目的:利用生物催化法研究中药何首乌活性成分二苯乙烯苷生物合成途径中的聚酮反应。方法:以丙二酰辅酶A和4-香豆酰辅酶A为底物,利用何首乌愈伤组织粗酶进行体外酶催化,采用高效液相色谱和液质联用方法检测催化产物,硫酸铵盐析法和SDS-PAGE对不同组分的粗酶进行分析。结果:生物催化产物和白藜芦醇对照品的色谱峰保留时间均为23 min;在负离子模式下,催化产物质谱图的质荷比为227,与白藜芦醇对照品相吻合;硫酸铵盐析结果显示盐析梯度为40%~70%沉淀的粗酶具有催化活性,并且梯度为50%~60%沉淀的粗酶活性最高,不同硫酸铵盐析梯度沉淀的蛋白SDS-PAGE图谱条带差异较大,梯度为50%~60%沉淀的蛋白中发现分子量约42 k Da的条带,与芪合酶分子量一致。结论:何首乌二苯乙烯苷生物合成途径中聚酮反应的产物为白藜芦醇,并非二苯乙烯苷,从而推测二苯乙烯苷可能是由白藜芦醇转化而来,并非聚酮反应的直接产物。
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