Caco-2细胞模型

摘要： Caco-2细胞源自于人结肠癌细胞系,其表现出许多与小肠上皮细胞相似的特性,具有微绒毛结构、刷状边缘以及细胞间紧密连接等,是目前应用最广泛、最经典的模型之一。近年来,随着细胞培养技术的发展,通过体外细胞培养来评价食品功能因子的吸收、代谢机制及其功能成为研究热点。本文从Caco-2细胞模型的建立和评估方法入手,对功能食品提取物在Caco-2细胞中的抗炎、抗氧化、抗增殖等功能性进行系统概述,再结合功能食品提取物在Caco-2细胞中的吸收、代谢、转运机制,对Caco-2细胞模型在共培养等方面的研究进行展望,以期改进Caco-2细胞模型的局限性,为进一步研发准确度高,材料成本低,更接近人体内部环境的细胞培养模型奠定基础。

摘要： 为了探究具有降胆固醇生物活性的大豆多肽在机体内的转运吸收机制,本研究以3种降胆固醇大豆肽VAWWMY(VY-6)、LPYPR(LR-5)、WGAPSL(WL-6)为研究对象,以22-NBD胆固醇胶束孵育的Caco-2细胞模型为高胆固醇模型,探究这3种多肽抑制胆固醇溶解,影响细胞吸收胆固醇与抑制胆固醇正向转运的能力。研究结果表明,在抑制胆固醇溶解率方面:WL-6多肽浓度为0.5 mmol/L时,在3种多肽中的抑制率最高,达14.2%,之后随浓度升高抑制率降低;在抑制细胞对胆固醇吸收方面:VY-6多肽浓度为2 mmol/L时,抑制率最大为43.1%,LR-5多肽浓度为2.5 mmol/L时,抑制率最大为45.7%,WL-6多肽浓度为2 mmol/L时,抑制率最大为45.93%,WL-6多肽在3种大豆肽中的抑制能力最强,且高于辛伐他汀组;在抑制胆固醇转运能力方面:WL-6多肽浓度为2 mmol/L时,可抑制30.7%的胆固醇转运,抑制率最高。综上可知WL-6多肽在3种大豆多肽中的降胆固醇能力最强。

摘要： 目的 研究佐匹克隆的生物药剂学分类系统(BCS),并对原研和3家仿制企业原料的关键理化性质进行对比评价,为佐匹克隆片剂的一致性评价提供依据.方法 检测pH 6.8和pH 7.4的磷酸盐缓冲液中佐匹克隆的固有溶出速率;分别采用差示扫描量热法(DSC)和X射线粉末衍射法对佐匹克隆的晶型进行考察;采用高效液相色谱(HPLC)法测定佐匹克隆不同pH介质中的平衡溶解度及表观油水分配系数;分别采用平行人工膜渗透性模型(PAMPA)和Caco-2细胞模型,考察佐匹克隆的有效渗透性.对佐匹克隆的BCS进行初步判定,并考察原研与仿制企业原料的差异.结果 原研与仿制企业的佐匹克隆晶型为同一晶型,为对映异构体形成的无水非中心对称的正交晶型化合物;佐匹克隆在酸性介质中溶解度最高,为高溶解度药物;表观油水分配系数结果表明,佐匹克隆在胃内几乎无吸收,在不同肠段存在不同程度的吸收;PAMPA和Caco-2细胞模型均判定佐匹克隆为高渗透性药物,P-gp转运体参与佐匹克隆的肠道转运过程.原研与仿制企业原料的固有溶出速率、晶型、溶解度、表观油水分配系数和有效渗透性基本一致.结论 佐匹克隆为BCSⅠ类药物;原研与仿制企业原料的关键理化性质基本一致;为佐匹克隆片的体外溶出行为评价和体内外相关性研究提供数据支撑.

摘要： 基于Caco-2细胞模型研究了二肽基肽酶-4(DPP-Ⅳ)抑制肽(IPQVS)的活性,评价了小肠吸收与降解作用对DPP-Ⅳ抑制活性的影响.测定了IPQVS和其降解肽片段PQVS、QVS、VS的表观渗透系数(Papp),分别为(1.35±0.09)×10-6、(1.46±0.18)×10-6、(0.95+0.08)×10-6、(3.01+0.15)×10-6 cm/s.其中,IPQVS主要是通过胞吞的形式跨Caco-2细胞单层转运,IPQVS以剂量依赖型方式抑制Caco-2细胞单层中的DPP-Ⅳ活性,不会影响DPP-Ⅳ中mRNA的表达(P＞0.05),其IC50为(101.66±6.02) μmol/L,数值高于体外化学底物法测量值.分子对接结果表明DPP-Ⅳ和IPQVS降解产物(PQVS和QVS)的结合弱于IPQVS,结合的位点也发生了明显减少,这极大限制了IPQVS的DPP-Ⅳ抑制活性.

摘要： 使用马脾铁蛋白包封降血压活性肽AHLL,通过紫外、荧光和圆二光谱研究AHLL荷载对HSF结构的影响.在此基础上,研究铁蛋白包封对AHLL稳定性以及体外胃肠道消化过程中血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的影响作用,并开展复合纳米颗粒(HSF-AHLL)的细胞转运试验.结果表明,AHLL载运显著降低了HSF的α-螺旋结构和β-转角结构,而β-折叠结构含量和无规卷曲含量增加,另外,包埋后HSF四重轴通道上的色氨酸微环境被改变.HSF-AHLL的热稳定性、pH稳定性和紫外稳定性明显高于游离AHLL.在模拟胃消化过程中,结合态与游离态AHLL的ACE抑制活性在胃液中下降明显,而在肠液中变化不明显.HSF-AHLL在Caco-2细胞上的转运试验具有一定方向性.吸收(AP→BL)大于外排(BL→AP),HSF-AHLL在Caco-2细胞单层膜上以细胞旁路转运为主,内吞抑制剂和肽载体抑制剂对HSF-AHLL的转运没有明显影响,而脱氧胆酸钠能打开细胞间通路促进其转运;HSF-AHLL的转运与多药耐药蛋白抑制剂形成竞争性抑制,HSF-AHLL的转运对温度具有一定的依赖性,属于能量依赖型转运.

摘要： 目的:研究一枝蒿黄酮类成分6-去甲氧基-4'-O-甲基茵陈色原酮(DM)在Caco-2细胞模型中的转运特性.方法:采用Caco-2细胞单层模型研究DM的双向转运,考察药物质量浓度、方向和温度对DM细胞转运的影响.应用HPLC法,采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1％醋酸水溶液为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长280 nm,柱温25°C,检测DM在介质中的含量,计算其表观渗透系数(Papp).结果:DM的细胞转运Papp随着浓度的增大而减小,呈现浓度依赖性;低温条件下时,DM的双向的Papp值均显著性降低.结论:DM在Caco-2细胞单层模型中的转运过程主要以主动转运载体介导的方式,没有方向依赖性,也不涉及外排蛋白转运载体.

摘要： 目的:以Caco-2模型研究石榴皮中安石榴苷的肠吸收特征及机制.方法:通过细胞培养技术建立Caco-2细胞模型,并通过细胞形态学特征、细胞跨膜电阻值等指标验证筛选可用模型.考察不同浓度的安石榴苷对Caco-2细胞的毒性以确定实验给药浓度.建立HPLC测定安石榴苷累积转运量,进而通过Caco-2细胞转运实验研究时间、温度、pH值、P-糖蛋白抑制剂维拉帕米与环孢菌素对安石榴苷吸收转运的影响.结果:安石榴苷在Caco-2细胞模型中吸收良好且安石榴苷的吸收不具有浓度依赖性,150～ 350 μmol·L-1安石榴苷的外排率(ER)值均大于1.5,4°C条件下安石榴苷的双向转运均减少.同时,P-糖蛋白抑制剂存在的条件下,安石榴苷的表观渗透系数Papp(AP-BL)值增大、Papp(BL-AP)值减小.结论:安石榴苷在Caco-2细胞的吸收以主动转运方式为主,P-糖蛋白参与了安石榴苷的转运.

摘要： 目的 通过建立体外Caco-2细胞模型研究黄芩苷(BA)及其固体脂质纳米粒(SLN)的吸收特性.方法 利用CCK-8法、LDH法筛选BA及BA SLN在Caco-2细胞单层模型的合适浓度.采用高效液相色谱法测定BA含量,分别研究时间、浓度、温度、内吞抑制剂及外排抑制剂对其摄取、转运量的影响;利用Western blot法检测外排蛋白的表达量.结果 在50 ～ 150μg·mL-1,BA及BA SLN摄取呈浓度依赖性;在4～37°C,BA及BA SLN的细胞摄取量随温度升高而增加;内吞抑制剂影响BA SLN的细胞摄取量;多药耐药相关蛋白2(MRP2)抑制剂和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂显著降低BA外排率,对BASLN外排率无影响;BA SLN降低细胞MRP2、BCRP表达量.结论 BA在Caco-2细胞模型的吸收为被动扩散,并伴随能量依赖,与MRP2、BCRP外排有关.BA SLN显著增加药物在细胞模型的吸收,可能与其增加内吞、抑制细胞外排蛋白表达减少药物外排有关.

摘要： 目的 研究芹菜素在Caco-2细胞模型中的转运特性.方法 采用MTT法确定芹菜素在Caco-2细胞模型中的安全浓度范围,使用高效液相色谱法(HPLC)测定芹菜素的含量,考察不同浓度 、给药时间 、pH、P-gp抑制剂和螯合剂EGTA条件对细胞模型中芹菜素的表观渗透系数(Papp)和累积转运吸收量(Qr)的影响.结果 芹菜素Qr值与时间呈正相关,中浓度芹菜素的Papp均高于高 、低浓度芹菜素的Papp,外排比(RB-A/A-B)均pH6.5时的Papp.结论 酸性条件不利于芹菜素的吸收,其转运过程主要是主动转运与被动扩散共同参与,双向转运无明显方向性,并且不是P-gp的底物.

摘要： 目的：采用Caco-2细胞单层双向转运模型,研究元胡白芷药对的转运吸收情况. 方法：LC-MS/MS测定Caco-2样品中元胡白芷药对10个成分,采用Agilent Poroshell120EC-C18柱(3×100mm,2.7μm),流动相为4mM甲酸铵水溶液/乙腈,动态多反应监测模式进行定量.以Caco-2细胞模型考察元胡白芷主要成分在单体、单味药材、药对配伍三种状态下的双向转运. 结果：Caco-2细胞中相关基质均不干扰待测样品峰,各个待测物在相应的浓度范围内线性关系良好(R2>0.99);日内日间精密度RSD为0.69％～14.41％,准确度RE为-11.50～14.98％,基质效应大于80.97％.单体中THP的外排率小于2,IPT、IIPT的外排率小于1.单味药材中ACP、THP、PTP、THB、CYD、BGP的Papp均大于10×10-6cm/s,属于吸收良好,BBR、JAR、IPT、IIPT属于中等吸收.单味药材中BBR、JAR的外排率分别为8.43和9.70,其它生物碱与香豆素成分的外排率都在2-3之间;配伍后BBR、JAR的外排明显下降,吸收增加. 结论：元胡白芷药对成分在单体、单味、配伍三种状态下的转运特征各不相同,多数成分可能涉及到主动转运.

摘要： 目的：采用Caco-2细胞单层双向转运模型,研究元胡白芷药对的转运吸收情况. 方法：LC-MS/MS测定Caco-2样品中元胡白芷药对10个成分,采用Agilent Poroshell120EC-C18柱(3×100mm,2.7μm),流动相为4mM甲酸铵水溶液/乙腈,动态多反应监测模式进行定量.以Caco-2细胞模型考察元胡白芷主要成分在单体、单味药材、药对配伍三种状态下的双向转运. 结果：Caco-2细胞中相关基质均不干扰待测样品峰,各个待测物在相应的浓度范围内线性关系良好(R2>0.99);日内日间精密度RSD为0.69％～14.41％,准确度RE为-11.50～14.98％,基质效应大于80.97％.单体中THP的外排率小于2,IPT、IIPT的外排率小于1.单味药材中ACP、THP、PTP、THB、CYD、BGP的Papp均大于10×10-6cm/s,属于吸收良好,BBR、JAR、IPT、IIPT属于中等吸收.单味药材中BBR、JAR的外排率分别为8.43和9.70,其它生物碱与香豆素成分的外排率都在2-3之间;配伍后BBR、JAR的外排明显下降,吸收增加. 结论：元胡白芷药对成分在单体、单味、配伍三种状态下的转运特征各不相同,多数成分可能涉及到主动转运.

摘要： 目的：采用Caco-2细胞单层双向转运模型,研究元胡白芷药对的转运吸收情况. 方法：LC-MS/MS测定Caco-2样品中元胡白芷药对10个成分,采用Agilent Poroshell120EC-C18柱(3×100mm,2.7μm),流动相为4mM甲酸铵水溶液/乙腈,动态多反应监测模式进行定量.以Caco-2细胞模型考察元胡白芷主要成分在单体、单味药材、药对配伍三种状态下的双向转运. 结果：Caco-2细胞中相关基质均不干扰待测样品峰,各个待测物在相应的浓度范围内线性关系良好(R2>0.99);日内日间精密度RSD为0.69％～14.41％,准确度RE为-11.50～14.98％,基质效应大于80.97％.单体中THP的外排率小于2,IPT、IIPT的外排率小于1.单味药材中ACP、THP、PTP、THB、CYD、BGP的Papp均大于10×10-6cm/s,属于吸收良好,BBR、JAR、IPT、IIPT属于中等吸收.单味药材中BBR、JAR的外排率分别为8.43和9.70,其它生物碱与香豆素成分的外排率都在2-3之间;配伍后BBR、JAR的外排明显下降,吸收增加. 结论：元胡白芷药对成分在单体、单味、配伍三种状态下的转运特征各不相同,多数成分可能涉及到主动转运.

摘要： 目的：采用Caco-2细胞单层双向转运模型,研究元胡白芷药对的转运吸收情况. 方法：LC-MS/MS测定Caco-2样品中元胡白芷药对10个成分,采用Agilent Poroshell120EC-C18柱(3×100mm,2.7μm),流动相为4mM甲酸铵水溶液/乙腈,动态多反应监测模式进行定量.以Caco-2细胞模型考察元胡白芷主要成分在单体、单味药材、药对配伍三种状态下的双向转运. 结果：Caco-2细胞中相关基质均不干扰待测样品峰,各个待测物在相应的浓度范围内线性关系良好(R2>0.99);日内日间精密度RSD为0.69％～14.41％,准确度RE为-11.50～14.98％,基质效应大于80.97％.单体中THP的外排率小于2,IPT、IIPT的外排率小于1.单味药材中ACP、THP、PTP、THB、CYD、BGP的Papp均大于10×10-6cm/s,属于吸收良好,BBR、JAR、IPT、IIPT属于中等吸收.单味药材中BBR、JAR的外排率分别为8.43和9.70,其它生物碱与香豆素成分的外排率都在2-3之间;配伍后BBR、JAR的外排明显下降,吸收增加. 结论：元胡白芷药对成分在单体、单味、配伍三种状态下的转运特征各不相同,多数成分可能涉及到主动转运.

摘要： 目的：研究新穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制.rn 方法：通过研究新穿心莲内酯在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度(50mol·L-1、75mol·L-1和100mol·L-1)、温度(4oC、25oC和37oC)和抑制剂(碘乙酰胺、维拉帕米和MK-571)对新穿心莲内酯吸收的影响.用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数.rn 结果：新穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈线性增加,PBA/PAB≈1.0;温度37oC时,Papp为(2.02±0.31)×10-6cm·s-1,与4oC[(5.97±0.11)×10-7cm·s-1]、25oC[(9.17±0.50)×10-7cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05);受抑制剂碘乙酰胺影响,Papp=(4.79±0.42)×10-6cm·s-1与对照组新穿心莲内酯Papp[(1.28±0.69)×10-6cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05).rn 结论：新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收方式主要是被动转运和载体介导的主动转运.

摘要： 目的：研究新穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制.rn 方法：通过研究新穿心莲内酯在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度(50mol·L-1、75mol·L-1和100mol·L-1)、温度(4oC、25oC和37oC)和抑制剂(碘乙酰胺、维拉帕米和MK-571)对新穿心莲内酯吸收的影响.用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数.rn 结果：新穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈线性增加,PBA/PAB≈1.0;温度37oC时,Papp为(2.02±0.31)×10-6cm·s-1,与4oC[(5.97±0.11)×10-7cm·s-1]、25oC[(9.17±0.50)×10-7cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05);受抑制剂碘乙酰胺影响,Papp=(4.79±0.42)×10-6cm·s-1与对照组新穿心莲内酯Papp[(1.28±0.69)×10-6cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05).rn 结论：新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收方式主要是被动转运和载体介导的主动转运.

摘要： 目的：研究新穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制.rn 方法：通过研究新穿心莲内酯在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度(50mol·L-1、75mol·L-1和100mol·L-1)、温度(4oC、25oC和37oC)和抑制剂(碘乙酰胺、维拉帕米和MK-571)对新穿心莲内酯吸收的影响.用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数.rn 结果：新穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈线性增加,PBA/PAB≈1.0;温度37oC时,Papp为(2.02±0.31)×10-6cm·s-1,与4oC[(5.97±0.11)×10-7cm·s-1]、25oC[(9.17±0.50)×10-7cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05);受抑制剂碘乙酰胺影响,Papp=(4.79±0.42)×10-6cm·s-1与对照组新穿心莲内酯Papp[(1.28±0.69)×10-6cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05).rn 结论：新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收方式主要是被动转运和载体介导的主动转运.

摘要： 目的：研究新穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制.rn 方法：通过研究新穿心莲内酯在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度(50mol·L-1、75mol·L-1和100mol·L-1)、温度(4oC、25oC和37oC)和抑制剂(碘乙酰胺、维拉帕米和MK-571)对新穿心莲内酯吸收的影响.用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数.rn 结果：新穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈线性增加,PBA/PAB≈1.0;温度37oC时,Papp为(2.02±0.31)×10-6cm·s-1,与4oC[(5.97±0.11)×10-7cm·s-1]、25oC[(9.17±0.50)×10-7cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05);受抑制剂碘乙酰胺影响,Papp=(4.79±0.42)×10-6cm·s-1与对照组新穿心莲内酯Papp[(1.28±0.69)×10-6cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05).rn 结论：新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收方式主要是被动转运和载体介导的主动转运.

摘要： 目的：研究新穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制.rn 方法：通过研究新穿心莲内酯在模型中的双向转运,考察时间、药物浓度(50mol·L-1、75mol·L-1和100mol·L-1)、温度(4oC、25oC和37oC)和抑制剂(碘乙酰胺、维拉帕米和MK-571)对新穿心莲内酯吸收的影响.用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数.rn 结果：新穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈线性增加,PBA/PAB≈1.0;温度37oC时,Papp为(2.02±0.31)×10-6cm·s-1,与4oC[(5.97±0.11)×10-7cm·s-1]、25oC[(9.17±0.50)×10-7cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05);受抑制剂碘乙酰胺影响,Papp=(4.79±0.42)×10-6cm·s-1与对照组新穿心莲内酯Papp[(1.28±0.69)×10-6cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05).rn 结论：新穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收方式主要是被动转运和载体介导的主动转运.

摘要： 目的:前期研究发现,小柴胡汤经Caco-2细胞单层转运和摄取后,通过HPLC测定出现了小柴胡汤图谱、对照品图谱和空白生物样品图谱中没有出现的峰,本研究进一步探讨小柴胡汤经Caco-2细胞单层转运和摄取后代谢产物生成情况.rn 方法:制备Caco-2细胞单层模型用于研究小柴胡汤的转运和摄取,采用LC/MS法测定小柴胡汤经Caco-2细胞单层转运和摄取后的代谢产物.rn 结果:小柴胡汤细胞转运液AP→BL侧发现了可能为黄芩素和汉黄芩素的磺酸结合物的分子离子峰,细胞摄取AP→BL侧发现了可能为黄芩苷和汉黄芩苷的葡萄糖醛酸结合物的分子离子峰.rn 结论:小柴胡汤经Caco-2细胞单层转运和摄取后生成的代谢产物可能与Caco-2细胞顶钡1存在的相关代谢酶有关。

摘要： 本发明提供了一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，包括以下步骤：a)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；b)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；c)以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；d)根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。超高效液相色谱仪对复杂样品的分离效果较好，而质谱仪则具有较高的灵敏度和精确性，检测结果更为准确。

摘要： 本发明公开了白及中六种成分在Caco‑2细胞模型中吸收转运量的测定方法，包括以下步骤：制备白及提取物溶液、作为对照品的标准溶液和内标溶液；建立人源结肠腺癌细胞系Caco‑2细胞模型；通过Caco‑2细胞模型制备出细胞悬液；通过UPLC‑MS/MS测定6种成分的含量；按考马斯亮蓝染液蛋白测定试剂盒方法测定总蛋白含量，并计算细胞摄取量X=待测物总蛋白。本发明采用UPLC‑MS/MS建立白及提取物中6个成分的分析方法，测定白及提取物在时间、浓度、温度、pH和P‑gh抑制剂条件下对Caco‑2细胞的吸收摄取影响，初步评价白及提取物的体内吸收特性。为白及提取物的口服制剂研发提供科学依据。

摘要： 本发明提供了一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，包括以下步骤：a)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；b)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；c)以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；d)根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。超高效液相色谱仪对复杂样品的分离效果较好，而质谱仪则具有较高的灵敏度和精确性，检测结果更为准确。

摘要： 本发明公开了一种Caco‑2细胞倒置模型及其制备方法，属于细胞模型技术领域。该制备方法包括：在Transwell小室的底端外侧设置连接件，得到培养器皿；将培养器皿放置于细胞培养板内，并使培养器皿的培养腔开口朝上；将Caco‑2细胞接种于培养腔内，进行细胞培养，待Caco‑2细胞铺满Transwell小室的底壁后；将Transwell小室重新按照常规方式放置于细胞培养板的培养孔内，得到Caco‑2细胞倒置模型。该Caco‑2细胞倒置模型能够扩展传统Caco‑2细胞模型的研究范畴，对小密度物质进行吸收研究，实验效果良好、且模型构建过程简单，方便易行，利于在不同实验室中进行推广，应用前景广阔。

摘要： 本发明脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法及应用，包括：1）Caco‑2细胞和RAW264.7细胞的培养；2）将Caco‑2细胞接种于Transwell板上室的AP侧，孵化；3）RAW 264.7细胞接种于24孔板，孵化；4）将Transwell上室转移到24孔板；5）将脂多糖溶于PBS中，配制母液，过滤后稀释备用；6）在BL侧加入LPS‑10%DMEM培养基孵化，形成肠道炎症模型。本发明建立了肠上皮细胞系Caco‑2和巨噬细胞系RAW‑264.7细胞的体外模型，以建立肠道炎症反应，用以研究巨噬细胞介导的Caco‑2细胞对C3G纳米脂质体的吸收机制。

摘要： 本发明提供了一种基于体外消化/Caco2细胞模型测定冬虫夏草中砷的生物可给性方法，属于重金属生物可给性检测技术领域。本发明采用transwell培养建立Caco‑2肠吸收模型，并通过体外模拟胃、肠消化的二步消化法建立体外消化/Caco‑2细胞模型，并采用ICP‑MS法测定冬虫夏草中砷的生物可给性，为科学、客观地评价中药中重金属的健康风险以及限量标准的制修定提供依据。实验证明，冬虫夏草中Caco‑2细胞转运后砷的生物可给性为1.5％～13.0％。本发明所述方法促进中药产业发展，节约资源，同时为客观、科学地评价中药中重金属对人体的健康风险提供新的思路，为制定科学、合理的重金属限量标准提供依据。

摘要： 本发明公开了一种基于Caco‑2细胞模型的活性肽定向制备方法，属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域。本发明以大米蛋白为原料，经蛋白酶处理后，通过体外模拟胃肠消化和Caco‑2细胞吸收模型模拟小肠吸收过程，定向高效筛选抗消化和易吸收的抗氧化肽组分，然后经凝胶色谱层析和高效液相色谱层析分离纯化，获得氨基酸序列明确、易被人体吸收利用的高活性抗氧化肽。该发明构建了基于体外模拟胃肠消化和Caco‑2细胞吸收模型模拟小肠吸收的活性肽高效筛选体系，从根源上提高米蛋白抗氧化肽的生物利用率，在一定程度上解决了活性肽在体内生物利用率低的问题，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明采用超高压液相色谱串联高分辨质谱仪(UHPLC‑Q‑TOF MS/MS)，比较空白细胞液、细胞吸收样品和羊耳菊活性部位样品图谱，判断主要能进入细胞被吸收的成分，然后再利用Caco‑2细胞建立摄取转运模型，考察药物浓度、pH值、温度、P‑gp抑制剂等对羊耳菊活性部位中九种有效成分在细胞模型中摄取和转运的影响，进而确定羊耳菊活性部位中九种有效成分在Caco‑2细胞模型中的摄取和转运机制。

摘要： 本发明公开了CRISPR/CAS9介导药物转运体靶向性敲除的caco‑2细胞模型及其方法，该方法用于非诊断或治疗目的，包括如下步骤：对P‑gp、BCRP及MRP2转运体设计靶点特异性的sgRNA，设计的sgRNA序列如序列表中SEQ ID NO：1‑6所示，构建sgRNA表达载体；利用CRISPR/CAS9分别设计P‑gp、BCRP及MRP基因单敲除及两两组合双敲除，与hCas9质粒共转染caco‑2细胞，进行单克隆化扩大培养，即得转运体基因靶向性的caco‑2细胞模型。本发明获得的caco‑2细胞模型将有效排除不同转运体之间相互干扰，为药物转运研究提供更特异、更灵敏的细胞模型。

摘要： 本发明公开了白及中六种成分在Caco‑2细胞模型中吸收转运量的测定方法，包括以下步骤：制备白及提取物溶液、作为对照品的标准溶液和内标溶液；建立人源结肠腺癌细胞系Caco‑2细胞模型；通过Caco‑2细胞模型制备出细胞悬液；通过UPLC‑MS/MS测定6种成分的含量；按考马斯亮蓝染液蛋白测定试剂盒方法测定总蛋白含量，并计算细胞摄取量X=待测物总蛋白。本发明采用UPLC‑MS/MS建立白及提取物中6个成分的分析方法，测定白及提取物在时间、浓度、温度、pH和P‑gh抑制剂条件下对Caco‑2细胞的吸收摄取影响，初步评价白及提取物的体内吸收特性。为白及提取物的口服制剂研发提供科学依据。