一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析

肖景惠; 李美玉; 孙淼; 王晓辉

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一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析

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[目的]克隆耐冷菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-6)的几丁质酶基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其酶解产物.[方法]采用PCR扩增法从Pseudoalteromonas sp.DL-6中克隆几丁质酶基因(chiA),连接到表达载体pET28a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测几丁质酶ChiA的分子量与纯度,4-甲基伞形酮荧光底物4MU-(GlcNAc)2测定酶活,电喷雾质谱(ESI-MS)检测酶解产物.[结果]chiA基因(GenBank登录号KF234015)在大肠杆菌中高效表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化几丁质酶ChiA的总活力可达168.68 U.ESI-MS检测结果表明重组蛋白酶解1％胶体几丁质的产物为几丁寡糖.[结论]利用内切几丁质酶ChiA水解几丁质生产几丁寡糖,为其在食品、医药和农业等领域的潜在应用提供有利参考.

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来源
《微生物学通报》 |2016年第10期|2179-2186|共8页
作者
肖景惠; 李美玉; 孙淼; 王晓辉;
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作者单位

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
几丁质酶; 基因克隆; 原核表达; 纯化; 几丁寡糖;

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