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【24h】

Filter-Aided N?Glycan Separation (FANGS): A Convenient Sample Preparation Method for Mass Spectrometric N?Glycan Profiling

机译：过滤器辅助的N-聚糖分离（FANGS）：一种方便的质谱法制备N-聚糖的样品制备方法

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We have developed a simple method for the release and isolation of glycoprotein N-glycans from whole-cell lysates using less than a million cells, for subsequent implementation with mass spectrometric analysis. Cellular protein extracts prepared using SDS solubilization were sequentially treated in a membrane filter device to ultimately release glycans enzymatically using PNGase F in the volatile buffer ammonium bicarbonate. The released glycans are recovered in the filtrate following centrifugation and typically permethylated prior to mass spectrometric analysis. We call our method "filter-aided N-glycan separation" and have successfully applied it to investigate N-glycan profiles of wild-type and mutant Chinese hamster ovary cells. This method is readily multiplexed and, because of the small numbers of cells needed, is compatible with the analysis of replicate samples to assess the true nature of glycan variability in tissue culture samples.
机译：我们已经开发了一种简单的方法，可使用少于一百万个细胞从全细胞裂解物中释放和分离糖蛋白N-聚糖，以用于随后的质谱分析。使用SDS增溶制备的细胞蛋白提取物在膜滤器中依次处理，以最终在挥发性缓冲剂碳酸氢铵中使用PNGase F酶促释放聚糖。离心后在滤液中回收释放的聚糖，通常在质谱分析之前进行过甲基化。我们将我们的方法称为“过滤器辅助的N-聚糖分离”，并已成功地将其用于研究野生型和突变型中国仓鼠卵巢细胞的N-聚糖谱。此方法易于复用，并且由于所需的细胞数量少，因此与重复样品的分析兼容，以评估组织培养样品中聚糖变异性的真实性质。

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