肝细胞功能

摘要： 肝脏功能强大,是人体再生与代偿能力最强的器官,因此肝细胞即便受到了损伤,只要30%的肝细胞功能是正常的,它就能正常运转。这样病人容易放松警惕,认为肝功能是正常的。

摘要： This study was conducted to establish an in vitro 3D liver model and apply it to the drug liver toxicity evaluation.The 3D multicellular sphere model of HepaRG cells was established by hanging-drop technique for evaluation of liver function.The 3D liver model was used to test the hepatotoxicity of isoniazid and amiodarone hydrochloride compared to the 2D cell culture model.Our results showed that HepaRG cells formed a compact spheriod,and the level of cell albumin,urea and the CYP3A4 activity were significantly higher than that of 2D model.With the treatment of amiodarone hydrochloride in 2D and 3D model,the IC50 were 50 and 100 μmol·L-1,respectively.When the dose was less than 1 000 μmol·L-1,isoniazid had no hepatocyte toxicity in 2D model,while the IC50 in 3D model was 700 μmol·L-1.The LDH activities of both drugs in 3D model showed time-and dose-dependent correlation.The results suggest that this in vitro 3D hanging-drop liver model is good for testing liver functions with a high hepatic drug-metabolizing enzyme activity.Compared with the 2D model,the 3D liver model can accurately evaluate the liver toxicity of drugs.Our results demonstrated the importance of in vitro cell culture models for detection of in vivo-relevant adverse effects of drugs.%建立及评价体外肝脏3D模型在药物肝毒性评价中的优势.本研究利用悬滴技术构建HepaRG3D多细胞聚球体模型,并检测其肝功能水平,最后用该模型评价2个肝毒性阳性药重复给药毒性,并与2D模型下单次给药毒性进行比较.HepaRG细胞聚集生长形成微组织体,该模型的细胞白蛋白表达水平、尿素分泌水平和CYP3A4活性诱导水平均显著高于2D模型.盐酸胺碘酮在2D和3D培养模型下IC50分别为50和100 μmol·L-1;异烟肼在2D模型下IC50＞1 mmol·L-1,3D模型下IC50为700 μmol·L-1.两个药物在3D模型下LDH活性均呈现明显的时间/给药次数依赖性和剂量正相关性.结果提示成功建立体外肝脏3D悬滴培养模型,与2D模型比较,该模型可用于准确评价肝毒性阳性药,并为将来体外准确、高通量和多次长期给药评价药物肝脏毒性提供可能.

摘要： 猫脂肪肝（Fatty liver syndrome,FLS）又称为猫脂质沉积综合征（Feline hepatic lipidosis,FHL）,是由于多种原因引起的脂质（主要是三酰甘油）蓄积于肝细胞而引起的肝脏肿大,从而引起胆红素代谢障碍、胆汁淤积、肝细胞功能下降的一类疾病。猫脂肪肝是宠物猫临床上比较常见的致命性疾病之一。

摘要： 本研究以斜带石斑鱼肝细胞为实验对象,在不同培养条件下进行原代培养,旨在探讨稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法.采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)的含量,以分析肝细胞生长状态.结果表明,组织块方法不适于斜带石斑鱼肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出,而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108个/g肝重,活细胞数达到95％;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199培养基;启动原代培养的48～72h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清液中LDH活性显著降低,ALB和BUN含量显著升高.结果显示,0.25％的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑鱼肝细胞原代培养的最适培养基为L-15培养基,肝细胞在启动原代培养的48～72h生长代谢旺盛.

摘要： 目的：探讨尿酸对人肝细胞功能及氧化应激的影响及其对肝细胞损伤作用。方法体外培养人肝细胞（HL-7702），分别加入0（对照组）、5、10、20、30 mg／dL 的尿酸进行干预，于24、48、72、96 h 后收集细胞。MTT法检测细胞活力。化学比色法检测肝细胞谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及超氧化物歧化酶（SOD）的水平。结果5、10、20、30 mg／dL 尿酸组细胞活力（MTT）、ALT、AST 均高于对照组（P ＜0．05），作用48、72、96 h 均高于24 h （P ＜0．05）。5、10、20 mg／dL 尿酸组 SOD 均较对照组减小（P ＜0．05）；作用48、72、96 h 与24 h 比较均减小（P ＜0．05）。培养96 h 后 GSH-Px 较24 h 减小（P ＜0．05），30 mg／dL 尿酸组 GSH-Px 对照组增大（P ＜0．05）；作用96 h 时 MDA 与24、48、72 h 比较均增大（P ＜0．05）。结论尿酸可以促进肝细胞增殖，并可能通过诱导氧化应激加强对肝细胞的损伤作用。%Objective To observe the effects of uric acid on human hepatocyte function and oxidative stress. Methods Human hepatocyte (HL-7702)cell were cultured in vitro,stimulated by 0,5,10,20,30 mg/dL UA,then collected the cells after 24,48,72,96 h.The cell viability was measured by MTT as say.The glutamic-oxalacetic transamina-se (AST )、glutamic-pyruvic transaminase (ALT )、 malon-dialdehyde (MDA)、glutathione peroxidase(GSH-Px)、superoxide dismutase (SOD)levels were detected by enzyme mark instrument.Results The cell viability,ALT and AST in 5,10,20,30 mg/dL group were higher than those in the control group (P <0.05),which were also higher in 48,72,96 h than 24h (P <0.05). SOD were decreased in 5,10,20mg/dL UA group compared with the control group,SOD decreased in 48,72,96 h compared with 24 h (P <0.05).GSH-Px decreased in 96 h than 24 h (P <0.05).MDA in the 30 mg/dL group were increased as compared with control group (P <0.05);in 96 h were increased as compared with 24,48,72h (P <0.05).Conclusion Uric acid can promote the human hepatocyte viability, and promote its injury via the oxidative stress response.

摘要： 正在肝脏的恶性肿瘤中,原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC,下文简称肝癌)约占90%以上,位居全世界恶性肿瘤发病率的第五位,病死率的第三位,每年近100万人死于该病,新增患者也接近100万。其中,约45%的新增病例集中在我国大陆,成为我国恶性肿瘤的第二位致死病因[1]。尽管恶性肿瘤的发病原因尚未阐明,但是,越来越多的证据提示:恶性肿瘤是一种代谢相关

摘要： 肝癌是全球常见的恶性肿瘤之一,我国肝癌的发病人数及死亡人数均居全球首位,约占全球发病人数的55%和死亡人数的45%[1]。手术是治疗肝癌的主要手段之一,但我国80%的肝癌患者继发于不同程度的肝硬化,肝脏体积缩小,肝功能不同程度受损,而且相当一部分患者被确诊时肿瘤体积较大,

摘要： 为研究亚硒酸钠对游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)致体外培养大鼠肝细胞凋亡和线粒体膜电位降低的保护作用,本试验通过胶原酶两步灌流法分离培养肝细胞,在细胞培养液中添加FFA和亚硒酸钠(0.1 μmol/L)测定细胞的凋亡情况、细胞功能和线粒体膜电位.结果表明,随着培养液中FFA浓度的升高,细胞凋亡加重,肝细胞功能受到影响,线粒体膜电位降低且FFA的这种作用呈剂量依赖性;亚硒酸钠能抑制由FFA引起的肝细胞的上述变化.

摘要： The experiment was conducted to study the effect of sodium selenite on liver function and the activity of Caspase 3 induced by free fatty acids (FFA).Primary rat hepatocytes were obtained by two-step collagenase perfusion method.Cell proliferation rates,liver function and the activity of Caspase 3 in FFA-treated group with or without sodium selenite (0.10μmol/L) were determined.The results showed that:FFA changed dose-dependently cell proliferation rates, liver function and the activity of Caspase 3,whereas the presence of sodium selenite reversed these alternations.%　　为研究亚硒酸钠（Na2SeO3）对游离脂肪酸（FFA）诱导大鼠肝细胞功能和Caspase 3活性变化的作保护用，采用胶原酶两步灌流法分离培养肝细胞，在细胞培养液中添加FFA和Na2SeO3（0.10μmol/L），测定肝细胞上清液生化指标、细胞增殖率和Caspase 3活性。结果表明，培养液中添加FFA，细胞增殖率降低，肝细胞功能受到影响， Caspase 3活性升高，且FFA的这种作用呈剂量依赖性；Na2SeO3能抑制由FFA引起的肝细胞的上述变化。

摘要： Objective To provide the evidence for hepatocellular adenoma as the ideal cell source of bioartificial liver by exploring the synthesis, metabolism and detoxification function of hepatocellular adenoma. Methods We collected three surgical resection specimens during past two years in Nanfang Hospital. The specimens were pathologically confirmed as hepatic adenoma. The functionally related genes were detected by immunohistochemistry and qRT-PCR. The results were compared with normal liver tissue. Results Necleolus of hepatocellular adenoma was similar to normal liver tissue in cell morphology. The expressions of ALB, P450 and CK18 were high in both hepatocellular adenoma and normal tissue, but AFP was not expressed in hepatocellular adenoma and normal tissue except one hepatocellular adenoma tissue. QRT-PCR showed that the functionally related genes were all high in hepatocellular adenoma, even higher than normal tissues, but the expressions of AFP in hepatocellular adenoma were lower than normal tissue except one. Conclusion Hepatocellular adenoma was close to normal liver tissue both in cell morphology and in a variety of functional proteins and enzymes, and was expected to become the ideal cell source for artificial liver biological materials.%目的 初步探索肝腺瘤组织细胞所具备的合成、代谢、解毒等肝脏功能活性水平,为其能否成为人工肝新型细胞材料来源提供依据.方法 收集近三年来南方医院手术切除并经病理证实为肝腺瘤的组织标本3例,HE染色后电子显微镜下观察其细胞形态及组织结构,并通过糖原染色、免疫组化及qRT-PCR等方法检测肝细胞合成、代谢和转化等功能相关基因的表达情况,同时与正常肝组织细胞的功能水平进行对比.结果 肝腺瘤细胞形态与正常肝细胞相似,细胞核无明显异型性,qRT-PCR检测发现肝腺瘤各肝功能相关基因的表达均与正常肝组织细胞相当,部分指标甚至高于正常肝组织细胞.免疫组化检测发现肝腺瘤和正常肝组织中ALB、P450和CK18均有较强表达,AFP除一例肝腺瘤组织有部分表达外余2例和全部正常组织均无表达.结论 肝腺瘤细胞有望在解决生物人工肝细胞来源缺乏问题上产生重大突破,有必要进一步开展肝腺瘤的建株研究.

摘要： 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)指排除酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性为主要特征的临床病理综合征。其发病呈全球化趋势，在欧美及日本等发达国家成人患病率达17％-33％，成为第一大慢性肝病及肝功能异常的首要病因。在我国随着饮食结构及生活习惯的改变，其发病率在我国呈不断上升的趋势，且日趋低龄化。流行病学调查显示其发病率在健康体检人群为10-30％，已接近发达国家水平。NAFLD在我国已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。NAFLD临床表现一般较轻，约25％的轻度脂肪肝无明显临床表现。但存在着向肝纤维化及肝硬化转化，甚至引起肝癌的可能。NAFLD为越来越多的临床医生所重视。了解NAFLD的肝细胞功能情况显得越来越必要。本研究通过NAFLD不同的中医证型进行13C-美沙西汀呼气试验，比较中医证型与肝细胞功能之间的关系。

摘要： 目的：通过 C 美沙西汀呼气试验检测非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）不同中医证型的肝细胞功能情况，比较NAFLD中医证型与肝细胞功能之间的关系。rn 方法：选择NAFLD 患者81例，根据中医四诊，由副高及以上职称中医师进行辨证，将患者分为肝郁脾虚组、湿热蕴结组、痰瘀互结组及肝肾不足组，并设正常对照组，行13C 美沙西汀呼气试验进行肝细胞功能检测；并比较患者的体重指数、血清酶学及血脂等相关检测进行统计分析。比较中医证型与肝细胞功能之间的关系。rn 结果：调查中NAFLD的中医证型以肝郁脾虚型（33例，39.76%）及湿热蕴结型（27例，32.53%）居多，痰瘀互结型及肝肾不足型则相对较少；NAFLD 各中医证型组的40min 前代谢速率峰值、40min13CO2 累积呼出丰度均低于正常对照组，肝郁脾虚组及湿热蕴结组与正常对照组比较存在差异(P0.05）；湿热蕴结组量化均数为0.91，在正常肝细胞功能范围内，但较正常对照组及肝郁脾虚组间存在差异（P<0.05），而痰瘀互结组及肝肾不足组的量化均数为0.78，在病理性肝纤维化范围，与正常对照组之间有显著差异（P<0.01）。rn 结论：非酒精性脂肪性肝病各中医证型均存在不同程度的肝细胞功能受损；肝细胞功能储备方面：肝郁脾虚型及湿热蕴结型受损程度较轻，而痰瘀互结型及肝肾不足型则储备功能不足；肝细胞代偿能力方面：肝郁脾虚型及湿热蕴结型代偿能力较好；而痰瘀互结型及肝肾不足型则存在一定程度上的代偿能力不足。

摘要： 目的：探讨重度脂肪肝对大鼠肝部分切除的影响.rn 方法：健康雄性SD大鼠,经8w高脂饲料喂养后行70％肝部分切除.分别于术前及术后6h、12h、24 h、48 h、72 h处死大鼠,取血液及肝组织检测指标及观察组织学变化.结果参数包括肝细胞功能(ALT、AST)、炎症因子(IL-6、TNF-α)、缺血再灌注损伤(MDA)、肝再生(再生率、Ki-67增殖指数).rn 结果：经过8w高脂饲料喂养,大鼠肝组织呈重度脂肪变性.脂肪肝组PH后各时间点肝细胞损伤(ALT、AST)及炎症(IL-6、TNF-α)较对照组加剧(P＜0.05).术后6h、12 h、24 h,脂肪肝组缺血再灌注损伤(MDA)较对照组大(P＜0.05),术后肝再生功能(再生率、Ki-67增殖指数)启动延迟且较对照组低下.rn 结论：重度脂肪肝抑制术后肝脏的再生并增加肝细胞损伤,不利于肝脏功能的恢复,其机制可能与脂质过氧化加剧,Kupffer细胞过度释放炎症因子有关.

摘要： 大黄蜇虫丸原为东汉名医张仲景中治疗妇科"干血痨"的著名方剂,八十年代以来,国内不断有使用该药治疗慢乙肝肝硬化的临床和实验研究报道.为了进一步探讨该药对慢性病毒性肝硬化患者肝细胞代谢功能的影响,我们在常规观察肝功能生化指标和肝纤维化指标变化的同时应用核素肝细胞显像定量分析方法对36例的慢乙肝肝硬化患者进行了肝细胞代谢功能测定.现将结果作一报告.

摘要： 作者应用锝-99m标记的HIDA显像剂进行肝动态显像,评价肝脏的功能状态变化,探讨应用肝细胞代谢的三室模型研究方法定量分析肝硬化的肝细胞储备功能.

摘要： 作者应用锝-99m标记的HIDA显像剂进行肝动态显像,评价肝脏的功能状态变化,探讨应用肝细胞代谢的三室模型研究方法定量分析肝硬化的肝细胞储备功能.

摘要： 作者应用锝-99m标记的HIDA显像剂进行肝动态显像,评价肝脏的功能状态变化,探讨应用肝细胞代谢的三室模型研究方法定量分析肝硬化的肝细胞储备功能.

摘要： 作者应用锝-99m标记的HIDA显像剂进行肝动态显像,评价肝脏的功能状态变化,探讨应用肝细胞代谢的三室模型研究方法定量分析肝硬化的肝细胞储备功能.

摘要： 作者应用锝-99m标记的HIDA显像剂进行肝动态显像,评价肝脏的功能状态变化,探讨应用肝细胞代谢的三室模型研究方法定量分析肝硬化的肝细胞储备功能.

摘要： 本发明公开了一种原代肝细胞冻存液、肝细胞冻存的方法及肝细胞复苏的方法，属于原代肝细胞冻存与复苏领域。所述原代肝细胞冻存液，由如下体积百分数的组分组成：45％溶液A、10％‑45％胎牛血清、10％二甲基亚砜和0％‑35％水，所述溶液A由如下组分组成：D‑葡萄糖、羟乙基淀粉、乳糖酸、聚乙烯吡咯烷酮、五水D‑棉子糖、氢氧化钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、腺苷、还原性谷胱甘肽、别嘌醇、牛磺熊去氧胆酸和甘草酸二氨。本发明还公开了一种肝细胞冻存的方法及肝细胞复苏的方法。本发明的原代肝细胞冻存液可以降低原代肝细胞在冻存过程中的损伤、提高解冻后原代肝细胞活力与贴壁效率，可广泛用于肝脏基础研究与新药研发过程中。

摘要： 本发明提供特异性识别形成集落的同时增殖的人肝细胞的单克隆抗体、用该抗体分离人肝细胞的方法、将分离的增殖性人肝细胞分化诱导为功能性人肝细胞的方法。另外本申请的方法提供通过上述方法获得的增殖性人肝细胞和功能性肝细胞，以及含有该细胞的细胞试剂盒以及杂合型人工肝脏。

摘要： 本申请发明提供特异性识别形成集落的同时增殖的人肝细胞的单克隆抗体、用该抗体分离人肝细胞的方法、将分离的增殖性人肝细胞分化诱导为功能性人肝细胞的方法。另外本申请的方法提供通过上述方法获得的增殖性人肝细胞和功能性肝细胞，以及含有该细胞的细胞试剂盒以及杂合型人工肝脏。

摘要： 本发明提供一种功能性肝(前体)细胞或功能性小肠上皮(前体)细胞的制备方法，其包括在抗生素存在下培养包含肝(前体)细胞或者小肠上皮(前体)细胞的分离细胞群的步骤。另外，本发明还提供一种包含功能性肝前体细胞的实质上均匀的分离细胞群，其中，CYP3A4在所述功能性肝前体细胞中的表达水平与其在HepaRG(注册商标)细胞株中的表达水平相比至少增大5倍。

摘要： 本发明公开了一种原代肝细胞冻存液、肝细胞冻存的方法及肝细胞复苏的方法，属于原代肝细胞冻存与复苏领域。所述原代肝细胞冻存液，由如下体积百分数的组分组成：45％溶液A、10％‑45％胎牛血清、10％二甲基亚砜和0％‑35％水，所述溶液A由如下组分组成：D‑葡萄糖、羟乙基淀粉、乳糖酸、聚乙烯吡咯烷酮、五水D‑棉子糖、氢氧化钾、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、腺苷、还原性谷胱甘肽、别嘌醇、牛磺熊去氧胆酸和甘草酸二氨。本发明还公开了一种肝细胞冻存的方法及肝细胞复苏的方法。本发明的原代肝细胞冻存液可以降低原代肝细胞在冻存过程中的损伤、提高解冻后原代肝细胞活力与贴壁效率，可广泛用于肝脏基础研究与新药研发过程中。

摘要： 本发明涉及衍生自HBS细胞的新型肝细胞样细胞群体以及此类肝细胞样细胞在例如药物治疗、药物筛选和毒性测试中的潜在用途。此外，本发明涉及可以具有合适的特征的成肝细胞样细胞，从而使得它们可以用于与肝细胞样细胞相同的应用，且进一步可以用于肝发生例如早期肝发生或肝再生病症的体外研究。根据本发明的肝细胞样细胞和成肝细胞样细胞在基因或蛋白质表达水平上表达药物转运蛋白和/或药物代谢特征。

摘要： 本申请公开一种肝细胞培养液，包括终浓度为1～20μM的地塞米松，终浓度为1～20μM的姜黄素以及基础培养基，具有成分简单和成本低廉的优势，通过定量诱导获得功能增强的肝细胞，加速将其应用于肝病治疗中。本申请的增强肝细胞功能性的培养方法及所使用的肝细胞培养液培养，不仅能够提供足够的营养供目标肝细胞生长，并且还可诱导目标细胞的相关代谢酶和白蛋白基因表达。

摘要： 本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了一种于体外长期维持肝细胞功能的培养体系及采用该培养体系进行成熟肝细胞长期体外培养的方法，该培养体系包括如下组分：液体基础培养基、0‑5×B27添加剂、0‑5×N2添加剂、1％青链霉素/链霉素、0‑100mM尼克酰胺、0‑1mM地塞米松、0‑500μg/mL维生素C、0‑10μM Latunculin B、0‑50μM Blebbistatin、0‑50μM Dasatinib、0‑500μM XAV939和0‑10000μM的LY294002。成熟肝细胞长期体外培养的步骤如下：A、预先包被培养支持物并于4°C保存过夜；B、采用含有1％基质胶的培养体系将刚分离肝细胞种植于该培养支持物上，4～6小时后采用含1％基质胶的培养体系换液去除未贴壁细胞，之后每天换液直至第三天，三天后更换为不含基质胶的培养体系换液直至三周。

摘要： 本申请公开一种肝细胞培养液，包括终浓度为1～20μM的地塞米松，终浓度为1～20μM的姜黄素以及基础培养基，具有成分简单和成本低廉的优势，通过定量诱导获得功能增强的肝细胞，加速将其应用于肝病治疗中。本申请的增强肝细胞功能性的培养方法及所使用的肝细胞培养液培养，不仅能够提供足够的营养供目标肝细胞生长，并且还可诱导目标细胞的相关代谢酶和白蛋白基因表达。

摘要： 本发明涉及生物医药工程技术领域，提供了一种于体外长期维持肝细胞功能的培养体系及采用该培养体系进行成熟肝细胞长期体外培养的方法，该培养体系包括如下组分：液体基础培养基、0‑5×B27添加剂、0‑5×N2添加剂、1％青链霉素/链霉素、0‑100mM尼克酰胺、0‑1mM地塞米松、0‑500μg/mL维生素C、0‑10μM Latunculin B、0‑50μM Blebbistatin、0‑50μM Dasatinib、0‑500μM XAV939和0‑10000μM的LY294002。成熟肝细胞长期体外培养的步骤如下：A、预先包被培养支持物并于4°C保存过夜；B、采用含有1％基质胶的培养体系将刚分离肝细胞种植于该培养支持物上，4～6小时后采用含1％基质胶的培养体系换液去除未贴壁细胞，之后每天换液直至第三天，三天后更换为不含基质胶的培养体系换液直至三周。