KCTD10基因慢病毒过表达载体的构建及病毒包装

张敏; 周芸羽; 杨倩; 黄凤鑫; 蒋乐龙; 管海辰; 丰昀; 王光伟

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KCTD10基因慢病毒过表达载体的构建及病毒包装

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目的:构建KCTD10基因表达载体并包装成病毒颗粒.方法:合成KCTD10基因全长片段,构建pEZ-Lv105-KCTD10载体,转化至大肠杆菌Stbl3中进行筛选.利用PCR及测序鉴定KCTD1-Lv105阳性克隆.将KCTD10-Lv105重组质粒和阳性对照eGFP-Lv105质粒同时与HIV包装质粒混合物共转染于293T细胞进行慢病毒包装,收集浓缩病毒颗粒.将所得病毒颗粒悬浮梯度稀释后感染293T细胞,利用Puromycin进行药筛滴度测定.结果:测序比对检测KCTD10-Lv105重组载体成功构建,荧光显微镜下观察eGFP-Lv105病毒包装成功,药筛检测KCTD10-Lv105浓缩病毒滴度为1.2×108TU/mL.结论:成功包装好过表达KCTD10的慢病毒颗粒,并为进一步研究KCTD10基因在胶质瘤的发生发展中的作用奠定了基础.%Objective To construct a lentiviral vector over-expressing KCTD10 and packaged it into viral particles. Methods Synthesized the full length of KCTD10 gene fragments, Constructed pEZ-Lv105-KCTD10 vector and conducted it into Stbl3 for screening. use PCR and DNA sequencing to identify the KCTD10-Lv105 positive clones. The recombinant plasmids of KCTD10-Lv105 and the positive control eGFP-Lv105 were co-transfected into 293T cellswith the HIV packag-ing plasmid mixture, then viruses were collected, suspendedand dilutedto infect 293T cells, Finally, viral titer was detected throughPuromycin resistance screening. Results Lentiviral recombinant vectors KCTD10-Lv105 were successfully constructed, which was confirmed by sequencing analysis. eGFP-Lv105 virus was successfully packaged by fluorescenceobservation. The final titer detected by drug screening of concentrated viruses was 1.2×108TU/mL Conclusion The KCTD10 overexpressed viruses were packaged successfully, which laid a foundation for further study of KCTD10 gene on the role of carcinogenesis and progress of gliomas.

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来源
《湖南师范大学学报（医学版）》 |2018年第2期|20-23|共4页
作者
张敏; 周芸羽; 杨倩; 黄凤鑫; 蒋乐龙; 管海辰; 丰昀; 王光伟;
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作者单位

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

湖南医药学院生物医学中心,怀化 418000;

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

长沙市中心医院眼科,长沙 410004;

湖南医药学院临床医学院,怀化 418000;

湖南医药学院生物医学中心,怀化 418000;

怀化市脑与神经内分泌重点实验室,怀化 418000;

侗医药研究湖南省重点实验室,怀化 418000;

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正文语种 chi
中图分类 R3416;
关键词
KCTD10基因; 过表达; 慢病毒载体;

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