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大鼠背根神经节神经元原代培养中纯化方法的改良

         

摘要

目的:改进大鼠背根神经节神经元原代培养中的纯化方法以提高细胞纯度.方法:常规取材并酶解消化大鼠背根神经节神经元,应用牛血清白蛋白溶液对细胞进行密度梯度离心初步分离细胞,再应用差速贴壁法去除非神经元细胞,最后应用阿糖胞苷进一步纯化细胞.纯化后应用显微镜观察细胞形态,采用β-tubulin Ⅲ免疫细胞化学染色方法进行纯度鉴定,应用CCK-8检测细胞活力.结果:未改良组获得纯化的背根神经节神经元的培养周期长达10 d,而改良组缩短为5d.相差显微镜可见改良组神经胶质细胞明显减少.改良组的β-tubulin Ⅲ免疫细胞化学染色阳性细胞比例显著增加,计数结果显示改良组神经元纯度达到93%,未改良组纯度仅达到68%,差异有统计学意义(P<0.05).CCK-8检测结果显示改良组的细胞活力高于未改良组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:纯化方法改良后可以在更短的培养周期内获得纯度更高、细胞活力更好的大鼠原代背根节神经元.

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