高通量测序

摘要： 背景:失神经骨骼肌萎缩尚缺乏较有效的治疗方法,预后差,microRNA在体内的表达谱不清楚。目的:采用高通量测序技术分析失神经支配骨骼肌萎缩大鼠microRNA表达谱及转化生长因子β1/Smad3信号通路的变化,探讨microRNA在骨骼肌萎缩中的作用及其机制。方法:12只SD大鼠随机分为2组,实验组采用坐骨神经截断的方法建立失神经肌萎缩模型,对照组仅暴露坐骨神经后缝合伤口。完整取下大鼠双侧腓肠肌计算肌湿质量比,苏木精-伊红染色观察肌萎缩和纤维化情况并测定肌纤维横截面积;应用Illumina HiSeq 2500测序技术筛查骨骼肌组织中的microRNA表达谱;结合火山图、层次聚类图、基因本体论、京都基因与基因组百科全书通路分析差异表达基因参与骨骼肌代谢的生物过程;采用实时荧光定量PCR验证候选基因在肌肉组织中的差异表达;Western blot检测转化生长因子β1、p-Smad3蛋白表达。结果与结论:①与对照组相比,实验组腓肠肌湿质量比和横截面积明显降低(P0.0),筛选出显著差异表达的microRNA共14个,其中2个表达上调,12个表达下调;③生物学功能和通路分析结果提示,miR-1247-3p、miR-132-5p、miR-21-3p、miR-363-3p、miR-451-5p等具有显著差异表达的microRNAs显著富集于细胞增殖、分化、凋亡等生物过程及转化生长因子β信号通路;④实时荧光定量PCR结果显示,miR-21-3p在实验组腓肠肌组织中呈显著低表达(P<0.001),与测序结果趋势一致;⑤Western blot结果显示,转化生长因子β1、p-Smad3蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.05);⑥提示microRNA在骨骼肌萎缩生理病理过程中扮演关键角色,miR-21-3p可能通过激活转化生长因子β1/Smad3信号通路的生物活性,进而在骨骼肌细胞代谢中发挥作用。

摘要： 分析甘蔗间作西瓜对甘蔗产量、总经济效益、根际土壤生态及理化性质的影响,旨在探究甘蔗间作西瓜模式的生态效应,为进一步推广及应用甘蔗间作西瓜模式提供理论依据和技术支撑。基于传统和现代高通量测序技术,分析间作和单作甘蔗产量、总经济效益、根际土壤理化性质及根际土壤细菌群落结构变化。与甘蔗单作(CK)相比,甘蔗间作西瓜(TM)具有提高甘蔗产量和总经济效益的效果;对甘蔗根际土壤有机质、全氮、全磷、全钾、碱解氮、速效磷和速效钾含量无显著影响;同时,甘蔗间作西瓜对甘蔗根际土壤细菌多样性和丰富度亦无显著影响。另一方面,门分类水平,甘蔗间作西瓜虽然增加了放线菌门(Actinobacteria)和其他(others)门类优势细菌的相对丰度占比,但亦缺失了浮霉菌门(Planctomycetes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)等门类优势细菌的富集;属分类水平,热酸菌属(Acidothermus)、慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)、norank_o_SC-I-84、Bryobacter、链霉菌属(Streptomyces)、norank_f_DA111、Candidatus_Solibacter、酸杆菌属(Acidibacter)和norank_f_Acidobacteriaceae_Subgroup_1_则是甘蔗单作(CK)模式下甘蔗根际土壤中特有的优势细菌属;与之相比,小单孢菌属(Micromonospora)、norank_f_Anaerolineaceae、unclassified_f_Micrococcaceae、norank_o_JG30-KF-CM45、norank_f_Elev-16S-1332、norank_c_Actinobacteria、卢得曼氏菌属(Luedemannella)、unclassified_f_Intrasporangiaceae、norank_f_Nitrosomonadaceae、unclassified_f_Nocardioidaceae、norank_c_S085和Defluviicoccus则是甘蔗间作西瓜(TM)模式下,甘蔗根际土壤中特有的优势细菌属。基因功能预测结果显示,甘蔗间作西瓜并没有显著改变甘蔗植株根际土壤细菌的主体功能。与甘蔗单作相比,甘蔗间作西瓜具有提高甘蔗产量和总经济效益的效果;虽然没有显著改变甘蔗根际土壤理化性质,同时亦没有显著提升甘蔗根际土壤细菌多样性、丰富度以及细菌主体功能,仅改变了部分甘蔗根际土壤细菌的群落组成,富集了诸如小单孢菌属(Micromonospora)等特有的优势细菌属。综上所述,甘蔗间作西瓜有助于提高甘蔗产量和总经济效益,虽不能显著提升甘蔗根际土壤肥力,但亦没有造成甘蔗根际土壤细菌生态功能失衡或劣化,只是改变了部分甘蔗根际土壤细菌群落组成,但间套作西瓜富集的特有优势细菌属,诸如小单孢菌属(Micromonospora)属细菌是具有增强甘蔗植株抗性功能的有益细菌属。

摘要： 研究目的:建立人体在运动前后基因的表达量随时间的变化数据库,利用基因表达数据库进行相关数据挖掘.研究方法:利用高通量芯片测序数据库(GE O)中的公开测序数据开发了一个基于网络检索的数据库Exercise SAGE,可以帮助科研工作者检索人体运动前后在不同时间点基因的表达量.通过对人体在运动前后基因的表达量随时间的变化进行探究,可以更好的探究运动科学背后的分子机制.结论:以人体运动前后高通量芯片测序数据为基础,通过Web数据库技术,建立了人体运动前和运动后不同时间点的数据库,相关科研人员可以对数据库进行数据挖掘或共享数据.Exercise SAGE数据库在线访问地址是www.tsrna.org.

摘要： 背景:研究表明环状RNA(circRNA)是广泛存在于多种组织中的内源性非编码RNA,可充当microRNA(miRNA)的"海绵"调节哺乳动物的基因表达.但circRNA在骨质疏松症中的表达特征和分子机制以及其潜在的circRNA-miRNA-mRNA调控网络尚未有相关报道.目的:基于骨质疏松相关非编码RNA高通量测序数据,构建互作网络及功能富集分析,筛选可能通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制,并对筛选出的参与骨质疏松发生发展的circRNA进行功能和机制验证.方法:利用GEO数据库中的骨质疏松非编码RNA高通量测序数据,构建circRNA-miRNA-mRNA网络.随后,对miRNA预测的共表达靶基因进行GO和KEGG分析.采用人间充质干细胞诱导成骨细胞分化,qRT-PCR和Western blot检测筛选出的circ_0076906和其靶向的miR-29b及骨糖蛋白mRNA和蛋白的表达,碱性磷酸酶活性和茜素红染色检测骨形成情况,荧光素酶报告实验以检测基因之间的相互作用.结果 与结论:①实验从GEO数据库中最终筛选了5个共表达circRNA(如circ_0076906,circ_0004276和circ_0003060等)、10个共表达miRNA(如miR-183-5p,miR-29b和hsa-miR-15b-3p等)以及241个共表达mRNA(如骨糖蛋白基因、SMARCC1和LRP6等),并成功构建了骨质疏松相关circRNA-miRNA-mRNA网络;②GO分析结果揭示了78个生物过程,其主要包括成骨细胞增殖、凋亡和迁移等功能;③KEGG分析FoxO信号通路和PI3K-AKT信号通路传导途径与骨质疏松发生发展密切相关;④对筛选出的差异显著同时有靶向关系的circ_0076906、miR-29b和骨糖蛋白验证结果显示,circ_0076906、miR-29b及骨糖蛋白基因在疏松症患者和对照组骨组织和血清中均呈差异表达,circ_0076906可诱导成骨分化,其沉默可抑制人间充质干细胞的成骨相关基因(骨钙素和RUNX2)表达,circ_0076906可充当miR-29b调节的骨糖蛋白基因表达的海绵;⑤上述数据说明,实验成功构建了骨质疏松circRNA-miRNA-mRNA网络,筛选出的circ_0076906和其靶向的miR-29b及骨糖蛋白基因可能在骨质疏松进展中发挥重要作用;实验进一步证实了人间充质干细胞中circ_0076906通过竞争性抑制miR-29b从而促进骨糖蛋白表达,缓解骨质疏松症并促进成骨分化.该研究方案经新疆医科大学第七附属医院伦理委员会批准,批准号:XY20190501-1.

摘要： 为探究橘园生草对土壤微生物群落结构与功能特征的影响,本研究以南丰蜜橘(Citrus reticulita Blanco cv.Kinokuni)为研究对象,设置行间播种白三叶草(Trifolium repens)、黑麦草(Lolium multiflorum)、自然生草和清耕4个处理,采用荧光定量PCR技术和Illumina HiSeq高通量测序技术,研究不同生草条件下南丰蜜橘园土壤微生物的群落结构与功能特征。结果表明,橘园生草有利于增加土壤有机质和氮、磷、钾的供应,改善土壤肥力。黑麦草处理显著提高了细菌群落ACE指数、真菌群落Chao1指数和Simpson指数,表明人工生草栽培可以提高微生物群落丰富度和多样性。橘园土壤中检测到24个细菌门类,其中变形菌门(30.94%~55.06%)、酸杆菌门(19.07%~33.14%)、绿弯菌门(7.54%~13.54%)和放线菌门(6.81%~13.41%)为优势菌门;检测到9个真菌门类,其中子囊菌门(44.94%~87.00%)、担子菌门(5.12%~12.99%)和被孢霉门(0.65%~13.46%)为优势菌门。主坐标分析结果表明,细菌和真菌群落组间差异大于组内差异。相关性分析表明,土壤有机质含量、速效磷含量、全钾含量、碱解氮含量和pH对细菌群落结构影响较大;有机质含量、速效磷含量、全磷含量、速效钾和全氮含量对真菌群落结构影响较大。综上,人工种植黑麦草和白三叶草不仅改善了土壤氮、磷、钾养分供应,而且显著提高了微生物群落丰富度和多样性,优化了土壤细菌和真菌群落结构,有利于促进南丰蜜橘产业的可持续发展。

摘要： 脓毒症是严重烧伤、孕产妇、重症监护室病房和新生儿监护病房中常见且最主要的致死性疾病之一,尤其在新生儿、免疫功能低下、受到严重创伤及合并严重并发症的患者中发病率和病死率颇高[1-3]。目前,脓毒症的发病率仍处于逐年上升趋势,全球每年脓毒症患病人数超过1900万,病死率高达43.6%[4-5]。

摘要： 【目的】从微生物角度揭示辣椒/玉米套作模式的优越性,为此模式的大力推广及高效栽培提供基础理论依据。【方法】利用Illumina高通量测序技术,分析辣椒/玉米套作、辣椒净作2个试验处理情况下,辣椒根际土壤细菌多样性及群落组成结构。【结果】辣椒/玉米套作后,辣椒根际土壤细菌的Chao1、Ace、Shannon指数均有所增加,增幅为3.07%~7.53%;2个处理在门、纲、目、科、属水平上排名前10的优势细菌种类相同,最大优势菌门均为变形菌门,占土壤细菌总量的88%以上,但各细菌数量发生变化,细菌群落组成结构发生变化;套作后辣椒根际土壤细菌富集并达到组间显著性差异的微生物种类有56种,主要有亚硝化单胞菌科(从目到科)、硝化螺旋菌属(从门到属)、Ignavibacteriaceae(从门到科)、丰佑菌属(从纲到属);辣椒净作仅10种,主要为脱铁杆菌科(从门到科)。【结论】辣椒玉米套作后,辣椒根际土壤细菌丰富度和多样性增加,富集并达到组间显著性差异的微生物种类明显增多,其中与氮素循环有关的亚硝化单胞菌科(从目到科)和硝化螺旋菌属(从门到属)显著增加,土壤微生物优势明显。

摘要： 牦牛是青藏高原上的特有物种,是当地农牧民的主要肉、奶、毛等生活物资来源,具有高海拔适应性,耐寒、耐粗饲。高通量测序技术在生命领域的广泛应用,为牦牛等相关物种的生命研究带来了便利。该文从基因组、转录组、微生物测序等层面,就高通量测序技术在牦牛相关研究领域中的应用情况做以综述,旨在为后续牦牛相关研究工作提供参考。

摘要： 目的探讨高通量测序在检测复发性流产染色体异常中对其临床治疗的应用价值。方法收集207例复发性流产组织,通过高通量测序技术对其进行分析。同时对召回的夫妇双方进行外周血染色体核型分析。结果207例流产组织中检出染色体异常114例,所占比例为55.1%。染色体异常类型包括58例染色体三体,18例X0单体,23例片段缺失或重复的染色体,8例三倍体及7例46,XY/46,XX嵌合。召回69对夫妇外周血中染色体异常共计9对,染色体异常率约为13%。结论染色体异常是造成复发性流产的主要原因。遗传因素对复发性流产存在一定的影响。高通量测序可全面、快速地检测包括微缺失或微重复的染色体异常,有效查明复发性流产的遗传因素,为流产夫妇再次妊娠提供遗传咨询和临床指导。

摘要： 通过对比有无种植风车草情况下人工湿地不同深度基质表面生物膜的群落组成差异,探究风车草对人工湿地基质微生物多样性的影响效应。结果表明:有无种植风车草,人工湿地基质中均以变形菌门、绿弯菌门、厚壁菌门为优势菌群;种植风车草不仅提高人工湿地基质表面微生物群落的α多样性,并导致其群落组成与无风车草种植情况相比差异显著,进一步的群落组成差异比较分析显示,门水平放线菌门和衣原体门、属水平红游动菌属在有无种植风车草情况下差异显著。本研究结果揭示了种植风车草对人工湿地基质微生物多样性的影响,可为风车草在人工湿地中的应用提供部分理论支持。

摘要： 微生物对水性涂料产品的稳定性起着重要作用,本实验以广东省某涂料厂的水性涂料为研究对象,利用16S rRNA基因高通量测序技术检测其微生物群落结构及多样性.结果表明5个水性涂料样本在97％的相似水平下共获得有效序列总数224801,涵盖了10门16纲30目46科59属的细菌;物种组成与相对多样性由高到低依次分别为A4、A5、A1、A2和A3;水性涂料样本A1、A2和A3微生物群落结构与聚集规律较为相似,优势菌群均为类芽孢杆菌门、芽胞乳杆菌属和固氮菌;水性涂料样本A5中相对丰度为57.3％的产己酸细菌属于特异菌群.本研究解析了水性涂料中微生物群落结构、相对丰度及多样性,为建立和完善水性涂料中微生物防控体系提供理论支撑.

摘要： 白鹤梁水下题刻是保存于长江水下的重要石质文物,由于长期位于水下,所以其表面的微生物病害不同于地面石质文物.本文利用Illumina MiSeq高通量测序技术对附着于白鹤梁水下题刻表面的淤泥进行了微生物群落多样性及组成的分析,细菌上的相对优势菌门(大于1％)11个,其中变形菌门和硬壁菌门细菌种类最多,分别占比63.66％和67.74％,在属的水平上,占比最大的为未知菌(17％),其次为微小杆菌属细菌(12％).真菌中,相对优势菌门仅有2个,其中未知菌占比达到59％,其次是子囊菌门(40％).在属的水平上,未知菌占比更是达到85％,其次是镰刀菌属(7％)、座囊菌(2％)和海卷孢属(1％).霉变文物常检出的青霉属和曲霉属占比分别仅为0.3％和0.2％,并不是水下题刻表面的主要真菌菌属.由此可见,水下石质文物表面的微生物群落构成相对简单,与地面文物存在较大差异,并且测试样品中存在大量的未知菌,这些未知菌对于石质文物的影响尚不明确.以上结果为水下石质文物保护提供了新的值得关注的研究方向.

摘要： 新生儿时期是肠道微生物群落建立的关键时期,其肠道菌群具有不稳定性、组成相对简单、个体差异性大等特点,易受多种因素影响.感染性疾病除导致感染灶局部的病理改变外,还可影响肠道菌群的构成及多样性.抗生素可以改变肠道菌群的组成,而菌群可通过神经、免疫和内分泌等途径影响疾病的发生和发展.本研究的目的是利用高通量测序技术,探讨抗生素的使用在新生儿肺炎中对新生儿肠道菌群的影响,探讨抗生素使用前后新生儿肠道菌群结构的变化,为进一步探讨抗生素的使用种类及使用疗程对肠道菌群的影响及可能的干预提供实验依据.

摘要： 本文主要介绍了传染病的病菌来源、扩散、实验等内容，并阐述了高通量测序与生物信息学在传染病疫情中的应用。

摘要： 为探明仓储自然醇化片烟真菌的群落多样性,采用MiSeq高通量测序技术对云南沾益、贵州长顺、福建尤溪、河南确山的上、中、下3个部位共12份自然醇化片烟样品中真菌ITS进行分析.结果表明:12份样品共获得1155个操作分类单元(Operational taxonomic unit,OTU),真菌群落丰富度和多样性最高的样品分别是福建尤溪B2F和C3F自然醇化片烟.12份样品的优势菌门均为子囊菌门(Ascomycota).云南沾益C3F、X2F自然醇化片烟优势菌属为茎点霉属(Phoma);河南确山B2F、C23F、X2F自然醇化片烟优势菌属为链格孢属(Alternaria);贵州长顺X23F自然醇化片烟的优势菌属为Monographella;其余6份样品的优势菌属均为曲霉属(Aspergillus).上、中、下部叶4个产地共有的OTU个数分别为121、79、168个,共有OTU的reads数占各样品OTU总reads数的70％以上(除福建尤溪C3F外),同一部位不同产地自然醇化片烟真菌群落结构差异主要体现在优势菌属的占比方面.

摘要： 严重遗传病是指由于遗传因素先天形成，患者全部或者部分丧失自主生活能力，后代再现风险高，医学上认为不宜生育的遗传性疾病。明确规定“应当通过产前诊断阻止严重遗传性疾病患儿出生”。常为致愚、致残、致死性，难以治疗，预后差，给家庭和社会造成重大负担，严重影响人口素质。

摘要： 微生物作为自然界中普遍存在的生命体,通常以“微生物群落”的形式共存.这些物种相互协作适应环境变化的同时,也对环境产生了长期而深刻的影响.随着人类对于微生物了解的深入,微生物群落基础研究及其在健康和环境等领域的应用研究日益重要.昆虫肠道内存在种类繁多、数量庞大的微生物,一方面,这些肠道微生物种群结构的多样性与昆虫种类、龄期、消化道形式、食物的来源、环境等都息息相关.另一方面,这些菌群也对宿主的一些生理活动有着一定的影响.随着高通量测序技术、组学技术的发展,昆虫肠道宏基因组大数据挖掘和应用已经成为研究热点,极大地推动人类微生物资源利用的能力.本文概述了昆虫肠道微生物宏基因组学的发展现状和发展趋势,特别是肠道宏基因组学大数据的挖掘工具和应用,以及现阶段昆虫肠道宏基因组学的研究进展、应用、优势和瓶颈,并对今后昆虫肠道微生物组大数据研究方向进行展望.

摘要： 半枫荷具有重要药用价值,但由于缺乏其基因组信息,限制了其分子生物学、基因功能与分子育种等相关研究.本研究以半枫荷茎为材料,利用Illumina高通量测序技术进行转录组测序,获得了112361条Unigene,总长度为94018066bp,平均长度为836.75bp;对转录组ALL-Unigene的CDS进行BLAST分析,共发现了52107个Unigene片段;与Swiss-Prot数据库相比较,检测出33624个蛋白同源序列;与COG数据库比对,发现20060条Unigene被COG功能注释,共分为24类;进行GO功能分类分析,发现31125条Unigene注释到GO数据库中;进行KEGG功能注释,发现12987个Unigene参与了101条代谢通路;进行SSR位点搜索,共检测到33190个SSR位点,且SSR的类型丰富.这些研究结果极大地扩充了半枫荷的基因资源,为半枫荷药用基因的发掘与利用、分子标记的开发及其种质资源遗传改良等研究提供了重要基础.

摘要： 目的：研究安徽某铁矿不同矿山废水库中微生物群落结构特征及其影响因素. 方法：对比分析了该铁矿3个大型废水库的地球化学特征,并用高通量测序技术研究了水体中微生物群落组成,进而用统计学方法解析了环境因子对微生物群落结构的影响. 结果与结论：3个废水库中有2个为酸性,1个为中性,理化性质有明显的差异.近年形成的塌方采场废水库(TF)pH仅为2.55±0.01,Fe浓度高达154.95±0.78mg/L,SO42–浓度为3374.86±3.81mg/L;形成于20世纪70年代的排土场废水库(PT)酸性略弱(pH2.9±0.02),Fe浓度(34.57±4.00mg/L)与TF相比明显降低,SO42–浓度则高达10398.98±626.70mg/L;东沙采场废水库(DS)则为中性(pH7.55),但SO42–仍高达4162.99mg/L,主要的金属离子为Mg(594.90mg/L)、Ca(650.10mg/L).3个废水库的原核生物多样性随pH的升高而升高.两个酸性废水库的原核生物组成较为接近,但TF的化能自养菌含量较高(69.54％±2.89％),PT的化能异养菌含量较高(64.45％±13.81％).自养铁氧化菌Ferrovum在TF中的比例高达(64.17±1.84)％,在PT中则下降为(35.39±13.74)％.但PT中含有丰富的化能异养嗜酸菌如Acidicapsa(15.75％±3.99％)、Acidiphilium(10.65％±2.05％)、Acidisphaera(6.34％±1.02％)等.DS中虽然也含有较高的金属离子和SO42–,但其中的原核生物组成与TF和PT截然不同,主要为Limnohabitans(18.47％)、Rhodobacter(8.42％)等.3个废水库的真核生物群落主要由藻类组成,酸水库TF和PT中主要为棕鞭藻属(Ochromonas)和胶球藻属(Coccomyxa),棕鞭藻属在TF中(53.65％±2.02％)占优势,胶球藻属在PT中(68.84±10.4％)占优势,中性废水库DS中则主要是小环藻属(Cyclotella)(49.85％).经统计学分析,pH是影响矿山废水微生物多样性和群落组成的主要环境因素.

摘要： 感染性疾病是临床常见疾病,以呼吸道感染最为常见.世界范围内,呼吸道感染在成年人及儿童的发病率及致死率中居第2位,在全球疾病负担排名中仅次于缺血性心脏病[1-2].呼吸道感染可由多种病原体引起,主要包括病毒、细菌、肺炎支原体、衣原体等,复杂的病原学构成使得临床诊断中病原体的明确判断较为困难,贻误治疗和误诊的情况时有发生.相关研究表明,早期缺乏针对性的病原治疗是导致肺炎高发病率和死亡率的主要原因[3].因此,快速准确检测病原体,明确病原体构成,是呼吸道感染治疗工作实施前的首要环节,对于合理选择治疗方案进而有效地控制疾病的发生发展意义重大.

摘要： 本发明涉及一种用于高通量生物测序的高通量染色平台，包括壳体和工作室，所述壳体的顶部设有进风窗，所述进风窗底部设有静电除尘室，所述静电除尘室的内侧设有静电除尘器，所述静电除尘室的底部固定连接有第一换气泵，所述第一换气泵的底部固定连接有进风管道，所述壳体的一侧设有工作室，所述工作室的两侧均设有出风窗，所述出风窗与进风管道进行固定连接，所述工作室的底部两侧均设有抽气窗。该用于高通量生物测序的高通量染色平台，通过玻璃板封闭工作室，并通过静电除尘器对工作室的进风进行除尘处理，并在第一换气泵和第二换气泵的带动下进行快速的换气工作，并通过活性炭板对排气进行充分的净化处理。

摘要： 本实用新型涉及一种用于高通量生物测序的高通量染色平台，包括壳体和工作室，所述壳体的顶部设有进风窗，所述进风窗底部设有静电除尘室，所述静电除尘室的内侧设有静电除尘器，所述静电除尘室的底部固定连接有第一换气泵，所述第一换气泵的底部固定连接有进风管道，所述壳体的一侧设有工作室，所述工作室的两侧均设有出风窗，所述出风窗与进风管道进行固定连接，所述工作室的底部两侧均设有抽气窗。该用于高通量生物测序的高通量染色平台，通过玻璃板封闭工作室，并通过静电除尘器对工作室的进风进行除尘处理，并在第一换气泵和第二换气泵的带动下进行快速的换气工作，并通过活性炭板对排气进行充分的净化处理。

摘要： 本发明提出了用于高通量测序的文库构建方法，该方法包括：(1)将至少两种DNA样品进行步骤(1‑1)至(1‑4)的操作：(1‑1)将DNA片段进行末端修复，以便获得经过末端修复的DNA片段；(1‑2)在经过末端修复的DNA片段的3’末端添加碱基A，以便获得具有粘性末端A的DNA片段；(1‑3)将具有粘性末端A的DNA片段与接头相连，以便获得连接产物；(1‑4)将连接产物进行预扩增及纯化，以便得到预扩增产物；(2)将至少两种预扩增产物进行混合，并将得到的总预扩增产物与探针进行杂交捕获，以便得到目的预扩增产物；(3)将目的预扩增产物进行扩增及纯化，以便得到混合文库。本发明的文库构建方法可以有效地提高建库效率，降低建库成本，适于规模化应用。

摘要： 本发明提供了一种微量起始DNA的高通量测序文库构建方法及其所构建的高通量测序文库。该构建方法包括：对样本DNA进行物理打断，得到片段化DNA；对片段化DNA进行末端修复及加A，得到修复DNA；利用连接增强剂对修复DNA进行接头连接，得到带接头片段；以及对带接头片段进行扩增，得到高通量测序文库；连接增强剂为DMSO、乙醇、乙二醇或甘油。通过在接头连接的步骤中添加具有连接增强作用的DMSO、乙醇、乙二醇或甘油等小分子物质，利用这些小分子物质刺激连接酶的活性中心区域来增强连接活性，提高接头连接效率，使更多修复DNA片段连上接头序列，从而提高了微量起始量样本的测序成功率。

摘要： 本发明提出了用于高通量测序的文库构建方法，该方法包括：(1)将至少两种DNA样品进行步骤(1‑1)至(1‑4)的操作：(1‑1)将DNA片段进行末端修复，以便获得经过末端修复的DNA片段；(1‑2)在经过末端修复的DNA片段的3’末端添加碱基A，以便获得具有粘性末端A的DNA片段；(1‑3)将具有粘性末端A的DNA片段与接头相连，以便获得连接产物；(1‑4)将连接产物进行预扩增及纯化，以便得到预扩增产物；(2)将至少两种预扩增产物进行混合，并将得到的总预扩增产物与探针进行杂交捕获，以便得到目的预扩增产物；(3)将目的预扩增产物进行扩增及纯化，以便得到混合文库。本发明的文库构建方法可以有效地提高建库效率，降低建库成本，适于规模化应用。

摘要： 本发明提供了一种微量起始DNA的高通量测序文库构建方法及其所构建的高通量测序文库。该构建方法包括：对样本DNA进行物理打断，得到片段化DNA；对片段化DNA进行末端修复及加A，得到修复DNA；利用连接增强剂对修复DNA进行接头连接，得到带接头片段；以及对带接头片段进行扩增，得到高通量测序文库；连接增强剂为DMSO、乙醇、乙二醇或甘油。通过在接头连接的步骤中添加具有连接增强作用的DMSO、乙醇、乙二醇或甘油等小分子物质，利用这些小分子物质刺激连接酶的活性中心区域来增强连接活性，提高接头连接效率，使更多修复DNA片段连上接头序列，从而提高了微量起始量样本的测序成功率。

摘要： 本发明涉及一种鉴别和检测分子标记的高通量方法，其中限制性片段被生成，合适的包含(样品特异性)鉴别子的接头被连接。与接头相连的限制性片段可通过在3’端携带选择性核苷酸的、接头兼容性引物进行选择性扩增。经扩增的与接头相连的限制性片段经高通量测序方法(至少部分)测序，限制性片段的序列部分和样品特异性鉴别子作为分子标记。该高通量方法将AFLP(扩增片段长度多态性)方法和高通量测序技术结合起来。

摘要： 一种用于高通量测序中的样品加载方法、测序方法和测序系统，该样品加载方法包括：将需要加载的样品制备成雾滴，然后将雾滴喷洒在用于高通量测序的芯片表面使雾滴与芯片结合，获得加载有样品的芯片。该样品加载方法是一种非管道式流体加载方案，避免样品加载不均匀问题，提高数据产出量，对样品需求量少并且可避免外源杂质问题。

摘要： 本发明公开了识别高通量测序数据中热点PRC和测序错误的方法，所述的识别方法步骤如下：步骤1：收据获取步骤，获取测序原始数据；步骤2：数据分组步骤，将属于同一起始分子的测序读段进行分组，为测序读段组；步骤3：数据分析步骤，包括两级校正步骤或识别、纠正测序错误步骤。通过本发明，我们介绍了MIG分析的第二阶段，该阶段使我们能够通过使用MIG中包含的信息来识别和消除特定分析文库所特有的此类高频、热点PCR和测序错误，消除PCR扩增和高通量测序过程中出现的大量错误中非常有效。

摘要： 本发明公开了一种基于高通量测序的线粒体基因组测序文库的构建方法及扩增引物。该扩增引物包括引物对1和引物对2；引物对1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和2所示，引物对2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和4所示。本发明只需两对扩增引物，通过一次PCR扩增，即可获得足量的线粒体DNA样本，大大减少了繁杂的引物量和成本的投入，并简化操作。本发明通过两对引物的扩增产物混合建库，提高了mtDNA的完整性和准确性，保证数据分析的有效性。