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烟草丛顶病毒ORF3的克隆及原核表达

         

摘要

利用RT-PCR方法,自烟草丛顶病毒(Tobacco bush top virus,TBTV)龙陵分离物(TBTV-YLLi)的RNA中扩增出ORF3目的片段,并克隆到pMD18-T载体上进行序列分析.结果表明,TBTV-YLLi的ORF3全长714 bp,与TBTV其他分离物的核苷酸相似性和氨基酸相似性分别为98.3%~98.6%和95.4%~95.8%;与同属的花生丛簇病毒(Groundnut rosette virus,GRV)、豌豆耳突花叶病毒2号(Pea enation mosaic virus-2,PEMV-2)和胡萝卜拟斑驳病毒(Carrot mottle mimic virus,CMoMV)的核苷酸相似性分别为65.1%、61.6%和49.7%,氨基酸相似性分别为36.4%、34.6%和16.5%.将ORF3克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得的重组子pET28-ORF3转化大肠杆菌BL21-plysS,使用终浓度为1.0 mmol/L 的IPTG在37 ℃诱导培养4 h时,该融合蛋白表达量最高.融合蛋白经Ni~(2+)亲和柱层析纯化后,SDS-PAGE 电泳表明,融合蛋白相对分子质量约为35 000,与预计的相对分子质量大小相一致.

著录项

  • 来源
    《华南农业大学学报》 |2010年第2期|32-35|共4页
  • 作者单位

    云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室;

    云南;

    昆明;

    650201;

    云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室;

    云南;

    昆明;

    650201;

    云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室;

    云南;

    昆明;

    650201;

    沧源县农业局植保站;

    云南;

    临沧;

    677400;

    云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室;

    云南;

    昆明;

    650201;

    云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室;

    云南;

    昆明;

    650201;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 烟草病虫害;
  • 关键词

    烟草丛顶病毒; ORF3; 序列分析; 原核表达;

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