一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法

技术领域

本发明涉及药物制备技术领域，尤其涉及一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法。

背景技术

据文献报道，泊沙康唑对映异构体的疗效不如泊沙康唑，因此，考虑到用药的安全性和有效性，需要严格控制泊沙康唑注射液中对映异构体的含量。目前泊沙康唑注射液无药典等法定标准。因此，有必要开发一种检测泊沙康唑注射液中对映异构体的方法，该方法必须能够有效分离泊沙康唑及其对映异构体。有鉴于此，本发明提供了一种方法，能够满足该要求，该方法能够有效分离泊沙康唑及其对映异构体，保证检测的有效性，能够准确严格地控制泊沙康唑注射液的质量。

泊沙康唑注射液中泊沙康唑对映异构体与泊沙康唑结构和极性相似，采用一般的反相色谱法不能有效分离，需要采用正相色谱法进行检测，色谱柱为正相色谱柱，流动相和溶剂均采用有机试剂，不能含水。但是泊沙康唑注射液为水溶液制剂，故需要采用萃取法，用有机试剂对注射液中对映异构体和泊沙康唑进行提取，然后再配制溶液，进行检测。

发明内容

本发明的目的在于解决现有泊沙康唑注射液中异构体检测方法的不足，提供了一种方法，该方法能够有效分离泊沙康唑及其对映异构体，保证检测的有效性，能够准确严格地控制泊沙康唑注射液的质量。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案是：

一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法，包括以下步骤：

步骤一，配制系统适用性溶液：取泊沙康唑、杂质A(对映异构体)适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml分别含泊沙康唑1mg、杂质A 2μg的溶液，作为系统适用性溶液；

步骤二，配制供试品溶液，精密量取泊沙康唑注射液6ml，置具塞试管中，加入10ml萃取剂，其中泊沙康唑注射液、萃取剂的体积比例为1:10～2:1，涡旋5-30min，静置使分层，精密量取下层有机相5ml，置于50ml量瓶中，蒸干、加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，所述供试品溶液中泊沙康唑浓度为0.2mg/ml～5mg/ml；

步骤三，配置对照溶液，取供试品溶液适量，用无水乙醇稀释制成对照溶液，其中对照溶液中泊沙康唑的浓度可为1μg/ml～10μg/ml；

步骤四，设置色谱条件，按照高效液相色谱法测定，用硅胶表面涂敷纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱(推荐Daicel CHIRALCEL OD-H柱，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，其中色谱条件，流动相由正己烷、无水乙醇、甲醇组成，其中正己烷、无水乙醇、甲醇的百分比体积含量占比设置为：正己烷的体积占比为20％～30％、无水乙醇的体积占比为20％～30％、甲醇的体积占比为40％～60％；流速设为每分钟0.3ml～0.5ml，柱温设为30℃～50℃，检测波长设为254nm～265nm，进样体积设为5μl～20μl；

步骤五，系统适用性要求：取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录系统适用性溶液的色谱图，泊沙康唑峰与杂质A(对映异构体)峰的分离度应符合要求(≥1.5)；

步骤六，检测方法：精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录取供试品溶液和对照溶液的色谱图；

步骤七，数据对比计算，供试品溶液的色谱图中如有与杂质A保留时间一致的色谱峰，其峰面积与对照溶液的主峰面积进行比较。

为了进一步优化本发明，可优先采用以下技术方案：

优选的，所述步骤二中萃取剂为二氯甲烷、乙醚、四氯化碳中的一种。

优选的，所述步骤二中涡旋时间为10min。

优选的，所述步骤二中，泊沙康唑注射液与萃取剂的比例为6：10，所述供试品溶液浓度为1mg/ml。

优选的，所述步骤三中对照溶液的浓度可为2μg/ml

优选的，所述步骤四中流动相中，所述正己烷、无水乙醇、甲醇的含量百分比值为正己烷：无水乙醇：甲醇＝25:25:50。

优选的，所述步骤四中色谱参数设置包括：流速为每分钟0.4ml，柱温为40℃，检测波长为262nm，进样体积10μl。

优选的，所述步骤七中计算方法为面积归一化或自身对照法或外标法。

本发明的有益效果是：

本方法能够有效提取泊沙康唑注射液中的对映异构体，并对其进行检测。且通过对本方法进行方法学验证可知，本方法的专属性强，灵敏度较高，准确度(回收率)较好，线性、重复性、中间精密度及耐用性均符合可接受标准规定。

说明书附图

图1为空白溶剂图谱；

图2为空白辅料图谱

图3为系统适用性图谱；

具体实施方式

实施例1：

一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法，包括以下步骤：

步骤一，配制系统适用性溶液：取泊沙康唑、杂质A(对映异构体)适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml分别含泊沙康唑1mg、杂质A 2μg的溶液，作为系统适用性溶液；

步骤二，配制供试品溶液，精密量取泊沙康唑注射液6ml，置具塞试管中，加入10ml萃取剂，其中泊沙康唑注射液、萃取剂的比例为1:10，涡旋5-30min，静置使分层，精密量取下层有机相5ml，置于50ml量瓶中，蒸干、加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，所述供试品溶液浓度中泊沙康唑为0.2mg/ml；

步骤三，配置对照溶液，取供试品溶液适量，用无水乙醇稀释制成对照溶液，其中对照溶液中泊沙康唑的浓度可为1μg/ml；

步骤四，设置色谱条件，按照高效液相色谱法测定，用硅胶表面涂敷纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱(推荐Daicel CHIRALCEL OD-H柱，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，其中色谱条件，流动相由正己烷、无水乙醇、甲醇组成，正己烷、无水乙醇、甲醇以百分比含量设置为：正己烷的比例为30％、无水乙醇的比例为30％、甲醇的比例为40％；流速设为每分钟0.3ml，柱温设为30℃，检测波长设为254nm，进样体积设为5μl；

步骤五，系统适用性要求：取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录系统适用性溶液的色谱图，泊沙康唑峰与杂质A(对映异构体)峰的分离度应符合要求(≥1.5)；

步骤六，检测：精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录取供试品溶液和对照溶液的色谱图；

步骤七，数据对比计算，供试品溶液的色谱图中如有与杂质A保留时间一致的色谱峰，其峰面积与对照溶液的主峰面积进行比较。

实施例2：

一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法，包括以下步骤：

步骤一，配制系统适用性溶液：取泊沙康唑、杂质A(对映异构体)适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml分别含泊沙康唑1mg、杂质A 2μg的溶液，作为系统适用性溶液；

步骤二，配制供试品溶液，精密量取泊沙康唑注射液6ml，置具塞试管中，加入10ml萃取剂，其中泊沙康唑注射液、萃取剂的比例为6:10，涡旋15min，静置使分层，精密量取下层有机相5ml，置于50ml量瓶中，蒸干、加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，所述供试品溶液浓度中泊沙康唑为3mg/ml；

步骤三，配置对照溶液，取供试品溶液适量，用无水乙醇稀释制成对照溶液，其中对照溶液的浓度中泊沙康唑为5μg/ml。；

步骤四，设置色谱条件，按照高效液相色谱法测定，用硅胶表面涂敷纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱(推荐Daicel CHIRALCEL OD-H柱，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，其中色谱条件，流动相由正己烷、无水乙醇、甲醇组成，正己烷、无水乙醇、甲醇以百分比含量设置为：正己烷的比例为25％、无水乙醇的比例为25％、甲醇的比例为50；流速设为每分钟0.3ml～0.5ml，柱温设为40℃，检测波长设为260nm，进样体积设为15μl；

步骤五，系统适用性要求：取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录系统适用性溶液的色谱图，泊沙康唑峰与杂质A(对映异构体)峰的分离度应符合要求(≥1.5)；

步骤六，检测：精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录取供试品溶液和对照溶液的色谱图；

步骤七，数据对比计算，供试品溶液的色谱图中如有与杂质A保留时间一致的色谱峰，其峰面积与对照溶液的主峰面积进行比较。

实施例3：

一种有效检测泊沙康唑注射液中异构体的方法，包括以下步骤：

步骤一，配制系统适用性溶液：取泊沙康唑、杂质A(对映异构体)适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml分别含泊沙康唑1mg、杂质A 2μg的溶液，作为系统适用性溶液；

步骤二，配制供试品溶液，精密量取泊沙康唑注射液6ml，置具塞试管中，加入10ml萃取剂，其中泊沙康唑注射液、萃取剂的比例为2:1，涡旋30min，静置使分层，精密量取下层有机相5ml，置于50ml量瓶中，蒸干、加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，所述供试品溶液中泊沙康唑浓度为5mg/ml；

步骤三，配置对照溶液，取供试品溶液适量，用无水乙醇稀释制成对照溶液，其中对照溶液中泊沙康唑的浓度可为10μg/ml。；

步骤四，设置色谱条件，按照高效液相色谱法测定，用硅胶表面涂敷纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱(推荐Daicel CHIRALCEL OD-H柱，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)，其中色谱条件，流动相由正己烷、无水乙醇、甲醇组成，正己烷、无水乙醇、甲醇以百分比含量设置为：正己烷的比例为30％、无水乙醇的比例为20％％、甲醇的比例为60％；流速设为每分钟0.5ml，柱温设为50℃，检测波长设为265nm，进样体积设为20μl；

步骤五，系统适用性要求：取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录系统适用性溶液的色谱图，泊沙康唑峰与杂质A(对映异构体)峰的分离度应符合要求(≥1.5)；

步骤六，检测方法：精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录取供试品溶液和对照溶液的色谱图；

步骤七，数据对比计算，供试品溶液的色谱图中如有与杂质A保留时间一致的色谱峰，其峰面积与对照溶液的主峰面积进行比较。

实验1：色谱对比实验

选择空白溶剂：无水乙醇；空白辅料溶液：精密量取空白辅料制剂6ml，置具塞试管中，精密加入二氯甲烷10ml，涡旋10min，静置使分层，精密量取下层有机相5ml，置50ml量瓶中，水浴蒸干，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

杂质A对照品储备液：精密称取杂质A对照品5mg，置50ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性溶液：精密称取泊沙康唑对照品10mg，置10ml量瓶中，加适量溶剂溶解，精密加入杂质A对照品储备液0.2ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：精密量取本品6ml，置具塞试管中，精密加入二氯甲烷10ml，涡旋10min，静置使分层，精密量取下层有机相5ml，置50ml量瓶中，水浴蒸干，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

通过图1、图2、图3对比分析可得结论：空白溶剂、空白辅料不干扰本品检测，专属性满足要求。系统适用性溶液中杂质A峰与泊沙康唑峰的分离度大于1.5，系统适用性满足要求，表明此方法专属性良好。

检测限定量限

结论：对映异构体的检测限浓度和定量限浓度均远小于限度浓度，说明本方法的灵敏度较高，能够满足检测要求。

实验2：准确度(回收率)

结论：20％限度回收率溶液中对映异构体的回收率在85％～110％之间，50％、100％、150％限度回收率溶液中对映异构体的回收率在90％～108％之间，均符合中国药典可接受标准规定，说明本方法能够准确提取样品中的对映异构体并能够准确检出。