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脂多糖诱导C57/BL6小鼠骨髓巨噬细胞表达共刺激分子CD80、CD86实验研究

         

摘要

目的:探究细菌脂多糖(LPS)诱导C57/BL6小鼠骨髓巨噬细胞表达共刺激分子CD80、CD86的情况.方法:从C57/BL6小鼠的股骨和胫骨中无菌分离骨髓细胞并使用25 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)进行刺激.通过换液对其进行纯化和扩增培养,经过7 d的分化培养和形态学观察,获得骨髓来源单核细胞.用异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗小鼠F4/80抗体,用藻红蛋白(PE)标记抗小鼠CD11 b抗体,流式细胞仪检测确定该细胞是否为小鼠骨髓巨噬细胞(BMDM).观察组用LPS 1μg/ml刺激培养BMDM,对照组用含10%胎牛血清(FBS)的等量L-DMEM培养.培养24 h后用流式细胞仪检测FITC标记的抗CD80(B7-1)抗体和抗CD86(B7-2)抗体.结果:新分离的小鼠骨髓单核细胞呈小圆形,两端伸出触角,培养5d后细胞呈椭圆形,两端的触角更明显,增殖依赖M-CSF.流式细胞仪检测结果显示,分离的小鼠骨髓单核细胞CD11b抗体阳性,纯度较高;LPS刺激后实验组较对照组表达共刺激分子CD80、CD86明显增多.结论:LPS刺激可使C57/BL6小鼠骨髓巨噬细胞表达共刺激分子CD80、CD86.

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