ConA

摘要： 目的 探讨甘草苷(Liquiritin,Liq)对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导的实验性肝损伤的保护作用及作用机制。方法 将ICR小鼠雌雄各半随机分为四组:对照组、ConA模型组、药物治疗中剂量组(ConA+Liq40 mg/kg)、药物治疗高剂量组(ConA+Liq80 mg/kg)。对照组给予等量的生理盐水,其余组均通过小鼠尾静脉注射ConA(10 mg/kg)1次/7 d,共6次建立肝损伤模型,第28天开始药物治疗中剂量组按40 mg/kg、药物治疗高剂量组按80 mg/kg体重灌胃,1次/d,连续治疗14 d,第42天后处死小鼠,收集样本待检;采用全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;HE染色观察肝脏病理学改变;Masson染色分析肝脏组织中胶原纤维的表达;实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-TimePCR,qRT-PCR)检测实验动物肝组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,col1a1)、α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和激活素A(ActivinA)、激活素受体2A(Activin A Receptor TypeⅡ,ACVR2A)及Smad2的mRNA表达情况。结果 与对照组相比,ConA模型组ALT与AST水平明显升高,与ConA模型组相比,药物治疗中剂量组以及药物高剂量组组小鼠的ALT和AST均有所下降(P<0.05);ConA模型组的组织切片染色可见肝脏小叶结构破坏,有大片组织坏死,细胞肿胀,伴有脂肪变性,药物治疗组中剂量组与药物高剂量组损伤明显减轻;与对照组相比,ConA模型组的胶原含量增加,与ConA模型组比较,药物治疗组中剂量组与药物高剂量组的胶原含量减少(P<0.05);与对照组相比,ConA模型组中col1a1以及α-SMA、Smad2、ActivinA、ACVR2A的mRNA表达上升,与ConA模型组相比,药物治疗中剂量组以及药物治疗高剂量组可明显下调实验动物肝组织col1a1以及α-SMA的mRNA表达,还可下调Smad2、ActivinA、ACVR2A的mRNA表达(P<0.05)。结论 Liq能有效缓解ConA诱导的肝损伤,具有肝脏保护作用,其机制可能通过调控ActivinA/Smad通路抑制肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化有关。

摘要： 目的 探讨IL-16在Con A诱导的小鼠自身免疫性肝损伤发生发展中的作用及其机制。方法 将C57BL/6小鼠(WT)及IL-16敲除(IL-16^(-/-))小鼠分别随机分为WT-control组、IL-16^(-/-)-control组、WT-Con A组和IL-16^(-/-)-Con A组。Con A组给予尾静脉注射刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A),建立自身免疫性肝损伤模型,control组尾静脉注射相同体积的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。ELISA、实时定量PCR及免疫组化检测各组血清及肝组织IL-16的表达;IL-16^(-/-)小鼠造模后,观察肝损伤小鼠的生存率,检测血清中转氨酶及炎性因子的水平,HE染色及TUNEL分析肝组织病理,流式细胞术检测肝、脾组织中髓源性抑制细胞(MDSCs)的比例。取WT小鼠(WT组)及IL-16^(-/-)小鼠(IL-16^(-/-)组)股骨及胫骨,体外诱导MDSCs,流式细胞术分析MDSCs比例,实时定量PCR检测MDSCs免疫抑制相关因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)的mRNA水平。结果 与WT-control组相比,WT-Con A组小鼠血清及肝组织中IL-16表达明显增加(均P<0.001)。与WT-Con A组相比,IL-16^(-/-)-Con A组小鼠生存率明显提高(P<0.05);血清中ALT、AST及IL-6、IL-12、TNF-α炎性因子的水平明显降低(均P<0.05);肝组织损伤减轻,肝细胞凋亡减少;肝、脾组织中MDSCs的募集增加(均P<0.05)。体外实验发现,与WT组相比,IL-16^(-/-)组来源诱导的MDSCs比例及iNOS的表达明显增加(均P<0.05)。结论 IL-16可通过下调MDSCs的募集加重Con A诱导的肝损伤。

摘要： 目的 探讨miR-9-3p对刀豆蛋白A(ConA)诱导所致小鼠慢性实验性肝损伤的影响.方法 ConA构建小鼠慢性实验性肝损伤模型,高通量测序筛查模型动物肝组织miRNA的差异表达.BALB/c小鼠40只,随机分成对照组、ConA损伤组、过表达组(ConA+慢病毒包装miR-9-3p组)、过表达对照组(ConA+慢病毒空载体组)每组10只;各模型组小鼠经尾静脉按8 mg/kg体重注射ConA每周1次(对照组注射等体积生理盐水),连续8周;过表达组于第7周经尾静脉注射,将慢病毒包装的miR-9-3p过表达质粒(2×107 TU/mL)注射到小鼠体内,每周1次,连续2周;过表达对照组注射等量慢病毒空载体;于ConA末次给药7 d后处死小鼠收集样本,电子天平检测肝脏指数变化,血清酶学检测AST,ALT水平,HE染色检测模型小鼠肝脏组织病理改变;蛋白印迹(Western Blot)检测模型小鼠肝脏组织中COL1A1及α-SMA蛋白的表达变化.结果 高通量测序显示慢性肝损伤模型中miR-9-3p表达明显下调.在肝损伤鼠体内过表达miR-9-3p后,血清AST和ALT水平明显下降;HE染色检测观察到过表达的miR-9-3p明显减轻肝ConA诱导的肝脏组织病理损伤,与ConA损伤组比较,细胞肿胀坏死减弱,小叶结构恢复;Western Blot检测过表达miR-9-3p后COL1A1及α-SMA蛋白的表达明显减低.结论 miR-9-3p可减弱ConA诱导所致小鼠慢性实验性肝损伤.

摘要： 目的 探究解毒祛瘀滋阴方(Jiedu Quyu Ziyin Recipe,JQZR)对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)小鼠肝损伤的保护作用.方法 40只SPF级C57BL/6小鼠随机分为5组(n=8):对照组、 模型组、 模型+JQZR(5、10、20 g/kg)组.对照组常规饲养,模型组尾静脉注射15 mg/kg Con A,模型+JQZR各组分别给小鼠灌胃JQZR 3 d后尾静脉注射15 mg/kg Con A,各组小鼠均在注射Con A 12 h后处死,收集血清.全自动生化分析仪分析小鼠血清中肝功能指标和血脂代谢生化指标;HE染色观察小鼠肝组织损伤情况;TUNEL染色观察肝组织凋亡;ELISA检测外周血中炎性因子水平;WB检测肝组织中凋亡相关蛋白、iNOS和IL-10蛋白表达;免疫组化检测肝组织中NF-κB的含量.结果 与对照组比较,模型组小鼠肝功能受损,血脂代谢异常;肝组织炎性细胞浸润,肝窦结构紊乱,细胞凋亡率增加(P<0.05),炎性因子水平升高(P<0.05),NF-κB表达上调(P<0.05).与模型组比较,JQZR10、20 g/kg明显明显改善肝功能和血脂代谢紊乱(P<0.05),并有效减轻肝组织损伤,减少细胞凋亡(P<0.05),减轻肝组织炎症并下调NF-κB的表达(P<0.05).结论 JQZR通过抗炎和抗凋亡明显改善Con A诱导的小鼠急性肝损伤.

摘要： 目的 研究左旋紫草素对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤保护作用.方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞,建立体外炎症模型,检测细胞培养液上清中NO水平.采用ConA尾静脉注射法建立小鼠免疫性肝损伤模型,将小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(甘草酸二铵),左旋紫草素低、中、高剂量组,每组10只,检测脾脏指数,血清AST、ALT、AKP、GST水平,肝脏组织匀浆T-SOD活性及MDA、白蛋白水平,ELISA法检测小鼠血清IFN-γ、TNF-α、IL-1β水平,观察小鼠肝脏组织病理切片.结果 左旋紫草素可改善小鼠肝脏、脾脏指数,降低小鼠血清AST、ALT、AKP、GST水平(P＜0.05),降低肝脏组织匀浆MDA水平,增加T-SOD活性,升高白蛋白水平,减少炎症因子IFN-γ、TNF-α释放,改善小鼠肝脏组织病理性损伤.结论 左旋紫草素体外具有抗炎活性,同时对小鼠肝损伤有一定保护作用,其机制可能与减少TNF-α释放有关.

摘要： Background:Autoimmune hepatitis(AIH)is a chronic inflammatory liver disease,and with few major advances in therapy methods over the last years.It''s hard to verify the pathogenesis of AIH and effective novel treatments for AIH because of lacking proper animal models,nor to accurately reproduce the human condition.To find clues to overcoming the therapeutic insufficiency,preclinical animal models are needed.Concanavalin A-mediated AIH model has been widely used in the experiences.Generally,serum ALT levels were tested to assess the animal models.The purpose of this study is to reveal the correlation between ALT serum levels in ConA-induced AIH mouse models and ConA dose and duration.Methods:Animal studies in eight databases(PubMed,Cochrane''s library,Excerpta Medica Database(Embase),Web of Science,China National Knowledge Internet(CNKI),Wan fang database,Weipu Data-base(VIP)and China Biomedical Literature Database(CBM))were searched up to May 2020.This study performed a meta-analysis by comparing the ALT serum level in the AIH animal models.We did register our research in PROSPERO.(https://www.crd.york.ac.uk/PROSPERO/)The ID is CRD42020182967.Result:11 studies with 265 mice were included in our meta-analysis.The serum level of ALT of the AIH model animals(mean difference(MD)4.83,P<0.001)was higher than that of the control group.Conclusion:This study found that ALT levels could be elevated after caudal vein injection of ConA.Different time points also affect ALT serum levels.More experiences studies are need to further illustrate the effect of Con-A administration in experimental models.

摘要： 目的 对巴戟天粗多糖MOP-60和MOP-60-100进行分离和纯化获得多糖组分和成分,测定其理化性质,研究其对人LO2细胞的增殖和抗损伤作用.方法 MOP-60和MOP-60-100分别采用DEAE-纤维素柱色谱分离得到MOP-60-A、MOP-60-B、MOP-60-100-A、MOP-60-100-B和MOP-60-100-C共5个多糖组分;MOP-60-A又经透析获得均一多糖MOP-60-I;MOP-60-100-B又经Sephadex G-100柱色谱分离和纯化,得到MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ2个均一多糖.采用凝胶渗透色谱法测定多糖组分的相对分子质量分布和成分的峰高相对分子质量;采用酸水解、PMP衍生及毛细管电泳法测定单糖组成;采用MTT法,评价这些多糖组分和成分对人LO2肝细胞的细胞增殖及抗ConA(concanavalin A)和H2O2诱导LO2细胞损伤的作用.结果 MOP-60-A、MOP-60-100-A和MOP-60-Ⅰ均由果糖(果聚糖)组成;MOP-60-Ⅰ峰高相对分子质量为2339;MOP-60-B、MOP-60-100-B、MOP-60-100-C 3种组分和MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ2种成分均是由多种单糖组成的杂多糖;MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ峰高相对分子质量分别为62828和7783.体外活性评价结果显示,与溶剂组相比,MOP-60-B、MOP-60-100-B和MOP-60-100-C在250 mg/L浓度下显示明显的促肝细胞增殖活性(P<0.05);与ConA组相比,显示对肝细胞有明显的保护作用(P<0.01);仅MOP-60-100-C在100和250 mg/L浓度对H2O2引起的损伤显示较强的保护作用(P<0.05和P<0.01);多糖成分MOP-60-Ⅰ有一定促肝细胞增殖活性(P<0.05),而MOP-60-100-Ⅰ和MOP-60-100-Ⅱ作用不明显.结论 巴戟天中酸性较强的多糖组分MOP-60-100-B和MOP-60-100-C对肝细胞有明显的促增殖和抗损伤作用.

摘要： 目的 本文通过分析医科达Synergy医用电子直线加速器主接触器CON A的联锁电路,说明主接触器CON A的吸合条件,介绍导致MAIN CON A联锁故障的可能原因及诊断方法,为维修工程师提供借鉴经验.方法 当控制软件报MAIN CON A联锁故障时,先在维修模式检查主接触器CON A的状态,再通过分析主接触器CON A的联锁电路图,并利用电压表测量相应的测量点,找出故障位置,分析故障原因.结果 如果两个测量点之间是断开状态,故障位置即在断开的两个测量点之间.结论 根据故障现象,可通过理论分析和实际测量快速查找出MAIN CON A联锁故障的位置及原因,解决问题.

摘要： 研究栀子油对刀豆蛋白A (ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制.将小鼠随机分成空白组、模型组、联苯双酯组,栀子油低、中、高剂量组,各给药组每天给药1次,连续给药10 d,末次给药lh后,除空白组外,其他各组尾静脉注射ConA(15 mg/kg),制备小鼠急性免疫性肝损伤模型.测定小鼠血清中ALT、AST和LDH的含量及肝脏组织匀浆中SOD活性和NO、MDA的含量,RT-PCR检测肝组织中TNF-α、CXCL-10 mRNA和IFN-γ mRNA的表达量,HE染色观察肝组织的病理学变化.结果表明:与模型组相比,栀子油各剂量组均能降低血清ALT、AST和LDH的含量,提高SOD活性,降低肝组织NO、MDA的产生,下调TNF-α、CXCL-10mRNA和IFN-γmRNA的相对表达量,肝组织变性及坏死等病理症状明显改善,尤以栀子油高剂量组效果最佳.栀子油对ConA诱导小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用,其保肝的机制可能与提高抗氧化酶体系活力,抑制氧化应激反应及炎性因子表达有关.

摘要： 本发明涉及一种与血清中刀豆素A特异结合的组织蛋白酶D酶原ConA-pCD，其由下述方法制得：①制备刀豆素A亲和层析柱，备用；②取血清，离心后取上清并加入糖蛋白结合缓冲液至终体积为0.5～5ml，然后转入上述制备好的刀豆素A亲和层析柱内，旋转摇床于室温孵育至少2h；然后离心弃流出液，加入含甲基-α-D吡喃甘露糖苷的糖蛋白结合缓冲液，旋转摇床孵育，离心并收集洗脱液；③在洗脱液中加入丙酮至终浓度为80%，-20°C过夜，离心弃上清，室温干燥后用蛋白裂解液溶解即可检测ConA-pCD。结果证实：血清ConA-pCD是一种潜在的、具有临床应用前景的新型肝癌诊断的血清标志物。