双峰驼GP2的原核表达、抗体制备及其在回肠中的表达

刘柯江; 李沛轩; 张睿; 王亭玮; 索南吉; 王雯慧

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双峰驼GP2的原核表达、抗体制备及其在回肠中的表达

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糖蛋白2(glycoprotein 2,GP2)是由粘液腺和分泌细胞产生的一种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins,GPI-APs),能够摄取肠腔内的病原菌,对维持机体的稳态具有重要意义。为获得抗双峰驼(Camelus bactrianus)GP2的抗体并研究GP2在双峰驼回肠中的表达情况,将双峰驼GP2基因(GenBank No.XM_045521202.1)连接至pET-28a,构建重组质粒p ET-28a-GP2,再转入大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)中诱导表达,优化诱导条件后,通过SDS-PAGE和Western blot验证。用已获得目的蛋白制备兔抗双峰驼GP2多克隆抗体,并通过ELISA和Western blot检测效价及其特异性,最后采用免疫组织化学染色方法了解其在回肠中的表达情况。结果表明,GP2蛋白的大小约为65 kD,最佳诱导条件为0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)6 h,主要以包涵体的形式表达。经ELISA和Western blot检测,抗体效价为1∶2.56×10^(5),能特异性识别重组蛋白GP2。免疫组织化学染色结果显示,GP2主要在回肠的滤泡相关上皮表达,并且在微皱褶细胞的细胞膜上表达。本研究为GP2的后续研究提供了参考,同时丰富了黏膜免疫的相关理论,解决了目前市场上没有商品化抗体的问题,为开发新型药物提供抗体支撑。

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来源
《农业生物技术学报》 |2023年第8期|1651-1658|共8页
作者
刘柯江; 李沛轩; 张睿; 王亭玮; 索南吉; 王雯慧;
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作者单位

甘肃农业大学动物医学院;

兰州730070;

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正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;基因工程的应用;
关键词
双峰驼; 糖蛋白2(GP2); 原核表达; 抗体制备; 回肠;

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