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莪术含药血清调控大鼠肝星状细胞Shh和SFRP1的机制研究

         

摘要

目的:研究莪术含药血清调控大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路分泌性信号糖蛋白配体(Sonic Hedgehog,Shh)和Wnt信号通路负调节因子分泌型卷曲相关蛋白1(Secreted Frizzled-Related Proteins-1,SFRP1)表达的机制.方法:大鼠50只随机分为空白组、莪术1组(3.75g/kg)、莪术2组(6.25g/kg)、莪术3组(8.75g/kg)、秋水仙碱组,分别制备含药血清.MTT法预实验筛选莪术最佳大鼠灌胃剂量及莪术含药血清最佳作用浓度,根据预实验结果进行正式实验.正式实验中,体外培养的大鼠HSCs分为8组:空白组、模型(瘦素)组、Hh通路抑制剂(环巴胺)组、莪术最佳剂量浓度组、环巴胺+莪术最佳剂量浓度组、Hh通路激动剂(Purmorphamine)组、Purmorphamine+莪术最佳剂量浓度组、秋水仙碱组.除空白组外,其余各组经瘦素(0.1 μg/ml)诱导及相应含药血清干预24h后,MTT法检测HSCs增殖,RT-PCR法检测Shh mRNA和SFRP1 mRNA表达,West-ern-blot及免疫荧光法检测Shh和SFRP1蛋白表达.结果:预实验得出莪术最佳大鼠灌胃剂量为6.25g/kg,莪术含药血清最佳作用浓度为10%.正式实验结果提示,用瘦素活化HSCs后,Shh mRNA和蛋白表达显著上调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著下调.环巴胺(20 μmol/L)、10%莪术含药血清(6.25g/kg)、秋水仙碱(100 μg/kg)干预后,Shh mRNA和蛋白表达显著下调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著上调.莪术含药血清与环巴胺协同干预后,Shh mRNA和蛋白表达显著下调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著上调.Purmorphamine(1 μmol/L)干预后,Shh mRNA和蛋白表达显著上调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著下调.用莪术含药血清干预Pur-morphamine组后,Shh mRNA和蛋白表达显著下调,SFRP1 mRNA和蛋白表达显著上调.结论:Shh和SFRP1涉及Hh和Wnt通路的异常调控,在瘦素诱导活化的HSCs中存在负相关关系;莪术含药血清可通过调控瘦素诱导活化的HSCs中Shh和SFRP1的表达,参与Hh和Wnt信号通路抑制HSCs的活化和增殖.

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