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Simultaneous in Vitro Protein Synthesis Using Solid-Phase DNA Template

机译：使用固相DNA模板同时进行体外蛋白质合成

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In vitro protein synthesis is rapidly becoming an accepted tool in functional genomic analysis.We have demonstrated the in vitro synthesis of firefly luciferase on solid-phase template DNA,bound to wells in 96-well plates,using simultaneous transcription and translation in a wheat-germ extract system.The bound DNA template was stable and did not release during transcription.Coupled translation resulted in ca.1.2 ng/muL luciferase synthesized,which is ca.one-fifth of that synthesized using conventional solution-phase coupled transcription and translation.Reuse of the DNA template was influenced by the complexity of the wheat-germ extract,which resulted in fouling of the transcription surface and reduction of protein synthesis after extended use.The approach developed in this study may enable the development of high-throughput,microscale protein synthesis platforms for use in functional genomic analysis.
机译：体外蛋白质合成正迅速成为功能基因组分析中公认的工具。我们已经证明了萤火虫荧光素酶在固相模板DNA上的体外合成，并结合到96孔板的孔中，同时在小麦中同时转录和翻译。结合的DNA模板稳定且在转录过程中不会释放。偶联翻译产生的合成荧光素酶约为1.2 ng /μL，约为常规溶液相偶联转录和翻译合成的荧光素酶的五分之一。 DNA模板的重复使用受到小麦胚芽提取物的复杂性的影响，这导致转录表面的结垢和长期使用后蛋白质合成的减少。本研究开发的方法可能使高通量，微型化的发展成为可能。用于功能基因组分析的蛋白质合成平台。

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