋白。此外,当在HEK293T细胞中异位表达pLEG1a时,可在细胞培养液中检测到pLEG1a蛋白,进一步证明了pLEG1a是一种分泌型蛋白。另外,糖基化实验显示,唾液及HEK293T细胞中的pLEG1a存在糖基化条带,且这一条带可以通过糖基化酶去除,表明pLEG1a是一种N-糖基化蛋白。综上所述,本研究探究了pLEG1a蛋白与其他物种(尤其是真兽亚纲动物)LEG1蛋白在表达谱、糖基化和分泌能力方面的相似性,并且提出pLEG1a可能是研究真兽亚纲物种LEG1基因的良好模型。

摘要： 棘孢木霉(Trichoderma asperellum)作为一种生防菌,在植物病害的防控中具备较高的开发以及利用价值.根据棘孢木霉CBS 433.97菌株全基因组测序获得的12557个蛋白序列,利用SignalP、TargetP、TMHMM、WoLF PSORT和big-PI Predictor生物信息学软件和预测程序依次进行筛选,最终获得485个具有典型特征的分泌蛋白序列.进一步将485个分泌蛋白与碳水化合物活性酶数据库进行比对、半胱氨酸含量分析、与病原物-寄主互作数据库比对终获得137个蛋白;进一步筛选<300氨基酸的小分子蛋白作为候选效应蛋白,最终获得15个蛋白,其中1个为碳水化合物结合模块家族蛋白,1个为碳水化合物酯酶蛋白,其余13个均为假定蛋白.研究结果为进一步研究棘孢木霉基因的作用机理及其后续的改造利用提供了一定的参考.

摘要： 目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并分析mAb的特异性。方法PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白。重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系。以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb。ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性。结果本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了MPT64蛋白。亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白。该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2。中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb。该mAb的亲和力为2.813×10^(-7) g/mL,属于IgG 1亚类。MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白。结论本研究制备了MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础。

摘要： 细胞中部分蛋白以分泌的形式进行表达,大部分分泌蛋白要进入由内质网和高尔基体组成的分泌通道进行加工和运输。分泌蛋白进入内质网有两种途径:一种是共翻译易位,另一种是翻译后易位。这两种方式的运输机制不完全相同,需要的组件也有所区别。共翻译易位机制研究比较清楚,但对翻译后易位的研究还不全面。本文对翻译后易位目前研究现状进行综述,以期提供一定的参考。

摘要： 目的进一步确证呼吸道感染常见细菌分泌结核分枝杆菌MPT64蛋白或抗原类似物的情况,为结核病试验诊断研究提供循证依据。方法选取2019年3月至2020年12月清远市清新区人民医院送检的合格痰标本80株培养分离株,依细菌分离时间先后将样本分为训练集样本组50株和测试集样本组30株。取ATCC25923金黄色葡萄球菌、ATCC29213金黄色葡萄球菌、ATCC25922大肠埃希菌、ATCC35218大肠埃希菌、ATCC27853铜绿假单胞菌、ATCC29212粪肠球菌、ATCC1766嗜麦芽窄食单胞菌等标准参考株和肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌、奇异变形杆菌、阪崎肠杆菌、阴沟肠杆菌等80株痰样本临床分离株之血平板培养菌落生理盐水冲刷液,应用胶体金免疫法检测冲刷液MPT64。应用频数分布分别对训练集样本、测试集样本和全部检测样本进行统计学描述,计算其MPT64阳性检出率。结果在7株标准参考株中,仅ATCC29212粪肠球菌菌落生理盐水冲刷液MPT64检测阳性;在80株临床分离株中,肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、金黄色葡萄球菌菌落生理盐水冲刷液MPT64检测阳性率分别为24.0%(6/25)、15.0%(3/20)、35.7%(5/14)、40.0%(2/5),9株大肠埃希菌、3株鲍曼不动杆菌和各1株的表皮葡萄球菌、奇异变形杆菌、阪崎肠杆菌、阴沟肠杆菌之冲刷液MPT64检测阴性,痰液常见细菌冲刷液MPT64检测总体阳性率为20.0%(16/80)。结论不少常见呼吸道感染性细菌菌种可致MPT64检测阳性,在结核病诊疗中直接检测呼吸道样本MPT64时,宜结合其普通细菌检测结果进行综合分析。

摘要： 目的鉴定马尔尼菲篮状菌(TM)的分泌蛋白,并初步分析其生物学功能。方法基于质谱技术对TM菌株(ATCC18224)培养上清进行分泌蛋白组鉴定,利用生物信息学手段预测所鉴定蛋白的亚细胞定位和信号肽剪切位点,以及分析其生物学功能和信号通路。结果通过2次独立重复实验,共鉴定得到21个分泌蛋白;功能注释结果显示分泌蛋白主要参与超氧化物代谢、压力应对、金属离子转运等生物学过程;预测结果显示,分泌蛋白主要定位于细胞核、细胞外、质膜、线粒体和细胞膜,且仅有6个蛋白存在信号肽序列。结论TM分泌蛋白可能与其免疫逃逸、真菌毒性密切相关,且部分蛋白功能尚不明确,需要深入研究。

摘要： 由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的豆科、葫芦科、茄科等100多种植物根腐病、茎腐病、茎基腐病等,严重影响着上述植物的健康生长,给生产生活造成了重大经济损失.F.oxysporum属于半知菌类真菌,是一种以土壤习居为主要特征的植物病原真菌,广泛分布于世界各地.前人研究发现,F.oxysporum的主要致病机制在于侵染并破坏寄主植物的维管束组织,从而导致植物不能实现正常的营养和水分运输功能,引起植物根腐、茎腐、茎基腐等症状,严重时甚至造成植株萎蔫死亡,严重影响着植物的产量和品质.同时,前人研究表明,植物病原真菌、卵菌以及细菌中存在着大量的分泌蛋白,其在侵染植物的过程中发挥着重要的作用,不仅有助于实现其对植物的侵染、定殖和扩散,而且有助于形成对抗植物免疫防卫反应的效应分子、信号分子和诱饵蛋白.然而,对于尖孢镰刀菌的分泌蛋白尚未明确,因此本研究以全基因组序列中已经公布的尖孢镰刀菌菌株(F.oxysporum f.sp.lycopersici4287)中的蛋白序列为基础数据,以真菌分泌蛋白所具有的特征(N-端含有信号肽、不含有跨膜结构域、没有GPI锚定位点、将蛋白分泌在胞外)为依据,利用SignalP v3.0、ProtCompB v9.0、TMHMM v2.0、big-PI Fungal predictor、TargetP v1.1等生物信息学分析程序筛选、获得分泌蛋白,同时,对其氨基酸组成及分布、信号肽长度大小、信号肽切割位点等特征进行分析,结果表明:尖孢镰刀菌中分泌蛋白数量为778个,其氨基酸长度多集中于101～400AA,所占比例为57.07％,氨基酸组成中以G(甘氨酸)最多,所占比例为9.20％;信号肽长度以16～21aa最多,所占比例为81.49％,信号肽氨基酸残基中以P(脯氨酸)最多,所占比例为9.12％;信号肽切割位点-3～3氨基酸组成中最多的分别是T(苏氨酸)、S(丝氨酸)、T、A(丙氨酸)、S、S,信号肽切割位点属于T-X-A类型,属于SPⅠ型信号肽识别位点,具有相对保守性特点.

摘要： 稻曲病已上升为中国的三大水稻病害之一,其病原菌特异侵染水稻花丝形成球状病原体,即稻曲球.该病害不仅影响水稻产量和稻米品质,而且稻曲球含有稻曲毒素严重威胁人畜健康.然而,目前对稻曲病菌的致病机制仍不明确.利用转录组学分析获得稻曲病菌侵染水稻后高度诱导表达的基因信息,从中筛选到一个在侵染过程中诱导表达的编码分泌蛋白的基因Uv2169.该基因在本氏烟和水稻中表达，均能引起本氏烟叶片和水稻原生质体的细胞死亡。有趣的是，只有带有信号肤的全长Uv2169蛋白能引起本氏烟叶片细胞死亡，而不带信号肤的成熟蛋白不能引起叶片细胞死亡。同时，Uv2169能抑制本氏烟和拟南芥的免疫反应，包括活性氧爆发、脐服质积累和防御相关基因表达。这些结果说明，Uv2169可能具有激发或抑制植物免疫反应的双重功能，而是否激发或抑制免疫可能与Uv2169的表达量相关。

摘要： 本研究在自主完成的大丽轮枝菌高毒力菌株VDG1全基因组测序基础上，开展大丽轮枝菌分泌蛋白组预测和分析，筛选与致病相关的靶标基因。经过研究表明，大丽轮枝菌基因组编码的分泌蛋白基因具有基因簇的特点，这些基因簇含有大量的潜在毒力因子，且与大丽轮枝菌侵染过程密切相关，是大丽轮枝菌重要的分泌型毒力靶标基因。同时，本研究从基因组层面上分析了大丽轮枝菌分泌蛋白基因的组成和特性，为进一步筛选和鉴定大丽轮枝菌分泌型毒力因子提供理论依据。

摘要： 分别在正常环境和限铁环境下培养1型鸭疫里默氏杆菌，提取分泌蛋白。应用双向电泳和质谱技术比较在两种培养环境下鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白的表达差异。结果显示，在限铁环境下鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白中表现出表达量上升的蛋白质点共有23个，选取差异明显的13个点做质谱分析，这13个蛋白质点分别代表7种蛋白质，其中1个是Ⅲ型纤维连接蛋白，1个是分泌蛋白家族，1个是酶类，1个是亮氨酸富集蛋白质，4个是鸭疫里默氏杆菌假想蛋白，4个是似半乳糖结合区域蛋白，另外1个是延伸因子，参与蛋白质合成过程。经过进一步分析比较，选取以上蛋白质中Mascot软件得分较高的两种蛋白质进行表达，通过western-blot分析其免疫原性，结果表明，两种候选蛋白质均有良好的免疫反应性，有望成为新的亚单位疫苗的候选成分，也可作为研制诊断试剂的候选抗原。

摘要： 由病原菌产生的分泌蛋白与寄主受体之间的反应是二者互作机制的核心。植物病原菌能够产生与寄主中特定蛋白的序列或者结构相似的分子从而模仿这些蛋白以欺骗寄主的免疫系统或者调控寄主的代谢途径使之偏利于己。

摘要： 1957年将衣原体归类为细菌学范畴.根据被检株全长16S rRNA和23S rRNA基因的同源性将衣原体在微生物分类中建立了独立的衣原体门、衣原体纲和衣原体目(Chlamydiales),并成为一门独立的学科即衣原体学.衣原体目中分为8个科(Family)、11个属(Genus)和21个种(Species).两种新的衣原体最近也被分离出——从禽类中分离的C.gallinacea和从野生鸟类中分离的C.avium,可能引起人类人兽共患疾病.当Cps在细胞内时，需要复杂的适应系统和多种机制来确保系统的稳定性，并允许Cps在不同种属细胞内和各种不同因素下发育。这是真核生物和原核生物相互联系和相互作用的一个独特的例子。对Cps和真核生物内环境相互作用的分子机制的进一步研究具有理论和应用价值，从而为确定关键蛋白靶向药物治疗衣原体感染成为可能。

摘要： 本文将结核分枝杆菌的一个功能未知的分泌蛋白Rv3402c过表达于模式生物耻垢分枝杆菌中,以期研究宿主-细菌之间的相互作用.通过Western-blot检测到在诱导条件下,Rv3402c能够稳定表达.结果表明,表达重组Rv3402c的耻垢分枝杆菌(重组菌)的胞外生长状况与转入空载体的耻垢分枝杆菌(对照菌)的并无差异.但是Rv3402c能够显著提高腐生生长的城垢分枝杆菌在巨噬细胞U937中的存活率，同时诱导U937的裂解。

摘要： 在我国根结线虫的危害中,以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)分布最广泛、危害最严重.分泌寄生性蛋白在根结线虫致病过程中起着关键作用,相关研究表明线虫分泌蛋白通过模拟植物的蛋白质,以达到寄生目的.了解根结线虫致病过程所分泌的蛋白质和效应子的功能已成为植物线虫研究热点.南方根结线虫基因组测序完成和生物信息学的不断发展,为根结线虫效应子研究提供了有利条件.从Genbank下载得到全部南方根结线虫基因组9538个contig，使用软件Genscan对其进行预测，所得编码蛋白质序列(protein-coding sequence)为17345个；然后通过Signal P3.0和TMHMM等软件分析信号肽和跨膜区，得到推测的分泌蛋白为4173个。将自主预测得到的蛋白质利用BLASTp与相关研究中预测的蛋白质(来源于Meloidogyne incognita genome dataand tools，2009)进行对比，其中同源性较高的蛋白质2342个；再将其与南方根结线虫的EST数据库进行比对，其中同源性较高的有495个，这些蛋白可以作为南方根结线虫候选分泌蛋白。下一步将采用RNAi等技术手段明确它们的确切功能，以便最终阐明南方根结线虫的致病机理。

摘要： 生长分化因子11(GDF11)是转化生长因子pTGF-因超家族、myostatin/GDF1l亚家族的一种分泌蛋白。GDF1l具有调控中轴骨骼形态的功能，其突变可导致小鼠脊椎数的增多。本研究在前期猪GDF11 cDNA和内含子2克隆的基础上，对内含子1进行了测序，并其特征进行了描述。短散在重复序列SINE属于带polyA的逆转录转座子，长度500 bp以下，在人基因组中大约有10万拷贝。转座子的插入可能会引起插入诱变、基因缺失、重排和双链断裂(DSBs)。本试验旨在研究猪GDF11内含子1不同插入片段之间的进化关系，为进一步揭示其与猪体长或其他性状的关系奠定基础。

摘要： 牛分枝杆菌(mycobacterium bovis)是分枝杆菌复合物成员,感染牛、人、獾猪、长颈鹿等多种动物.牛分枝杆菌在人与动物之间的相互传播严重威胁了公共安全,也为防控增加了难度.炎症复合体作为天然免疫的重要组成部分,在机体防御牛分枝杆菌感染过程中发挥至关重要的作用.研究表明,牛分枝杆菌可激活AIM2炎症复合体,分泌的ESAT-6激活NLRP3炎症复合体,释放促炎因子,如IL-1β,抑制该菌的生长.炎症复合体的激活需要两步：信号1诱导IL-1β前体等蛋白的表达（称为致敏），信号2激活caspase-1加工IL-1β前体成为活性形式。钾离子外流、新蛋白质的合成和去泛素化显著抑制感染牛分枝杆菌的THP-1细胞分泌IL-1β，同时抑制IL-1β前体在胞浆内的蓄积，表明这三种因素可能通过抑制致敏参与炎症复合体激活的调控。IL-1β的分泌受到的抑制作用比IL-1β前体的蓄积更加敏感，在较低浓度即表现出明显抑制作用。

摘要： 本发明公开了一种稻瘟菌分泌蛋白的提取方法及应用shotgun技术研究其分泌蛋白质组的方法，包括以下步骤：S1.稻瘟菌分生孢子的培养：将稻瘟菌菌丝接种至PDA培养基中进行培养；向培养基中加入无菌水，捣碎菌丝，转至西红柿燕麦培养基中，涂抹均匀，28°C下光照培养2～4d；将培养基表面菌丝打断，再加入无菌水，洗去培养基表面菌丝，28°C下光照培养2～4d进行产孢；加入无菌水进行冲洗，收集分生孢子，过滤后得到浓缩的稻瘟菌分生孢子悬浮液；S2.采用超滤法制备稻瘟菌分生孢子分泌蛋白。本发明通过优化稻瘟菌分生孢子的培养和分泌蛋白的诱导提取步骤，避免了复杂的样品前处理过程；并应用shotgun技术，高通量分析鉴定了稻瘟菌分泌蛋白；本发明对于探究稻瘟菌的致病机理有重要意义。

摘要： 本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中以非经典分泌途径进行分泌的异源蛋白及其在蛋白分泌表达中的应用。来源于瘤胃菌Ruminococcus sp.5_1_39B_FAA的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶RDPE本身不带有任何信号肽或分泌信号，却可以大量分泌到胞外；通过实验证明了RDPE并非通过Sec途径或Tat途径进行分泌，也不是因为细胞自溶和裂解而泄漏到胞外。因此，RDPE在枯草芽孢杆菌中是一种非经典分泌蛋白。将RDPE分别与18种目标蛋白进行融合，尝试以RDPE作为转运信号实现目标蛋白的分泌表达，16种融合蛋白均在胞内有明显的表达，9种融合蛋白被成功分泌到胞外，其中2种融合蛋白的分泌水平占相应融合蛋白总量的比例大于50%。所以，本实验发展了一种实现蛋白质在枯草芽孢杆菌中分泌表达的新策略。

摘要： 本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中实现外源蛋白质分泌表达的新策略。以非经典分泌蛋白质Eno，YceD和YvgN作为转运信号实现了外源蛋白质BgaB的分泌表达，但在YceD引导下，BgaB的分泌量很低。在PdhA和KatA情况下，虽然在细胞内检测到很高的融合蛋白质的量，在细胞外没有检测到相应的蛋白质和BgaB的活性，说明PdhA和KatA并不能实现BgaB的分泌表达。当GapA作为融合蛋白质时，胞内和胞外均没有检测到融合蛋白质，可能是融合蛋白质在细胞内并没有表达。本实验的方法对于实现外源蛋白质在枯草芽孢杆菌中的分泌表达表达提供了新的可能。

摘要： 本发明公开了一种稻瘟菌分泌蛋白的提取方法及应用shotgun技术研究其分泌蛋白质组的方法，包括以下步骤：S1.稻瘟菌分生孢子的培养：将稻瘟菌菌丝接种至PDA培养基中进行培养；向培养基中加入无菌水，捣碎菌丝，转至西红柿燕麦培养基中，涂抹均匀，28°C下光照培养2～4d；将培养基表面菌丝打断，再加入无菌水，洗去培养基表面菌丝，28°C下光照培养2～4d进行产孢；加入无菌水进行冲洗，收集分生孢子，过滤后得到浓缩的稻瘟菌分生孢子悬浮液；S2.采用超滤法制备稻瘟菌分生孢子分泌蛋白。本发明通过优化稻瘟菌分生孢子的培养和分泌蛋白的诱导提取步骤，避免了复杂的样品前处理过程；并应用shotgun技术，高通量分析鉴定了稻瘟菌分泌蛋白；本发明对于探究稻瘟菌的致病机理有重要意义。

摘要： 本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中以非经典分泌途径进行分泌的异源蛋白及其在蛋白分泌表达中的应用。来源于瘤胃菌Ruminococcus？sp.？5_1_39B_FAA的D-阿洛酮糖3-差向异构酶RDPE本身不带有任何信号肽或分泌信号，却可以大量分泌到胞外；通过实验证明了RDPE并非通过Sec途径或Tat途径进行分泌，也不是因为细胞自溶和裂解而泄漏到胞外。因此，RDPE在枯草芽孢杆菌中是一种非经典分泌蛋白。将RDPE分别与18种目标蛋白进行融合，尝试以RDPE作为转运信号实现目标蛋白的分泌表达，16种融合蛋白均在胞内有明显的表达，9种融合蛋白被成功分泌到胞外，其中2种融合蛋白的分泌水平占相应融合蛋白总量的比例大于50%。所以，本实验发展了一种实现蛋白质在枯草芽孢杆菌中分泌表达的新策略。

摘要： 本发明涉及一种在枯草芽孢杆菌中实现外源蛋白质分泌表达的新策略。以非经典分泌蛋白质Eno，YceD和YvgN作为转运信号实现了外源蛋白质BgaB的分泌表达，但在YceD引导下，BgaB的分泌量很低。在PdhA和KatA情况下，虽然在细胞内检测到很高的融合蛋白质的量，在细胞外没有检测到相应的蛋白质和BgaB的活性，说明PdhA和KatA并不能实现BgaB的分泌表达。当GapA作为融合蛋白质时，胞内和胞外均没有检测到融合蛋白质，可能是融合蛋白质在细胞内并没有表达。本实验的方法对于实现外源蛋白质在枯草芽孢杆菌中的分泌表达提供了新的可能。

摘要： 本发明公开了GSS1蛋白质作为小菜蛾口腔分泌蛋白的内参蛋白的应用。本发明的优点在于在小菜蛾不同组织中能够广泛检测到GSS1存在，尤其在口腔分泌物中能够稳定检测且不受到底物硫苷的诱导的特性，可作为小菜蛾口腔分泌总蛋白和特定分泌蛋白定量的内参蛋白，能够很好的服务于该昆虫的口腔分泌蛋白的定量。

摘要： 本发明公开了一种分泌抗CLas分泌蛋白R1g单克隆抗体的杂交瘤细胞株R1g1 4B4及应用，所述杂交瘤细胞株R1g1 4B4于2022年保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：C2022146，保藏地址：中国.武汉.武汉大学。本发明得到的杂交瘤细胞株R1g1 4B4分泌的抗CLas分泌蛋白R1g的单克隆抗体mAb 4B4能够识别柑橘黄龙病菌分泌蛋白R1g，通过免疫印迹反应证明单克隆抗体mAb 4B4可以特异地识别病原菌CLas的分泌蛋白R1g1。该单克隆抗体mAb 4B4可用于制备抑制或控制柑橘黄龙病的制剂、药物，从而实现防治柑橘黄龙病。

摘要： 一种大规模分离干细胞旁分泌蛋白和分泌体囊泡的方法，具体为利用双重滤过快速、大量提取粒径在20nm～200nm之间的蛋白与外泌体囊泡的方法，本发明利用两个管膜孔径不同的血浆过滤器实现对干细胞上清液中所含分子粒径进行限制，筛选出20nm～200nm符合干细胞旁分泌蛋白和外泌体囊泡的直径区间内的分子，利用二次分离，实现连续大量获得旁分泌蛋白和外泌体囊泡。

摘要： 本发明涉及一种方法，其可在短时间内大量检测可特异抑制III型分泌机制和III型分泌蛋白之功能的物质，其不依赖于动物感染实验。即，本发明涉及检测III型分泌机制抑制剂的方法，包括将具有III型分泌机制的细菌与红细胞悬液混合，向其中加入III型分泌机制抑制剂，检测这样形成的溶血活性的改变。这种检测物质的方法通过将抑制III型分泌机制或III型分泌蛋白功能的物质表示为红细胞溶血活性的数字指数，能在短时间内处理大量样品。因此，本发明可用于药物的研制。