转基因小鼠

摘要： 目的:为研究非酒精性脂肪肝(NAFLD)的发病机制以及潜在候选药物疗效,构建人脂肪酸转运蛋白5(hFATP5)在肝脏过表达的转基因小鼠模型。方法:将hFATP5表达序列插入白蛋白启动子的下游,构建基因表达载体,C57BL/6小鼠的受精卵通过显微注射、胚胎移植,繁殖过表达hFATP5(hFATP5+)小鼠。通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法确认hFATP5的过表达。稳定传代和扩繁后,对hFATP5+小鼠与野生型小鼠进行4周的高脂饲料喂养,检测血清甘油三酯、总胆固醇,肝脏甘油三酯,行腹腔注射糖耐量实验。结果:hFATP5+小鼠的F1、F2代和C57BL/6野生型小鼠比较,hFATP5+小鼠hFATP5蛋白质和信使核糖核酸水平在心、肝、脾、肾、肺、肠、胃组织显著过表达。4周高脂喂养后,hFATP5+雄性小鼠的体质量、血总胆固醇、肝内甘油三酯含量均显著高于野生型雄性小鼠,且糖耐量显著较差,而雌性小鼠之间的相关指标未出现显著差异。结论:hFATP5+雄性小鼠在肝脏过表达hFATP5,获得FATP5半人源化小鼠模型,4周高脂饲养形成更显著的代谢综合征和NAFLD。FATP5转运过多长链脂肪酸入肝是NAFLD发生的关键因素之一。

摘要： 目的:对小鼠内源性NPC1L1蛋白进行标记和示踪,为研究体内胆固醇的吸收机制提供新的技术手段。方法:利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,针对小鼠NPC1L1基因的3′末端非编码区,设计不同sgRNA,利用细胞内的荧光素酶法,检测分析其Cas9/sgRNA核酸酶活性,筛选出高活性的sgRNA序列,经体外转录制备sgRNA和Cas9 mRNA。PCR扩增基因打靶的两侧同源臂,与FLAG-EGFP的编码cDNA一起克隆至打靶载体。经酶切和测序鉴定正确的打靶载体DNA与sgRNA、Cas9 mRNA一起显微注射入小鼠受精卵,移植至假孕小鼠体内自然发育;通过基因组DNA的PCR和Southern印迹分析,筛选、鉴定重组正确且无随机插入的子代小鼠。制备小肠组织冰冻切片,荧光显微镜下观察NPC1L1-EGFP的表达分布。结果:成功构建了NPC1L1基因敲入打靶载体,筛选了高活性的sgRNA,利用CRISPR/Cas9技术获得了对内源性NPC1L1蛋白C端进行FLAG和EGFP双重标记的子代小鼠,荧光显微镜下观察到该融合蛋白分布于小肠绒毛上皮细胞的刷状缘,与NPC1L1的分布特征一致。结论:成功实现了对小鼠内源性NPC1L1蛋白进行体内标记,为研究NPC1L1囊泡转运和胆固醇吸收机制提供了有效手段。

摘要： 目的 建立心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因小鼠,用于研究Snhg5在心脏稳态维持中发挥的功能。方法 通过构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用显微注射导入小鼠的受精卵中,经过胚胎移植获得转基因首建者小鼠。利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,qRT-PCR)检测子代小鼠Snhg5基因整合情况,并检测Snhg5在各个组织中的表达情况,进一步通过形态观察、组织学和分子水平的检测分析转基因小鼠的心脏表型。结果 成功构建心肌细胞特异性过表达Snhg5的转基因载体,利用受精卵显微注射技术获得Snhg5转基因首建者小鼠4只。通过对子代小鼠各组织中Snhg5的表达进行检测,发现Snhg5只在心脏组织中特异性地过表达。进一步的表型分析发现,与对照小鼠相比,转基因小鼠在异丙肾上腺素刺激下更容易发生病理性心脏重塑。结论 成功建立了心肌细胞特异性Snhg5过表达的转基因小鼠,为研究Snhg5在心脏组织中的功能及病理性心脏重塑的发生机制提供了良好的动物模型。

摘要： 目的探索糖皮质激素受体(GR)对孕期抑郁小鼠子代抑郁倾向的影响。方法利用普通小鼠进行孕期抑郁(PND)造模,并用Western blot检测不同性别胎盘绒毛中GR表达情况;利用转基因工具鼠获得胎盘GR敲低小鼠,共20只。Western blot检测胎盘GR敲低效果并分析胎盘组织学改变;对胎盘GR敲低小鼠进行孕期抑郁造模,比较GR敲低组抑郁孕鼠的仔鼠(KD)与GR非敲低组仔鼠(N-KD)生长发育情况;动物行为实验检测仔鼠运动能力和抑郁倾向。结果PND小鼠雌性仔鼠胎盘绒毛GR表达显著升高(P0.05);KD组仔鼠生长发育未见异常(P>0.05);KD组仔鼠成年后运动能力未见异常(P>0.05);KD组雌性仔鼠在成年后更有抑郁倾向(P<0.05)。结论敲低胎盘GR可能增加孕期抑郁小鼠雌性子代抑郁倾向。

摘要： 目的探讨Bar家族同源域因子(Barx)2和轴向抑制蛋白(Axin)2在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠脊髓中的表达变化及其在ALS发病中的作用和意义。方法选用ALS转基因小鼠和同窝野生型(WT)小鼠,将33只成年ALS小鼠按照不同发病时期分为早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期ALS组各11只,并且每组配以同窝WT小鼠作为对比参照,分别为早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期WT组各11只。应用免疫荧光技术检测Barx2和Axin2在ALS转基因小鼠脊髓内的表达变化规律及其与神经元的共定位关系。应用反转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测Barx2和Axin2 mRNA表达水平,应用Western印迹检测Barx2和Axin2蛋白表达。结果与早、中、晚期WT组相比,早、中、晚期ALS组脊髓内Barx2和Axin2 mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.05)。免疫荧光检测结果显示,晚期ALS及WT组脊髓中都能检测到Barx2和Axin2阳性细胞,且与神经元共表达,与晚期WT组相比,ALS组Barx2和Axin2免疫阳性反应均减弱。结论ALS转基因小鼠脊髓中Barx2和Axin2表达随病程的进展而降低,提示Barx2和Axin2与ALS密切相关。

摘要： 目的构建硒代半胱氨酸插入序列结合蛋白2(SBP2)突变型转基因小鼠模型,并分析其甲状腺表型。方法利用同源重组工程技术建立Sbp2基因突变敲入打靶载体,Southern blot筛选阳性胚胎干细胞克隆,利用显微注射法制备嵌合体小鼠,经育种后获得F3代小鼠。采用充足硒饲料和低硒饲料喂养F3代小鼠60 d,喂养30 d及60 d时采用放射性免疫法测定其甲状腺功能。结果Sbp2 R129X和R775X突变敲入打靶载体电转入胚胎干细胞后分别获得12个和23个阳性克隆,经Southern blot筛选后通过显微注射法分别获得36只Sbp2 R129X和27只Sbp2 R775X嵌合体雄鼠,育种结果显示纯合突变和复合杂合突变的F3代小鼠均在胚胎期死亡。充足硒饲料喂养下Sbp2 R129X和R775X杂合突变小鼠的甲状腺功能与野生型小鼠相比差异无统计学意义,而低硒饲料喂养下R775X杂合突变雌鼠的血清T4、雄鼠的血清rT3,以及雌鼠和雄鼠的T4/T3比值均显著增高(P<0.05)。结论成功建立了Sbp2 R129X和R775X基因突变敲入小鼠模型,低硒诱导下R775X杂合突变小鼠可模拟SBP2缺陷患者的甲状腺表型。

摘要： 阿尔茨海默病病因的不确定性给治疗带来巨大的困难,为了了解其发病机制,并且提供更有效的治疗方法,转基因小鼠成为较好动物模型。因其是将目前阿尔茨海默病明确的致病基因转入到小鼠模型中,从而更好地模拟了阿尔茨海默病的病理学特征和行为变化,目前转基因鼠包括单转基因鼠、双转基因鼠以及多转基因鼠,本文就其病理特征和行为变化给予综述,并对其优缺点做出比较,以便为药物试验与临床研究提供必要的信息。

摘要： 阿尔茨海默病是一种常见的神经退行性疾病,临床主要表现为进行性记忆能力丧失和整体认知能力下降。两种典型的病理特征为在脑内检测到的老年斑和神经纤维缠结,分别由大量沉淀的淀粉样蛋白肽和过度磷酸化的Tau蛋白组成。除此之外还有神经炎性反应以及神经元广泛丢失等其他病理特征。在过去的几十年间虽然人们已经对阿尔茨海默病进行了大量的研究,但是其病因和发病机制仍不明确,至今也没有理想的治疗药物和根治方法。本综述介绍在临床前研究中使用的各种转基因动物模型的各自特点,及其目前在临床前研究中的应用情况,为未来的实验研究提供理论依据。

摘要： 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是常见的具有多种病理改变的神经变性疾病,氧化应激在AD早期病理发生和发展中起重要作用.AD发病机理的多因素性质需要研究和发现多种或具多效应神经组织保护剂.天然药物因其具有多途径、多靶点、多效应特点而有时可能优于单一化学药品.AD转基因动物具有AD的多种病理生理特征,适用于评价天然抗氧化药物对AD氧化应激反应的干预效果.因此,本文拟对目前使用的AD转基因鼠,评述天然药物或提取物、单体或复方剂抗氧化作用为主的作用之研究进展,为AD防治进一步研究提供理论或实践依据.

摘要： 阿尔茨海默病(Alzheimer''s disease,AD)是常见的具有多种病理改变的神经变性疾病,氧化应激在AD早期病理发生和发展中起重要作用。AD发病机理的多因素性质需要研究和发现多种或具多效应神经组织保护剂。天然药物因其具有多途径、多靶点、多效应特点而有时可能优于单一化学药品。AD转基因动物具有AD的多种病理生理特征,适用于评价天然抗氧化药物对AD氧化应激反应的干预效果。因此,本文拟对目前使用的AD转基因鼠,评述天然药物或提取物、单体或复方剂抗氧化作用为主的作用之研究进展,为AD防治进一步研究提供理论或实践依据。

摘要： 目的：检测分析HBV转基因小鼠尿液中HBV相关指标表达情况,进一步认识转基因小鼠的生物学特性;并通过多种实验方法确定尿液中HBV相关指标的组织来源. 方法：使用酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量PCR(Real-time PCR)检测转基因小鼠尿液中HBV相关指标;并通过水动力转染的小鼠实验、RNA干扰方法抑制HBV表达转基因鼠实验、乙肝患者HBV阳性血清感染正常小鼠实验等多种实验方法确定其复制表达组织来源. 结果：HBV转基因小鼠尿液中存在HBsAg、HBeAg、及HBV-DNA表达,其中HBsAg的表达水平较高(6674±619.8IU/mL),但低于血清中HBsAg的表达水平(16470±2704IU/mL),尿液HBsAg雄性小鼠的表达水平高于雌性小鼠;而尿液HBeAg表达水平较低,且尿液中HBeAg的阳性率高于血液,HBeAg的表达水平个体间和性别间有明显差异;尿液中存在HBV-DNA含量达到103～105copy/ml;未检测到相关抗体表达.通过水动力转染等实验表明转基因鼠尿液中的HBV相关指标来源于肾脏的复制表达,而不是由肝脏分泌进入血液循环以尿液排出,肾脏是HBV独立的表达场所. 结论：转基因小鼠尿液中存在HBV相关指标的表达,并随月龄长期表达,其中HBsAg及HBV-DNA表达水平较高且比较稳定,雄性小鼠尿液HBsAg的滴度高于雌性小鼠;HBeAg雄性鼠表达水平相对雌性鼠较高且比较稳定;尿液中无各类抗体表达;肾脏也是HBV独立的复制表达场所.

摘要： 目的：探讨以精子介导法和慢病毒载体法相结合的方法建立转基因动物. 方法：用三质粒慢病毒载体系统和pSico-eGFP表达载体转染293TN细胞,包装慢病毒,转染后裂解细胞,收集携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒.将30uL含1x TransDux和1％台盼蓝的病毒液(2×107U/mL)注射到成年C57BL/6J小鼠睾丸网内,根据小鼠精子形成周期,分别于注射后7d、15d、30d和42d与发情母鼠合笼.利用EGFP观察灯检测转基因小鼠阳性率. 结果：该种方法能够制备转基因荧光小鼠,而且在注射后30d配种,产生的转基因小鼠阳性率最高,达35％. 结论：该方法操作简单,易于操作,能够有效制备转基因小鼠.

摘要： 随着遗传工程技术的飞速发展,转基因动物制作技术的日臻成熟,从而使转基因小鼠模型被越来越多的用于人类疾病致病机制研究以及疫苗和新药的研发,新的转基因小鼠技术,如靶向转基因、快速定点转基因技术的应用为制作更加接近人类疾病特征的动物模型提供了条件,也将进一步促进疫苗和新药发展.

摘要： 目的：测定C57-ras转基因小鼠的血液生理生化正常值,并对成年动物两性的正常值进行比较,并比较4周龄和8周龄的血液生理生化正常值.rn 方法：将20只8周龄和20只4周龄的近交系C57-ras转基因小鼠,采血后,用日本光电MEK-7222K血球分析仪测定血液生理指标,用OLYMPUS AU400全自动生化分析仪测定血清生化指标.rn 结果：8周龄动物血液生化指标,ALB、GLU和CHO,3项指标雌雄间比较有显著性差异(P＜0.05),血液生理指标中WBC和LYM这2个指标雌雄见差异有显著性(P＜0.05);4周龄和8周龄的血液生化指标比较,其中ALT、TP、ALB、ALP、P、CHO和T.Bili,7项有显著性差异(P＜0.05);血液生理指标4周龄和8周龄比较,WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、RDW、PLT、PCT、MPV、NEUT和LYM12项指标有显著性差异(P＜0.05).rn 结论：成年的C57-ras转基因小鼠的血液生理生化值,部分指标两性间测定值有差异;4周龄和8周龄C57-ras转基因小鼠的血液生理生化值中多数指标差异显著;年龄对C57-ras转基因小鼠的血液生理生化值的影响比性别对其影响要大.

摘要： 目的:本文通过检测人多形性腺瘤的Plagl转基因小鼠的肿瘤组织中相关标志物的表达,为后期肿瘤干细胞的研究提供依据.rn 方法:收集Plag1转基因小鼠的肿瘤细胞和野生型颌下腺细胞,行相关免疫组化,流式检测其中CD44、CD133和CD117的表达,选择5只肿瘤小鼠注射Brdu,用Brdu掺入方法检测肿瘤增殖分裂活性.rn 结果:免疫组化研究发现肿瘤组织中CD44、CD117和CD133较正常组织表达高,流式检测发现肿瘤细胞中CD44较正常颌下腺细胞表达增加,若将CD44染色细胞分为3亚群,CD44hi 、CD44int和CD44neg,则CD44hi亚群细胞在肿瘤细胞所占比例约8.62％,平均荧光强度为84,明显高于正常野生型颌下腺细胞(P＜0.05),而CD44hi细胞亚群中CD133和CD117共染的百分比明显较CD44neg在细胞亚群高,有明显差异(P＜0.05),免疫组化结果显示CD44、CD133 、CD117表达明显较瘤旁和正常组织增强,Brdu掺入实验和CD44染色发现在观察时间内Brdu染色的CD44hi细胞较CD44neg的细胞数量明显减少.rn 结论:Plag 1转基因肿瘤小鼠CD44hi细胞较正常颌下腺细胞多，且其中Brdu的掺入实验结果提示CD44hi的细胞较CD44neg增殖分裂活性差，而C D44hi的细胞中CD133和CD117的高表达无明显差异.提示CD44hi可能是肿瘤干细胞的一个标志。

摘要： 目的：建立国内用于药物临床前安全评价致癌性实验替代方法的C57-ras转基因小鼠模型,并通过甲基亚硝基脲(N-Methyl-N-nitrosourea,MNU)进行初步验证.方法：通过PCR方法克隆人的原癌基因c-Ha-ras,全长6.5kb,含有4个外显子,含有该基因本身的启动子、调控序列和polyA信号序列;并将其通过原核注射注入C57BL/6J小鼠受精卵雄原核.通过PCR、real-time PCR等检测手段从基因插入和表达等层面验证了C57-ras转基因小鼠的建立。C57-ras转基因雄性小鼠与BALB/c雌性小鼠杂交，子代通过PCR进行基因型检测，获得C57-ras转基因和野生型小鼠。实验设定2个剂量，75mg/kg MNU和150mg/kg MNU单次腹腔注射给药，共5个组，其中75mg/kg MNU设3个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠溶媒组;(3)野生型小鼠MNU组;150mg/kg MNU设2个组:(1)转基因小鼠MNU组;(2)野生型小鼠MNU组。其中溶媒组给予同等体积柠檬酸缓冲液，给药后观察29周，观察动物一般症状、生存率、肿物出现时间及大体剖检观察并进行组织病理学检查。结果：6只首建鼠中有3只有自发肿瘤发生。并且己经证明人类c-Ha-ras基因在传代过程中能够稳定遗传。75mg/kg MNU给药组小鼠生存率高于150mg/kg MNUa 75mg/kg MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤;150mg/kg MNU给药后诱发C57-ras转基因小鼠发生淋巴瘤、肺脏腺瘤和直肠纤维肉瘤。野生型动物溶媒组和野生型动物MNU组均无肿瘤发生。结论：初步验证了自主建立的C57-ras转基因小鼠模型，该模型是临床前药物安全性评价致癌性实验快速替代实验候选模型之一。

摘要： 促卵泡激素(FSH)是动物垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白生殖激素，它和促黄体素一起在调节性腺功能中扮演重要角色。在雌性动物中，促卵泡激素主要促进子宫内膜生长、排卵和刺激多卵泡发育。研究表明FSHβ基因是猪产仔数的主效基因。因此通过转基因小鼠模型这一强有利的工具来探讨FSH基因在生殖方面的功能。为了避开传统研究方法的弊端，利用FSH-BAC来构建转基因小鼠模型，获得外源促卵泡激素生理分泌量的转基因小鼠家系，以研究猪FSH在垂体中特异表达对雌性小鼠生殖的影响。

摘要： 目的：通过对HBV转基因小鼠的实验研究,比较苦参素和肝炎灵注射液的抗病毒作用。方法30只HBV转基因小鼠随机分为3组:生理盐水组、肝炎灵注射液组和苦参素注射液组,同种同龄非转基因小鼠为正常对照组;苦参素注射液组和肝炎灵注射液组分别按照82.2mg/kg·d和14.38mg/kg·d腹腔注射给药,生理盐水以及正常对照组以同体积生理盐水腹腔注射,共30d;采用荧光定量PCR法检测治疗前后血清以及治疗后肝脏中的HBV-DNA含量,ELISA法检测治疗后肝组织中 HBsAg以及HBeAg含量。结果 治疗前各组小鼠血清HBVDNA含量没有明显差别,治疗后各用药组小鼠血清HBVDNA含量较治疗前均有明显降低;治疗后,与生理盐水组比较,苦参素注射液组血清HBVDNA显著下降,肝炎灵注射液有下降趋势,但是没有统计学意义;肝炎灵注射液与苦参素注射液组肝组织HBV-DNA均没有明显下降;正常组小鼠肝组织HBsAg和HBeAg均为阴性,其他组小鼠肝组织均可检测到HBsAg和HBeAg不同程度的表达,其ELISA检测OD值显示两治疗组肝脏HBsAg以及HBeAg的表达均有所降低,对HBsAg抑制作用苦参素注射液组略胜于肝炎灵注射液组,对肝脏HBeAg的表达各治疗组之间比较没有显著性差异。结论 苦参素和肝炎灵注射液对HBV转基因小鼠HBV基因复制与抗原表达均具有一定的抑制的作用,苦参素注射液作用强度胜于肝炎灵注射液。

摘要： 目的：通过HBV转基因小鼠比较苦参素和肝炎灵注射液的抗病毒作用。方法：30只HBV转基因小鼠随机分生理盐水组、肝炎灵注射液组和苦参素注射液组,同种同龄非转基因小鼠为正常对照组：苦参素注射液组和肝炎灵注射液组分别按照82.2mg/kg·d-1和14.38mg/kg·d-1腹腔注射给药,生理盐水以及正常对照组以同体积生理盐水腹腔注射,共30d：采用荧光定量PCR法检测治疗前后血清以及治疗后肝脏中的HBV-DNA含量,ELISA法检测治疗后肝组织中HBsAg以及HBeAg含量。结果：治疗前各组小鼠血清HBVDNA含量没有明显差别,治疗后各用药组小鼠血清HBVDNA含量较治疗前均有明显降低;治疗后,与生理盐水组比较,苦参素注射液组血清HBVDNA显著下降,肝炎灵注射液有下降趋势,但是没有统计学差异;肝炎灵注射液与苦参素注射液组肝组织HBV-DNA均没有明显下降;正常组小鼠肝组织HBsAg和HBeAg均为阴性,其他组小鼠肝组织均可检测到HBsAg和HBeAg不同程度的表达,其ELISA检测OD值显示两治疗组肝脏HBsAg以及HBeAg的表达均有所降低,对HBsAg抑制作用苦参素注射液组略胜于肝炎灵注射液组,对肝脏HBeAg的表达各治疗组之间比较没有显著性差异。结论：苦参素和肝炎灵注射液对HBV转基因小鼠HBV基因复制与抗原表达均具有一定的抑制的作用,苦参素注射液作用强度胜于肝炎灵注射液。

摘要： 目的研究雷公藤甲素(Triptolide．T10)对APP/PSl双转基因AD模型小鼠(APP/PSl double transgenic mice，APP/PSl dtg)Aβ沉积与SP形成的影响。方法取18只4．5月龄健康雄性APP/PSldtg，随机分为3组，分别灌胃5 g·kg-1·d-1 T10(T10 H组)、1g·kg-1·d-1 T10(T10 L组)和等容量的溶媒(PLC组)共计45 d。45 d后取材，左侧半大脑切片，6E10免疫组织化学方法染色和刚果红染色结合无偏性体视学定量分析研究T10对海马Aβ沉积和SP形成的影响；分离右侧半海马，West blot分析海马Aβ蛋白水平的变化。结果与PLC组比较，T10 H组海马6E10阳性的Aβ斑总面积减少了35%(P＜0.001)，SP总面积减少了32%(P＜0.001)；T10 L组海马Aβ斑总面积减少了18%(P＜0.05)，SP总面积减少了21%(P＜0.05)；T10呈剂量依赖性抑制Aβ在APP/PSl dtg海马的沉积和SP的形成，减少海马内Aβ蛋白水平；Western Blot蛋白分析也显示，T10 H组海马Aβ蛋白水平最低，PLC组Aβ蛋白水平最高，T10 L组Aβ蛋白水平介于二者之间。结论T10抑制Aβ的产生和SP形成，或可用于AD的治疗。

摘要： 本发明公开了一种以慢病毒基因转染法和静脉高压注射转染法为基础的小鼠肝脏特异性基因转染方法。该方法将慢病毒基因转染法和静脉高压注射转染法巧妙地结合在一起，通过该方法可以使外源基因特异性地在小鼠肝脏中表达，且对肝脏的损伤可在短时间内恢复。通过本转染方法可在小鼠肝脏内表达外源基因，该技术可以用于转基因人源化小鼠模型的建立。用本发明的方法可以作为建立疾病动物模型的一种手段。

摘要： 本文提供用于评价CRISPR/Cas介导的非同源末端连接的活性和/或CRISPR/Cas诱导的目标基因组基因座与外源供体核酸的体内或离体重组的方法和组合物。所述方法和组合物使用包含诸如基因组整合的Cas表达盒之类的Cas表达盒的细胞和非人类动物，从而使得Cas蛋白质组成上可获取的或以组织特异性或时间特异性的方式可获取。本文还提供用于产生和使用这些非人类动物的方法和组合物，包括使用这些非人类动物通过腺相关病毒(AAV)介导的将向导RNA递送至所述非人类动物来评价CRISPR/Cas的体内活性。

摘要： 本发明公开了一种以慢病毒基因转染法和静脉高压注射转染法为基础的小鼠肝脏特异性基因转染方法。该方法将慢病毒基因转染法和静脉高压注射转染法巧妙地结合在一起，通过该方法可以使外源基因特异性地在小鼠肝脏中表达，且对肝脏的损伤可在短时间内恢复。通过本转染方法可在小鼠肝脏内表达外源基因，该技术可以用于转基因人源化小鼠模型的建立。用本发明的方法可以作为建立疾病动物模型的一种手段。

摘要： 本文提供用于评价CRISPR/Cas介导的非同源末端连接的活性和/或CRISPR/Cas诱导的目标基因组基因座与外源供体核酸的体内或离体重组的方法和组合物。所述方法和组合物使用包含诸如基因组整合的Cas表达盒之类的Cas表达盒的细胞和非人类动物，从而使得Cas蛋白质组成上可获取的或以组织特异性或时间特异性的方式可获取。本文还提供用于产生和使用这些非人类动物的方法和组合物，包括使用这些非人类动物通过腺相关病毒(AAV)介导的将向导RNA递送至所述非人类动物来评价CRISPR/Cas的体内活性。

摘要： 本文提供用于评价CRISPR/Cas介导的非同源末端连接的活性和/或CRISPR/Cas诱导的目标基因组基因座与外源供体核酸的体内或离体重组的方法和组合物。所述方法和组合物使用包含诸如基因组整合的Cas表达盒之类的Cas表达盒的细胞和非人类动物，从而使得Cas蛋白质组成上可获取的或以组织特异性或时间特异性的方式可获取。本文还提供用于产生和使用这些非人类动物的方法和组合物，包括使用这些非人类动物通过腺相关病毒(AAV)介导的将向导RNA递送至所述非人类动物来评价CRISPR/Cas的体内活性。

摘要： 本发明涉及一种小鼠脊髓体外电转基因方法、小鼠脊髓电转组织切片培养模型建立方法及其应用，属于神经系统基因功能研究技术领域。本发明小鼠脊髓体外电转基因方法，包括：将胚鼠从母鼠子宫中取出，剥离出所述胚鼠的脊髓，将含有目的基因的质粒注射到所述离体脊髓的脊髓腔内，然后将电转仪的电极放到脊髓的两侧，其中正极放到需要转染一侧，进行电转，得电转脊髓。将电转后的脊髓进行组织切片培养，利用该方法可以建立小鼠脊髓电转组织切片培养模型，为外源基因在小鼠胚胎发育过程在脊髓中对神经元的影响提供了一种新的研究方法，从而寻找治疗脊髓疾病的有效手段；该方法更适合神经元的动态变化观察，是介于活体与细胞之间的一种研究技术。

摘要： 一种Glb1重组报告基因，其包括在Glb1基因的终止密码子位点从5’至3’端方向顺序地插入的2A序列以及报告基因，所述Glb1重组报告基因能够将Glb1转录水平与报告基因的转录水平显著性关联。一种制备转基因报告小鼠的方法，所述方法包括：将构建体引入小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞，获得包括Glb1重组报告基因的小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞；并且利用所述包括Glb1重组报告基因的小鼠胚胎干细胞或者小鼠生殖细胞生成杂合子转基因报告小鼠。其中，所述Glb1重组报告基因具有由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

摘要： 本发明公开了一种可诱导型c‑myc过表达的转基因载体、转基因工具小鼠及其构建方法，c‑myc编码区与pcDNA3载体连接获得pcDNA3‑c‑myc质粒；Loxp‑Stop‑Loxp片段与pcDNA3‑c‑myc质粒连接获得pcDNA3‑Loxp‑Stop‑Loxp‑c‑myc质粒；EF1a启动子片段与pcDNA3‑Loxp‑Stop‑Loxp‑c‑myc质粒连接获得转基因载体，再以该转基因载体为基础构建转基因小鼠模型。本发明构建得到的转基因小鼠模型为可诱导的白血病模型，在没有诱导剂的情况下c‑myc不表达不发病，在诱导剂作用的情况下c‑myc过表达，引发白血病的发生，较常规的转基因小鼠模型具有更好的可控性，可根据实验需要调整需维持的种群数量。

摘要： 本发明公开了一种可诱导型c‑myc过表达的转基因载体、转基因工具小鼠及其构建方法，c‑myc编码区与pcDNA3载体连接获得pcDNA3‑c‑myc质粒；Loxp‑Stop‑Loxp片段与pcDNA3‑c‑myc质粒连接获得pcDNA3‑Loxp‑Stop‑Loxp‑c‑myc质粒；EF1a启动子片段与pcDNA3‑Loxp‑Stop‑Loxp‑c‑myc质粒连接获得转基因载体，再以该转基因载体为基础构建转基因小鼠模型。本发明构建得到的转基因小鼠模型为可诱导的白血病模型，在没有诱导剂的情况下c‑myc不表达不发病，在诱导剂作用的情况下c‑myc过表达，引发白血病的发生，较常规的转基因小鼠模型具有更好的可控性，可根据实验需要调整需维持的种群数量。

摘要： 本发明公开了一种应用于转基因小鼠基因鉴定的DNA提取试剂盒，包括：组织裂解液、蛋白酶K、结合液、吸附微球、洗涤液、洗脱液，所述吸附微球为直径50～100μm的二氧化硅微球。与传统的试剂盒相比，本发明试剂盒价格低廉、操作步骤少、提取纯度高，所使用的试剂无毒害且安全稳定，适合用于大批量提取小鼠尾尖及脚趾DNA。还公开了使用上述试剂盒进行小鼠组织基因组DNA的高通量提取的方法。所提供的提取方法简化了操作流程、缩短了实验时间，所提取的DNA质量完全满足后续PCR的要求。显著提高转基因小鼠基因鉴定的效率。