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首页> 美国卫生研究院文献>Journal of Virology >Subcellular Localization Stability and trans-Cleavage Competence of the Hepatitis C Virus NS3-NS4A Complex Expressed in Tetracycline-Regulated Cell Lines
【2h】

Subcellular Localization Stability and trans-Cleavage Competence of the Hepatitis C Virus NS3-NS4A Complex Expressed in Tetracycline-Regulated Cell Lines

机译：在四环素调节细胞系中表达的丙型肝炎病毒NS3-NS4A复合物的亚细胞定位稳定性和反切割能力

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A tetracycline-regulated gene expression system and a panel of novel monoclonal antibodies were used to examine the subcellular localization, stability, and trans-cleavage competence of the hepatitis C virus (HCV) NS3-NS4A complex in inducible cell lines. The NS3 serine protease domain and the full-length NS3 protein expressed in the absence of the NS4A cofactor were diffusely distributed in the cytoplasm and nucleus. Coexpression of NS4A, however, directed NS3 to the endoplasmic reticulum (ER) or an ER-like modified compartment, as demonstrated by colocalization with 3,3′-dihexyloxacarbocyanine iodide, protein disulfide isomerase, and calnexin, as well as subcellular fractionation analyses. In addition, coexpression with NS4A dramatically increased the intracellular stability of NS3 (mean protein half-life of 26 versus 3 h) and allowed for NS4A-dependent trans-cleavage at the NS4B-NS5A junction. Deletion analyses revealed that the hydrophobic amino-terminal domain of NS4A was required for ER targeting of NS3. These results demonstrate the importance of studying HCV proteins in their biological context and define a well-characterized cell culture system for further analyses of the NS3-NS4A complex and the evaluation of novel antiviral strategies against hepatitis C.
机译：四环素调节的基因表达系统和一组新颖的单克隆抗体被用于检查可诱导细胞系中丙型肝炎病毒（HCV）NS3-NS4A复合物的亚细胞定位，稳定性和反式剪切能力。在不存在NS4A辅因子的情况下表达的NS3丝氨酸蛋白酶结构域和全长NS3蛋白分散在细胞质和细胞核中。但是，NS4A的共表达将NS3导向内质网（ER）或类似ER的修饰区室，如与3,3'-二己基氧杂碳菁花青碘化物，蛋白质二硫键异构酶和钙联接蛋白的共定位以及亚细胞分馏分析所证明。此外，与NS4A的共表达显着提高了NS3的细胞内稳定性（平均蛋白半衰期为26对3小时），并允许在NS4B-NS5A连接处进行依赖NS4A的反式切割。缺失分析显示，NS4A的疏水氨基末端结构域是NS3靶向ER所必需的。这些结果证明了在其生物学背景下研究HCV蛋白的重要性，并为进一步分析NS3-NS4A复合物和评估针对丙型肝炎的新型抗病毒策略提供了一个特征明确的细胞培养系统。

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