bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

周永安; 张景萍; 郭向荣

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bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

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目的:构建ber/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法:根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tusch Ⅰ设计原则,选择设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果:构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117使bcr/abl mRNA的相对水平下降50%,使P210蛋白下降47%.结论:bcr/abl融合基因siR-NA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.

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来源
《临床医药实践》 |2009年第9期|650-652|共3页
作者
周永安; 张景萍; 郭向荣;
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作者单位

山西省儿童医院,山西,太原,030013;

太原市中心医院,山西,太原,030009;

山西煤炭中心医院,山西,太原030006;

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正文语种 chi
中图分类慢性白血病;
关键词
慢性髓细胞性白血病; bcr/abl融合基因; 真核表达载体; RNA干扰;

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