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TRPC3参与缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡

         

摘要

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)在缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用.方法:采用HUVECs细胞株, 复苏传代后计数稀释,接种于6孔培养板中, 实验组分为常氧对照组(5%CO2+95%空气)和缺氧组(1%O2+5%CO2+94%N2),处理24 h后,应用实时荧光定量RT-PCR法及WesternBlot法检测TRPC3 mRNA和蛋白水平的表达变化.构建靶向TRPC3基因的siRNA和无关序列质粒表达载体, 分别转染至HUVECs,缺氧处理后再用四甲基偶氮唑盐比色法(Methods the tetrazolium,MTT)检测各组细胞存活率, Hoechest33342 荧光染色观察细胞凋亡.结果:缺氧处理24 h, HUVECs中TRPC3 mRNA和蛋白表达明显升高,细胞存活率为67.4%, 与常氧对照组有显著性差异( P<0.05) ;缺氧+TRPC3干扰组细胞存活率为92.7%, 与缺氧组有显著性差异( P<0.05);缺氧+TRPC3假干扰组与缺氧组无显著性差异( P>0.05).荧光显微镜下观察, 常氧对照组胞核均匀蓝染;缺氧处理组和缺氧+TRPC3假干扰组胞核明显固缩、凝聚, 可见凋亡小体; 而缺氧+TRPC3干扰组胞核均匀蓝染.结论: TRPC3参与缺氧诱导HUVECs凋亡.

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