测定非洛地平缓释片体外溶出的方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种测定非洛地平缓释片体外溶出的方法。

背景技术

目前体外溶出实验被认为可以预估体内溶出行为和吸收情况，但是，人体内环境复杂，容易造成制剂间体外溶出行为相似而体内BE不等效的现象，给企业研发进展带来阻碍，也带来经济负担。

非洛地平，化学名称为2,6-二甲基-4-(2,3-二氯苯基)-1,4-二氢-3,5-吡啶二甲酸甲乙酯，分子式为C

常规溶出模式有篮法或浆法，存在诸多结构和性能方面的缺陷，无法全面模拟体内的药物溶出/吸收过程，使得溶出检查仅仅作为药物体外控制的一种质量手段，无法与体内的实际情况相关联。传统的溶出方法是封闭的溶出系统模式，无法实现模拟体内胃肠道蠕动和流体动力学等生理条件；介质体积和溶出介质类型如果不合理，容易出现与体内情况不符合，进而对于药物制剂溶出的区分度不够明显，不能真实地反映体内实际的溶出行为。基于不同剂型和不同规格的非洛地平，在体外溶出过程中，有必要选择合适的方法，以期恰当地模拟药物的溶出/吸收机理，为良好预测人体生物等效性提供参考。

中国专利申请CN201510155510.0公开了一种非洛地平缓释片及其制备工艺，通过非洛地平片的质量检测实验，采用浆板法进行溶出度检测，不能真实反映体内实际的溶出行为，具有一定的局限性。

因此，开发一种模拟体内吸收的体外溶出方法，对于医药企业来说具有重要的意义。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种测定非洛地平缓释片体外溶出的方法，通过模拟体内溶出和吸收的动态持续过程，测定非洛地平缓释片溶出浓度，进而实现良好预测人体生物等效性。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明提供一种测定非洛地平缓释片体外溶出的方法，将非洛地平缓释片利用模拟难溶性口服药物制剂体内溶出和跨膜吸收过程的二室模型实验装置进行溶出，具体步骤为：

1）溶出介质经进液泵作用进入多孔滤膜杯，待多孔滤膜杯和外室溶出杯中溶出介质体积相同时，开启出液泵，进液泵和出液泵的工作频率一致，保持溶出介质的总体积不变；溶出介质为0.1~0.5%十二烷基硫酸钠的pH 6.8磷酸盐缓冲液，多孔滤膜杯外包覆的滤膜孔径为0.45 μm；

2）将非洛地平缓释片置于转篮中，转篮的转速为50~300 rpm，溶出液经滤膜过滤后持续提取溶出液，溶出液的提取速度与溶出介质的补充速度均为5~12 mL/min，在固定的时间点测定溶出液中非洛地平的浓度，直至非洛地平缓释片溶出完成；

3）采用高效液相测定溶出液中在不同时间点的非洛地平的平均溶出浓度，将对应时间点和非洛地平的平均溶出浓度，得到非洛地平的平均溶出浓度和溶出时间之间的平均微分溶出曲线图，根据微分溶出关系得到累积溶出质量分数与溶出时间之间的累积溶出曲线图。

进一步地，所述溶出介质为0.1%、0.15%、0.2%、0.3%、0.5% 十二烷基硫酸钠的pH6.8磷酸盐缓冲液。其中0.1~0.5% 十二烷基硫酸钠的pH 6.8磷酸盐缓冲液，是指1000 mL磷酸盐缓冲液中含有1~5g 十二烷基硫酸钠。通过实验证明，使用合适的溶出介质进行体外溶出实验，获得的体外溶出曲线区分度较好，能适度区分受试制剂与参比制剂的质量优劣和工艺差异，稳定性高，满足要求，在进行溶出曲线测定时，测定结果可重现。

进一步地，所述溶出液中非洛地平的浓度采用高效液相测定，具体过程为：将溶出液进行离心处理后，精密量取20 μL ，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，计算对应的非洛地平的浓度；所述离心处理条件为：2号转子，4000rpm，5 min。

进一步地，高效液相仪的色谱条件：C18（20-H046）；流动相：甲醇-乙腈-超纯水=体积比（5:3:2）；流速：1 mL/min；波长：238 nm；进样量：20 μL；柱温：35℃。

根据非洛地平缓释片的微分溶出数据，得到其累积溶出分数与溶出时间之间的累积溶出关系的计算公式为：

其中，F

进一步地，所述非洛地平缓释片包括参比制剂和受试制剂，采用相似因子法，利用非洛地平缓释片的参比制剂和受试制剂的平均溶出浓度数据，计算相似因子f2，所述相似因子f2用于比较非洛地平缓释片的参比制剂溶出曲线和受试制剂溶出曲线的相似性；利用相似因子f2的值判断相似性时，相似因子f2大于或等于50时，非洛地平缓释片的参比制剂和受试制剂的溶出度曲线相似，相似因子f2小于50时，非洛地平缓释片的参比制剂和受试制剂的溶出度曲线不相似。

根据所述参比制剂的累积溶出关系及所述受试制剂的累积溶出关系，得到所述参比制剂的累积溶出关系及所述受试制剂的累积溶出关系之间的相似因子的计算公式为：

其中，f

进一步地，所述溶出介质的温度控制在（37±0.5）℃。通过实验证明，溶出介质的温度使得非洛地平具有较高的稳定性，同时也利于模拟人体内温度，测得的溶出曲线更接近体内吸收的趋势。

进一步地，所述溶出液的提取速度与溶出介质的补充速度为5 mL/min、6 mL/min、8 mL/min、10 mL/min或12 mL/min。

进一步地，所述转篮的转速为50~100 rpm。优选地，所述转篮的转速为100 rpm。在该转速条件下，溶出度高，不会出现水动力学紊乱。

进一步地，所述固定的时间点为5、10、20、30、45、60、90、120、150、180、210、240min等等，直至非洛地平缓释片溶出完成。所述非洛地平缓释片在240min，完全溶出，在转篮中没有残留物，大大提升缓释片溶出的质量可控性和溶出度的稳定性。

进一步地，所述模拟难溶性口服药物制剂体内溶出和跨膜吸收过程的二室模型实验装置在专利CN201920858418.4中公开。

进一步地，所述非洛地平缓释片的规格为5 mg。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

本发明采用模拟难溶性口服药物制剂体内溶出和跨膜吸收过程的二室模型实验装置，实现维持溶出介质的恒温，确保模拟体内胃肠道的生理温度。相比普通的流通池类溶出仪的释放模式和现有的浆板法，本发明采用的横向剪切力进行搅拌，能克服药物的粘聚力和破坏药物表面形成的水凝胶结构，可模拟体内胃肠道的生理蠕动和食物摩擦作用，对药物溶出/释放过程具有促进作用；采用滤膜将未溶解的药物滤除，可以模拟药物的体内吸收作用，对于药物体外溶出和体内吸收的模拟更接近人体对药物吸收的过程，利于体外溶出和体内吸收的相关性判断。

本发明方法通过不断的输入新鲜介质和输出含药介质，以保持非洛地平缓释片药物制剂的漏槽条件，通过形成开放式溶出模型，有效模拟体内吸收状态。通过检测不同取样点的药物浓度，区分非洛地平缓释片药物制剂单位时间内的溶出能力，进而预判非洛地平缓释片在人体内的吸收能力。

本发明实施例证明本发明方法模拟体内吸收过程，保证体外溶出实验的准确度，实现体外溶出实验测定的溶出曲线趋势与BE实验体内吸收药-时曲线趋势一致，不仅可以评价非洛地平缓释片的优劣，进而指导制剂研发，同时也为生物等效性做出预测，提高生物等效性实验的成功率，保证药品上市后的生物有效性。

对比实施例1、实施例3中，参比制剂的溶出曲线相似（线形和趋势均相同），进一步说明本发明所提供的方法具有良好的可重现性，溶出方法稳定性好。

对比实施例1、实施例3中，各受试制剂的溶出曲线，溶出速率各有不同，受试制剂与参比制剂之间具有较好的区分度，可以有效区分参比制剂和受试制剂之间的质量优劣及工艺差异，实现对各参比制剂相似性及质量一致性的评估。

对比实施例1和实施例3结合实施例2的实验数据，体外溶出曲线和体内BE实验趋势一致，为生物等效性做出预测，可提高生物等效性实验的成功率，保证上市后药物的生物有效行，降低研发风险。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1实施例1中5 mg非洛地平缓释片参比制剂的平均微分溶出曲线图。

图2实施例1中5 mg非洛地平缓释片参比制剂的平均累积溶出曲线图。

图3 实施例3中5 mg非洛地平缓释片参比制剂和受试制剂平均微分溶出曲线。

图4实施例3中5 mg非洛地平缓释片参比制剂和受试制剂平均累积溶出曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1

一种测定非洛地平缓释片体外溶出的方法，将非洛地平缓释片利用模拟难溶性口服药物制剂体内溶出和跨膜吸收过程的二室模型实验装置进行溶出，具体步骤为：

1）溶出介质经进液泵作用进入多孔滤膜杯，待多孔滤膜杯和外室溶出杯中溶出介质体积相同时，开启出液泵，进液泵和出液泵的工作频率一致，保持溶出介质的总体积不变；溶出介质为0.3%十二烷基硫酸钠的pH 6.8磷酸盐缓冲液，多孔滤膜杯外包覆的滤膜孔径为0.45 μm；

2）将非洛地平缓释片置于转篮中，转篮的转速为100 rpm，溶出液经滤膜过滤后持续提取溶出液，溶出液的提取速度与溶出介质的补充速度均为6 mL/min，在5、10、20、30、45、60、90、120、150、180、210、240 min时间点测定溶出液中非洛地平的浓度，直至非洛地平缓释片溶出完成；

3）采用高效液相测定溶出液中在不同时间点的非洛地平的平均溶出浓度，将对应时间点和非洛地平的平均溶出浓度，得到非洛地平的平均溶出浓度和溶出时间之间的平均微分溶出曲线图，根据微分溶出关系得到累积溶出质量分数与溶出时间之间的累积溶出曲线图；

所述溶出液中非洛地平的浓度采用高效液相测定，具体过程为：将溶出液进行离心处理后，精密量取20 μL ，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，计算对应的非洛地平的浓度；所述离心处理条件为：2号转子，4000 rpm，5 min。

高效液相仪的色谱条件：C18（20-H046）；流动相：甲醇-乙腈-超纯水=体积比（5:3:2）；流速：1 mL/min；波长：238 nm；进样量：20 μL；柱温：35℃。

参比制剂：非洛地平缓释片，规格5 mg；

受试制剂一：非洛地平缓释片，规格5 mg；

在上述溶出条件下，非洛地平缓释片参比和两受试制剂的体外溶出结果如图1~2所示，受试制剂一的累积溶出度略低于参比制剂的累积溶出度，并且溶出开始30 min后，受试制剂一的微分溶出速度也要略慢于参比制剂。

实施例2

采用随机、开放、三周期、交叉实验设计对12例健康志愿者进行餐前的生物等效性研究，周期间洗脱期为7天，每周志愿者分别口服非洛地平缓释片参比制剂或受试制剂5mg/次，一日1次，采血时间设计为给药前（0h）及给药后10min、20min、30min、45min、1.0h、1.25h、1.5h、1.75h、2h、2.5h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、12h、15h、24h、36h分别采集上肢静脉血4 mL。样品离心（3,500 rpm，10min），分离血浆，置于-80℃超低温冰箱中保存。具体地，取100 μL血浆样品，加入600 μL无水甲醇（含内标），涡旋5 min，充分混匀，12,000 rpm离心10min，取上清进高效液相色谱串联质谱仪分析血浆中非洛地平的含量。

结论如表1所示：

表1 空腹非洛地平的主要药动学参数汇总

表2 空腹非洛地平的LnC

体内BE预试验的结果表明，受试制剂一的T

实施例3

一种测定非洛地平缓释片体外溶出的方法，将非洛地平缓释片利用模拟难溶性口服药物制剂体内溶出和跨膜吸收过程的二室模型实验装置进行溶出，具体步骤为：

1）溶出介质经进液泵作用进入多孔滤膜杯，待多孔滤膜杯和外室溶出杯中溶出介质体积相同时，开启出液泵，进液泵和出液泵的工作频率一致，保持溶出介质的总体积不变；溶出介质为0.3%十二烷基硫酸钠的pH 6.8磷酸盐缓冲液，多孔滤膜杯外包覆的滤膜孔径为0.45 μm；

2）将非洛地平缓释片置于转篮中，转篮的转速为100 rpm，溶出液经滤膜过滤后持续提取溶出液，溶出液的提取速度与溶出介质的补充速度均为6 mL/min，在固定的时间点测定溶出液中非洛地平的浓度，直至非洛地平缓释片溶出完成；

3）采用高效液相测定溶出液中在不同时间点的非洛地平的平均溶出浓度，将对应时间点和非洛地平的平均溶出浓度，得到非洛地平的平均溶出浓度和溶出时间之间的平均微分溶出曲线图，根据微分溶出关系得到累积溶出质量分数与溶出时间之间的累积溶出曲线图；

所述溶出液中非洛地平的浓度采用高效液相测定，具体过程为：所述溶出液中非洛地平的浓度采用高效液相测定，具体过程为：将溶出液进行离心处理后，精密量取20 μL，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，计算对应的非洛地平的浓度；所述离心处理条件为：2号转子，4000 rpm，5 min。

高效液相仪的色谱条件：C18（20-H046）；流动相：甲醇-乙腈-超纯水=体积比（5:3:2）；流速：1 mL/min；波长：238 nm；进样量：20 μL；柱温：35℃。

参比制剂：非洛地平缓释片，规格5 mg；

受试制剂二：非洛地平缓释片，规格5 mg；

受试制剂三：非洛地平缓释片，规格5 mg；

受试制剂四：非洛地平缓释片，规格5 mg；

在上述溶出条件下，非洛地平缓释片参比和两受试制剂的体外溶出结果如图3-4所示，实验结果表明，三批受试制剂的累积溶出度均比参比制剂的累积溶出度略高，其中受试制剂二与参比制剂的累积溶出度更加接近。从微分溶出曲线可以看出，受试制剂二与参比制剂的微分溶出曲线比较接近，两个制剂的溶出行为相似。另外受试制剂三和受试制剂四的溶出速度略快于参比制剂。

本实施例中受试制剂二~受试制剂四中的配方在实施例1~2的受试制剂一的基础上进行组分比例微调。通过本发明实施例3的实验，得到受试制剂二~四的溶出速度相比受试制剂一的溶出速度加快。基于实施例1~2关于受试制剂一的实验结论，受试制剂二的溶出行为与参比制剂的溶出行为最相似，后续可考虑受试制剂二的进一步BE预实验。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。