过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG及制备方法及用途

技术领域

本发明涉及一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料及制备方法及用途。

背景技术

随着血管外科技术水平的不断提高，下肢缺血血管重建病人的增多，下肢缺血再灌注损 伤已引起临床不断重视，缺血再灌注损伤已成为影响救治或手术效果的重要因素。缺血再灌 注损伤是体内损伤修复过程中病情反复及加重的重要病理机制。1960年，Jennings首次提出 心肌再灌注损伤的概念，现已证实，脑、肾、肝、胃肠道等多种组织器官都会发生缺血再灌 注损伤。对其发生机制，不同学者持有不同观点，但对缺血再灌注损伤时氧自由基的生成、 钙超载、白细胞活化、内皮细胞自稳态失衡及微血管损伤却是肯定的。肢体的缺血再灌注不 仅影响缺血组织的成活和功能，而且还会累及远离器官(心、肺、肾等)、严重时会引发多器 官衰竭而死亡。

肢体IRI的发生大致可分为缺血期、再灌注期和再缺血期。肢体缺血再灌注后可激活中 性粒细胞，产生大量氧自由基及炎性介质，使机体处于全身炎症反应状态，引起多器官损伤。 随着肢体缺血时间的延长，组织消耗大量ATP，产生大量氧自由基和脂质过氧化物，可破坏 微血管内皮细胞，形成微循环栓塞，并逐步累及主要供血动脉及回流静脉，使远端组织灌注 不完全；同时，过氧化氢在肌肉中积聚增多，引起骨骼肌细胞变性、坏死。缺血范围越大， 受累组织越多，局部和全身损害也越严重。ATP消耗越多，产生氧自由基也越多，损害也越 严重。

经过药物、手术等治疗恢复动脉血流后即进入再灌注期。此期高速高压的血流冲击可使 血管内皮细胞损伤进一步加重，血管通透性增加，大量液体通过血管壁渗入组织间隙，使组 织内张力明显增高；同时，恢复的血流可将氧自由基、酸性代谢产物等有毒物质运送至远离 组织器官(肺、脑、肾)，或通过激活中性粒细胞使远离器官损伤。及时综合处理是减轻缺血 再灌注损伤的重要关键，针对不同原因引起的缺血采取相应的救治措施，如有血管损伤，应 及早施行血管重建手术。如为急性动脉栓塞性疾病，则可采取包括动脉内取栓、旁路手术等 方法，血管瘤切除等手术时，采用血液转流措施等。

PLGA、PEG是常用的无毒、可生物降解的生物材料，具有良好的生物相容性，在作为药 物载体方面应用广泛。PLGA-PEG作为一种两亲性生物材料可以用于制备纳米胶束，不仅可以 有效增加药物的溶解度，提高药物载药量，而且可以提高药物在体内循环的稳定性，实现药 物在体内的缓慢释放。但目前尚未有过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料 PLGA-PEG。

本发明的第二个目的是提供一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG作为药物载 体的用途。

本发明的技术方案概述如下：

过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG，用式I所示：

一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的制备方法，包括如下步骤：

(1)在聚合管中加入单体乙交酯和丙交酯，加入催化剂，引发剂，抽真空并以氮气置换2～ 4次，在真空度为5～100Pa条件下封聚合管，110～180℃反应6～20小时，得到多种臂型的 聚乙丙交酯聚合物PLGA；所述乙交酯和丙交酯的摩尔比为1:1～5，催化剂与单体乙交酯和丙 交酯总量的摩尔比为1：1000～20000，引发剂与单体乙交酯和丙交酯总量的摩尔比为1:25～ 300；

(2)按比例取1摩尔多种臂型的聚乙丙交酯聚合物PLGA和2～10摩尔的对羟基苯甲酸溶于 20～50ml的二氯甲烷中，加入2～10摩尔的4-二甲氨基吡啶得溶液1；将2～10摩尔的N- 环己基碳二亚胺溶于10～200ml二氯甲烷后滴入溶液1中，在搅拌和氮气保护下，室温下反 应10～36h得反应液1，将反应液1浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重得多种臂型的 端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA；

(3)按比例取1摩尔多种臂型的端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA和1～20摩尔吡啶,加入到 10-200ml二氯甲烷中溶解得到溶液2，在冰浴条件下，向溶液2中滴入10-100ml浓度为1-10M 的草酰氯-二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续反应4-10h，得反应液2；将反应液2滴加到10-100ml 浓度为1-50M对羟基苯甲酸-N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温下搅拌5-24小时；用10～100ml 浓度为1～3mol/L的盐酸水溶液洗涤2～5次，用10～100ml饱和氯化钠水溶液洗涤2～5次， 再向有机相中加入0.1～30g的无水碳酸钠和0.1～200g无水硫酸镁，放置10～30min，过滤， 滤液浓缩后经重沉淀法处理得到多种臂型的端羧基聚乙丙交酯PLGA；

(4)按比例将1摩尔的PEG与2～100摩尔的三乙胺加入到10～200ml二氯甲烷中溶解得溶 液3，将0.1～100摩尔的对甲基苯磺酰氯溶解于10～50ml二氯甲烷后逐滴滴加到溶液3中， 室温下反应5～20h；用10～100ml浓度为1～3mol/L的盐酸水溶液洗涤2～5次，用10～100ml 饱和氯化钠水溶液洗涤2～5次，再向有机相中加入0.1～30g的无水碳酸钠和0.1～200g无 水硫酸镁，过滤，将滤液浓缩后经重沉淀法处理得到白色沉淀；在N₂气保护下，将白色沉淀 溶于10～200ml N,N-二甲基甲酰胺中在30～100℃搅拌下逐滴加入到10～100ml乙二胺中反 应12～36h得反应液3，将反应液3浓缩后经重沉淀法处理得白色粉末状固体双端氨基PEG；

(5)将1摩尔多种臂型的端羧基聚乙丙交酯PLGA与1～10摩尔的N-羟基琥珀酰亚胺，1～ 10摩尔的N-环己基碳二亚胺和1～10摩尔的4-二甲氨基吡啶溶于10～200ml二氯甲烷中， 在搅拌和氮气保护下，室温下反应10～36h得反应液4，将反应液4浓缩后经重沉淀法处理， 真空干燥至恒重，溶于20～100ml二氯甲烷中；

(6)将1～12摩尔的双端氨基PEG溶于10～100ml的二氯甲烷中；

(7)将步骤(5)获得的溶液在氮气保护下逐滴加入到步骤(6)获得的溶液中，在搅拌和氮 气保护、室温下反应24～60h，抽滤除去不溶物，滤液经重沉淀法处理得到白色粘稠状产物； 再用10～100ml冰冻甲醇洗涤2～5次除去过量的双端氨基PEG，产物于室温真空干燥12～48h 得多种臂型的过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG。

催化剂为辛酸亚锡，异辛酸亚锡，异丙醇铝或正丁基锂。

引发剂为月桂醇、乙二醇、甘油、三羟甲基丙烷，季戊四醇，双季戊四醇或肌醇。

PEG的分子量为1000-10000。

一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG作为药物载体的用途。

本发明的优点：

本发明的过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG对过氧化氢敏感，可降低缺血部位过 氧化氢的浓度，降低对机体的损伤。以本发明的过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG为 药物载体，可满足长循环，靶向治疗的需求。

附图说明

图1为三臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA(PLGA的分子量为13700)的红外光谱图。

图2为三臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA(PLGA的分子量为13700)的红外光谱图。

图3为双端氨基PEG(PEG的分子量为5000)的红外光谱图。

图4三臂过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG(PLGA的分子量为13700，PEG的分子 量为5000)红外光谱图。

图5为过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG纳米粒对过氧化氢敏感结果。

图6制备的纳米载体在下肢缺血动物模型上肌肉注射后7天血管造影结果。

图7制备的纳米载体在下肢缺血动物模型上肌肉注射后7天血管造影新生血管密度结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的制备方法，包括如下步骤：

(1)在聚合管中加入单体乙交酯和丙交酯，加入催化剂异辛酸亚锡，引发剂月桂醇，抽真空 并以氮气置换3次，在真空度为20Pa条件下封聚合管，140℃反应10小时，得到单臂的聚乙 丙交酯聚合物PLGA；所述乙交酯和丙交酯的摩尔比为1:2.5，异辛酸亚锡与单体乙交酯和丙 交酯总量的摩尔比为1：15000，月桂醇与单体乙交酯和丙交酯总量的摩尔比为1:275；

(2)按比例取1摩尔单臂聚乙丙交酯聚合物PLGA和6摩尔的对羟基苯甲酸溶于30ml的二氯 甲烷中，加入5摩尔的4-二甲氨基吡啶得溶液1；将6摩尔的N-环己基碳二亚胺溶于110ml 二氯甲烷后滴入溶液1中，在搅拌和氮气保护下，室温下反应25h得反应液1，将反应液1 浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重得单臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA；

(3)按比例取1摩尔单臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA和10.5摩尔吡啶,加入到105ml 二氯甲烷中溶解得到溶液2，在冰浴条件下，向溶液2中滴入55ml浓度为5.5M的草酰氯-二 氯甲烷溶液，滴加完毕后继续反应7h，得反应液2；将反应液2滴加到55ml浓度为25.5M对 羟基苯甲酸-N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温下搅拌14.5小时；用55ml浓度为2mol/L的盐 酸水溶液洗涤3次，用55ml饱和氯化钠水溶液洗涤3次，再向有机相中加入20g的无水碳酸 钠和20g无水硫酸镁，放置20min，过滤，滤液浓缩后经重沉淀法处理得到单臂端羧基聚乙 丙交酯聚合物PLGA；

(4)按比例将1摩尔的PEG6000与50摩尔的三乙胺加入到105ml二氯甲烷中溶解得溶液3， 将50摩尔的对甲基苯磺酰氯溶解于30ml二氯甲烷后逐滴滴加到溶液3中，室温下反应12.5h； 用55ml浓度为2mol/L的盐酸水溶液洗涤3次，用55ml饱和氯化钠水溶液洗涤3次，再向有 机相中加入30g的无水碳酸钠和100g无水硫酸镁，过滤，将滤液浓缩后经重沉淀法处理得到 白色沉淀；在N₂气保护下，将白色沉淀溶于105ml N,N-二甲基甲酰胺中在60℃搅拌下逐滴加 入到55ml乙二胺中反应24h得反应液3，将反应液3浓缩后经重沉淀法处理得白色粉末状 固体产物双端氨基PEG；

(5)将1摩尔单臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA与5.5摩尔的N-羟基琥珀酰亚胺，5.5摩 尔的N-环己基碳二亚胺和5.5摩尔的4-二甲氨基吡啶溶于105ml二氯甲烷中，在搅拌和氮气 保护下，室温下反应23h得反应液4，将反应液4浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重， 溶于60ml二氯甲烷中；

(6)将6.5摩尔的双端氨基PEG溶于55ml的二氯甲烷中；

(7)将步骤(5)获得的溶液在氮气保护下逐滴加入到步骤(6)获得的溶液中，在搅拌和氮 气保护、室温下反应42h，抽滤除去不溶物，滤液经重沉淀法处理得到白色粘稠状产物；再 用55ml冰冻甲醇洗涤3次除去过量的双端氨基PEG，产物于室温真空干燥30h得单臂过氧化 氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG，其中PLGA分子量为37675。

实施例2

一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的制备方法，包括如下步骤：

(1)在聚合管中加入单体乙交酯和丙交酯，加入催化剂正丁基锂，引发剂乙二醇，抽真空并 以氮气置换4次，在真空度为5Pa条件下封聚合管，110℃反应6小时，得到双臂聚乙丙交酯 聚合物PLGA；所述乙交酯和丙交酯的摩尔比为1:1，正丁基锂与单体乙交酯和丙交酯总量的 摩尔比为1：1000，乙二醇与单体乙交酯和丙交酯总量的摩尔比为1:25；

(2)按比例取1摩尔双臂聚乙丙交酯聚合物PLGA和2摩尔的对羟基苯甲酸溶于20的二氯甲 烷中，加入2摩尔的4-二甲氨基吡啶得溶液1；将2摩尔的N-环己基碳二亚胺溶于10ml二 氯甲烷后滴入溶液1中，在搅拌和氮气保护下，室温下反应10h得反应液1，将反应液1浓 缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重得双臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA；

(3)按比例取1摩尔双臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA和1摩尔吡啶,加入到10ml二氯甲 烷中溶解得到溶液2，在冰浴条件下，向溶液2中滴入10ml浓度为1M的草酰氯-二氯甲烷溶 液，滴加完毕后继续反应4h，得反应液2；将反应液2滴加到10ml浓度为1M对羟基苯甲酸 -N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温下搅拌5小时；用10ml浓度为1mol/L的盐酸水溶液洗涤2 次，用10ml饱和氯化钠水溶液洗涤2次，再向有机相中加入0.1g的无水碳酸钠和0.1g无水 硫酸镁，放置10min，过滤，滤液浓缩后经重沉淀法处理得到双臂端羧基聚乙丙交酯聚合物 PLGA；

(4)按比例将1摩尔的PEG1000与2摩尔的三乙胺加入到10ml二氯甲烷中溶解得溶液3， 将0.1摩尔的对甲基苯磺酰氯溶解于10ml二氯甲烷后逐滴滴加到溶液3中，室温下反应5h； 用10ml浓度为1mol/L的盐酸水溶液洗涤2次，用10ml饱和氯化钠水溶液洗涤2次，再向有 机相中加入0.1g的无水碳酸钠和0.1g无水硫酸镁，过滤，将滤液浓缩后经重沉淀法处理得 到白色沉淀；在N₂气保护下，将白色沉淀溶于10ml N,N-二甲基甲酰胺中在30℃搅拌下逐滴 加入到10ml乙二胺中反应12h得反应液3，将反应液3浓缩后经重沉淀法处理得白色粉末状 固体产物双端氨基PEG；

(5)将1摩尔双臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA与1摩尔的N-羟基琥珀酰亚胺，1摩尔的 N-环己基碳二亚胺和1摩尔的4-二甲氨基吡啶溶于10ml二氯甲烷中，在搅拌和氮气保护下， 室温下反应10h得反应液4，将反应液4浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重，溶于20ml 二氯甲烷中；

(6)将1摩尔的双端氨基PEG溶于10ml的二氯甲烷中；

(7)将步骤(5)获得的溶液在氮气保护下逐滴加入到步骤(6)获得的溶液中，在搅拌和氮 气保护、室温下反应24h，抽滤除去不溶物，滤液经重沉淀法处理得到白色粘稠状产物；再 用10ml冰冻甲醇洗涤2次除去过量的双端氨基PEG，产物于室温真空干燥12h得双臂过氧化 氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG，其中PLGA分子量为3425。

实施例3

一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的制备方法，包括如下步骤：

(1)在聚合管中加入单体乙交酯和丙交酯，加入催化剂异丙醇铝，引发剂甘油，抽真空并以 氮气置换2次，在真空度为100Pa条件下封聚合管，180℃反应20小时，得到三臂聚乙丙交 酯聚合物PLGA；所述乙交酯和丙交酯的摩尔比为1:5，异丙醇铝与单体乙交酯和丙交酯总量 的摩尔比为1：20000，甘油与单体乙交酯和丙交酯总量的摩尔比为1:300；

(2)按比例取1摩尔三臂聚乙丙交酯聚合物PLGA和10摩尔的对羟基苯甲酸溶于50ml的二 氯甲烷中，加入10摩尔的4-二甲氨基吡啶得溶液1；将10摩尔的N-环己基碳二亚胺溶于200ml 二氯甲烷后滴入溶液1中，在搅拌和氮气保护下，室温下反应36h得反应液1，将反应液1 浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重得三臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA；

(3)按比例取三臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA和20摩尔吡啶,加入到200ml二氯甲烷 中溶解得到溶液2，在冰浴条件下，向溶液2中滴入100ml浓度为10M的草酰氯-二氯甲烷溶 液，滴加完毕后继续反应10h，得反应液2；将反应液2滴加到100ml浓度为50M对羟基苯甲 酸-N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温下搅拌24小时；用100ml浓度为3mol/L的盐酸水溶液洗 涤5次，用100ml饱和氯化钠水溶液洗涤5次，再向有机相中加入30g的无水碳酸钠和200g 无水硫酸镁，放置30min，过滤，滤液浓缩后经重沉淀法处理得到三臂端羧基聚乙丙交酯聚 合物PLGA；

(4)按比例将1摩尔的PEG10000与100摩尔的三乙胺加入到200ml二氯甲烷中溶解得溶液 3，将100摩尔的对甲基苯磺酰氯溶解于50ml二氯甲烷后逐滴滴加到溶液3中，室温下反应 20h；用100ml浓度为3mol/L的盐酸水溶液洗涤5次，用100ml饱和氯化钠水溶液洗涤5次， 再向有机相中加入30g的无水碳酸钠和200g无水硫酸镁，过滤，将滤液浓缩后经重沉淀法处 理得到白色沉淀；在N₂气保护下，将白色沉淀溶于200ml N,N-二甲基甲酰胺中在100℃搅拌 下逐滴加入到100ml乙二胺中反应36h得反应液3，将反应液3浓缩后经重沉淀法处理得白 色粉末状固体产物双端氨基PEG；

(5)将1摩尔三臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA与10摩尔的N-羟基琥珀酰亚胺，10摩尔 的N-环己基碳二亚胺和10摩尔的4-二甲氨基吡啶溶于200ml二氯甲烷中，在搅拌和氮气保 护下，室温下反应36h得反应液4，将反应液4浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重， 溶于100ml二氯甲烷中；

(6)将12摩尔的双端氨基PEG溶于100ml的二氯甲烷中；

(7)将步骤(5)获得的溶液在氮气保护下逐滴加入到步骤(6)获得的溶液中，在搅拌和氮 气保护、室温下反应60h，抽滤除去不溶物，滤液经重沉淀法处理得到白色粘稠状产物；再 用100ml冰冻甲醇洗涤5次除去过量的双端氨基PEG，产物于室温真空干燥48h得三臂过氧 化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG，其中PLGA分子量为41100。

实施例4

一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG的制备方法，包括如下步骤：

(1)在聚合管中加入单体乙交酯和丙交酯，加入催化剂辛酸亚锡，引发剂三羟甲基丙烷，抽 真空并以氮气置换3次，在真空度为50Pa条件下封聚合管，130℃反应10小时，得到三臂聚 乙丙交酯聚合物PLGA；所述乙交酯和丙交酯的摩尔比为1:3，辛酸亚锡与单体乙交酯和丙交 酯总量的摩尔比为1：8000，三羟基丙烷与单体乙交酯和丙交酯总量的摩尔比为1:100；

(2)按比例取1摩尔三臂聚乙丙交酯聚合物PLGA和5摩尔的对羟基苯甲酸溶于40ml的二氯 甲烷中，加入6摩尔的4-二甲氨基吡啶得溶液1；将7摩尔的N-环己基碳二亚胺溶于120ml 二氯甲烷后滴入溶液1中，在搅拌和氮气保护下，室温下反应24h得反应液1，将反应液1 浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重得三臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA；三臂端苯 酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA(PLGA的分子量为13700)其红外光谱图见图1。

(3)按比例取三臂端苯酚基聚乙丙交酯聚合物PLGA和12摩尔吡啶,加入到120ml二氯甲烷 中溶解得到溶液2，在冰浴条件下，向溶液2中滴入70ml浓度为5M的草酰氯-二氯甲烷溶液， 滴加完毕后继续反应8h，得反应液2；将反应液2滴加到60ml浓度为40M对羟基苯甲酸-N,N- 二甲基甲酰胺溶液中，室温下搅拌12小时；用60ml浓度为2mol/L的盐酸水溶液洗涤4次， 用60ml饱和氯化钠水溶液洗涤4次，再向有机相中加入15g的无水碳酸钠和100g无水硫酸 镁，放置25min，过滤，滤液浓缩后经重沉淀法处理得到三臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA； 三臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA(PLGA分子量为13700)其红外光谱图见图2。

(4)按比例将1摩尔的PEG5000与10摩尔的三乙胺加入到60ml二氯甲烷中溶解得溶液3， 将60摩尔的对甲基苯磺酰氯溶解于20ml二氯甲烷后逐滴滴加到溶液3中，室温下反应10h； 用70ml浓度为2mol/L的盐酸水溶液洗涤3次，用50ml饱和氯化钠水溶液洗涤3次，再向有 机相中加入7g的无水碳酸钠和80g无水硫酸镁，过滤，将滤液浓缩后经重沉淀法处理得到白 色沉淀；在N₂气保护下，将白色沉淀溶于90ml N,N-二甲基甲酰胺中在70℃搅拌下逐滴加入 到30ml乙二胺中反应27h得反应液3，将反应液3浓缩后经重沉淀法处理得白色粉末状固 体产物双端氨基PEG；双端氨基PEG(PEG的分子量是5000)其红外光谱图见图3。

(5)将1摩尔三臂端羧基聚乙丙交酯聚合物PLGA与7摩尔的N-羟基琥珀酰亚胺，7摩尔的 N-环己基碳二亚胺和7摩尔的4-二甲氨基吡啶溶于100ml二氯甲烷中，在搅拌和氮气保护下， 室温下反应20h得反应液4，将反应液4浓缩后经重沉淀法处理，真空干燥至恒重，溶于40ml 二氯甲烷中；

(6)将7摩尔的双端氨基PEG溶40ml的二氯甲烷中；

(7)将步骤(5)获得的溶液在氮气保护下逐滴加入到步骤(6)获得的溶液中，在搅拌和氮 气保护、室温下反应35h，抽滤除去不溶物，滤液经重沉淀法处理得到白色粘稠状产物；再 用70ml冰冻甲醇洗涤3次除去过量的双端氨基PEG，产物于室温真空干燥30h得三臂过氧化 氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG。

本实施例制备的三臂过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG(其中PLGA的分子量为 13700，PEG的分子量为5000)的核磁数据：

R＝H：¹H-NMR(CDCl₃,500MHz)；δ1.458-1.608(m,9H,DLA-CH3)；

δ5.005-5.305(m,3H,DLA-CH)；δ4.701-4.902(m,2H,GA-H2)；δ3.401-3.605(m,30H,PEG-H2)；

本实施例制备的三臂过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG(PLGA的分子量为13700， PEG的分子量为5000)其红外光谱见图4。

用季戊四醇，双季戊四醇或肌醇替代实施例4的引发剂，其它同实施例4，分别制备出 四臂、八臂、六臂型过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG。

实施例5

以实施例4制备的三臂PLGA及三臂过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG为载体材 料，经高速搅拌乳化溶剂挥发法制备空白纳米粒子，纳米粒子经过高速离心后冷冻干燥保存。 分别称取1mgPLGA纳米粒子，1mg PEG及1mgPLGA-PEG纳米粒子分别溶于浓度为5uM的过氧 化氢溶液中，在室温下反应20h后分别测试各个溶液过氧化氢浓度。图5为过氧化氢敏感型 两亲性生物材料PLGA-PEG纳米粒对过氧化氢敏感结果。由图5可以看出，相对于PLGA纳米 粒子溶液和PEG溶液，PLGA-PEG纳米粒子溶液中过氧化氢浓度更低，可以得出PLGA-PEG具 有过氧化氢敏感的特性。

实施例6

以实施例4制备的一种过氧化氢敏感型两亲性生物材料PLGA-PEG为载体材料，经高速搅 拌乳化溶剂挥发法制备成携带基因(1.5％的VEGF基因)的纳米粒子，在下肢缺血动物模型 缺血部位经肌肉注射给予治疗，可有效地促进新生血管的生成，治疗效果见结果图6和图7。

图6为本发明制备的纳米载体在下肢缺血动物模型上肌肉注射后7天血管造影结果。图 6中A图为下肢动脉闭塞模型血管造影；B图为VEGF裸质粒治疗组血管造影结果；C图为本 发明制备的生物材料作为载体制备的携带VEGF的纳米粒子治疗组的血管造影结果。可以看 出：C图与A、B两图相比，C图有新生血管生成。图7为纳米载体在下肢缺血动物模型上肌 肉注射后7天血管造影新生血管密度结果。从图7可以看出VEGF纳米粒子治疗组新生血管密 度明显高于对照组以及VEGF裸质粒组，并有显著的统计学差异。