慢病毒介导的干扰及过表达HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响

刘辉琦; 杰永生; 郑蕊; 綦惠; 陈磊; 靳少锋; 舒雄

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目的通过慢病毒介导的干扰及过表达探讨HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响。方法使用慢病毒构建干扰、过表达HSP90β的质粒,通过琼脂糖电泳、测序法鉴定构建慢病毒质粒转染H1299细胞使用嘌呤霉素对MG-63转染细胞进行筛选,计算转染效率实验分干扰对照组(negative control-shRNA)、HSP90p干扰组(HSP90β-shRNA)、过表达对照组(negative control-pEZ)及HSP90β过表达组(HSP90β-pEZ)。以实时荧光定量PCR、Western-blot法检测mRNA和蛋白表达水平。用Transwell小室法检测MG-63侵袭能力。结果插入片段与目的基因序列一致。嘌呤霉素MG-63细胞株最小致死浓度为3 pg/mL,感染复数(multiplicity of m-fection,MOI)为200,感染效率为80%。HSP90β干扰效率为81.15%,过表达组HSP90βmRNA及蛋白相对表达增加(P<0.01)。干扰组HSP90βmRNA及蛋白的相对表达量下降(P<0.01)。与亲本细胞相比,shRNA-HSP90β组MG-63细胞的侵袭能力下降(P<0.01),而pEZ-HSP90β组MG-63细胞侵袭能力增强(P<0.05)。shRNA-HSP90β组的MMP2、Snail表达减少,E-cadherin表达增加,而PEZ-HSP90β组的MMP2、Snail表达增加,E-cadherin表达减少。结论干扰及过表达HSP90β的人骨肉瘤细胞系MG-63构建成功,并稳定表达;HSP90β可通过抑制E-cadherin表达增加MMP2、Snail表达,增强骨肉瘤细胞MG-63的侵袭性。

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来源
《中国高原医学与生物学杂志》 |2021年第3期|151-158|共8页
作者
刘辉琦; 杰永生; 郑蕊; 綦惠; 陈磊; 靳少锋; 舒雄;
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作者单位

青海大学医学院;

青海西宁810001;

北京市创伤骨科研究所/北京积水潭医院;

北京100035;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类骨骼肿瘤;
关键词
MG-63; HSP90β; RNA干扰; 过表达; 侵袭;

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