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Studying Glycolytic Oscillations in Individual Yeast Cells by Combining Fluorescence Microscopy with Microfluidics and Optical Tweezers

机译：通过将荧光显微镜与微流体和光学镊子组合来研究单个酵母细胞中的糖酵解振荡

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摘要

In this unit, we provide a clear exposition of the methodology employed to study dynamic responses in individual cells, using microfluidics for controlling and adjusting the cell environment, optical tweezers for precise cell positioning, and fluorescence microscopy for detecting intracellular responses. This unit focuses on the induction and study of glycolytic oscillations in single yeast cells, but the methodology can easily be adjusted to examine other biological questions and cell types. We present a step-by-step guide for fabrication of the microfluidic device, for alignment of the optical tweezers, for cell preparation, and for time-lapse imaging of glycolytic oscillations in single cells, including a discussion of common pitfalls. A user whofollows the protocols should be able to detect clear metabolite time traces over the course of up to an hour that are indicative of dynamics on the second scale in individual cells during fast and reversible environmental adjustments.
机译：在本机中，我们提供了使用用于控制和调整细胞环境的微流体，用于测量细胞环境的微流体，用于检测细胞环境的荧光显微镜，用于检测细胞环境的微流体，详细阐述用于研究单个细胞中的动态反应。 本机侧重于单一酵母细胞中糖酵解振荡的诱导和研究，但可以很容易地调整方法以检查其他生物问题和细胞类型。 我们介绍了用于对微流体装置的制造的逐步指导，用于对光学镊子的对准，用于细胞制备，以及单个细胞中的糖酵解振荡的延时成像，包括常见缺陷的讨论。 在快速和可逆的环境调整期间，用户在快速和可逆的环境调整期间检测协议的方法，该用户应该能够检测到明确的代谢物时间迹线。

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