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首页> 外文期刊>Nucleic Acids Research >Single small-interfering RNA expression vector for silencing multiple transforming growth factor-beta pathway components
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Single small-interfering RNA expression vector for silencing multiple transforming growth factor-beta pathway components

机译：沉默多个转化生长因子-β途径组分的单个小干扰RNA表达载体

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Although RNA interference (RNAi) is a popular technique, no method for simultaneous silencing of multiple targets by small-hairpin RNA (shRNA)-expressing RNAi vectors has yet been established. Although gene silencing can be achieved by synthetic small-interfering RNA (siRNA) duplexes, the approach is transient and largely dependent on the transfection efficiency of the host cell. We offer a solution: a simple, restriction enzyme-generated stable RNAi technique that can efficiently silence multiple targets with a single RNAi vector and a single selection marker. In this study, we succeeded in simultaneous stable knockdown of transforming growth factor beta (TGF-beta) pathway-related Smads-Smad2, Smad3 and Smad4-at the cellular level. We observed distinct phenotypic changes in TGF-beta-dependent cellular functions such as invasion, wound healing and apoptosis. This method is best suited for an analysis of complex signal transduction pathways in which silencing of a single gene cannot account for the whole process.
机译：尽管RNA干扰（RNAi）是一种流行的技术，但尚未建立通过表达小发夹RNA（shRNA）的RNAi载体同时沉默多个靶标的方法。尽管可以通过合成的小干扰RNA（siRNA）双链体实现基因沉默，但该方法是瞬时的，并且在很大程度上取决于宿主细胞的转染效率。我们提供了一个解决方案：一种简单的，限制性内切酶产生的稳定RNAi技术，该技术可以使用单个RNAi载体和单个选择标记有效地沉默多个靶标。在这项研究中，我们成功地同时稳定了在细胞水平上与转化生长因子β（TGF-beta）途径相关的Smads-Smad2，Smad3和Smad4的稳定敲低。我们观察到TGF-β依赖性细胞功能，如侵袭，伤口愈合和细胞凋亡的明显表型变化。这种方法最适合分析复杂的信号转导途径，其中单个基因的沉默不能说明整个过程。

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