重组大肠杆菌

摘要： 为了减少料液对层析的干扰,降低层析填料的负荷,提高目标蛋白回收率,文章对两株重组大肠杆菌高密度发酵裂解液澄清工艺进行了研究。选取分别表达猪链球菌和副猪嗜血杆菌关键基因的BL21-HP1036、BL21-palA菌株,采用切向流工艺、高速离心工艺和膜包澄清工艺,通过浊度、电泳检测等方法评估蛋白得率。结果表明:采用膜包过滤清液和膜包浓缩液离心两步法对分别表达猪链球菌和副猪嗜血杆菌关键基因的BL21-HP1036、BL21-palA高密度发酵裂解菌液进行澄清,蛋白得率80%以上,可有效减少层析干扰,提高回收率。

摘要： 2'-岩藻糖基乳糖(2'-fucosyllactose,2'-FL)可作为益生元添加到婴幼儿配方奶粉中,对婴幼儿肠道菌群和免疫系统的发育至关重要.通过共表达L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶(L-fucokinase/GDP-L-fucose pyrophosphorylase,fkp)基因和 α-1,2-岩藻糖基转移酶(α-1,2-fucosyltransferase,futC)基因,以大肠杆菌Escherichia coli BL21star(DE3)为出发菌株,异源表达脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)和幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)来源的fkp和futC基因,建立了2'-FL的合成途径.通过CRISPR/Cas9系统敲除 β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)和UDP-葡萄糖脂质载体转移酶(UDP-glucose lipid carrier transferase,WcaJ)基因,阻断中间代谢产物的分解,探究该类基因对2'-FL合成的影响.实验结果显示:单敲除LacZ基因促进2'-FL的产量并提高1.88倍,对菌体生长影响不显著;叠加敲除基因LacZ和WcaJ后,2'-FL的产量提高4.89倍,且对菌体生长没有显著影响.通过摇瓶发酵优化,确定了发酵条件为:采用限定性培养基(DM培养基),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导浓度为0.2 mmol/L,诱导温度为25°C,接种量为5％.在此条件下摇瓶培养,2'-FL产量最高可达1.44 g/L.研究表明敲除 β-半乳糖苷酶和UDP-葡萄糖脂质载体转移酶基因可显著提高2'-FL产量,为扩大其工业化生产提供参考依据.

摘要： 为高效制备纤维二糖差向异构酶,用于乳果糖生产,将来源于网团菌属Dictyoglomus sp.NZ13-RE01的纤维二糖差向异构酶基因引入到载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-NZ13-CE并转化表达宿主E.coli BL21(DE3),得到生产菌株BL21(DE3)-V1.该菌株在摇瓶中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thioga-lactopyranoside,IPTG)诱导24 h后得到最高酶活力为0.53 U/mL的发酵液,在7.5 L发酵罐中高密度发酵,表达酶活力提升了8.1倍,达到4.30 U/mL发酵液.通过镍离子亲和层析柱纯化重组酶,研究NZ13-CE的酶学性质:该酶的最适反应温度为80°C,最适pH为8.0,分子质量为45.5 kDa,80°C下重组酶的活性半衰期为182 min,催化乳糖至乳果糖的最高转化率为52.5％,且依匹乳糖占总糖含量仅为9％.研究结果表明,NZ13-CE酶具有工业化生产乳果糖的应用潜力.

摘要： Endo S(EC 3.2.1.96)是一种来源于化脓链球菌的β-N-乙酰葡萄糖苷内切酶,可以特异性水解免疫球蛋白G(IgG)可结晶区(Fc片段)N糖链.为实现其高效表达,本研究构建endo S重组表达大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)/pET28a-endo S,并验证表达蛋白糖苷水解活性,在摇瓶水平单因素优化蛋白质表达,考察了基础培养基种类、碳源、氮源、无机盐、培养基初始pH、发酵温度和时间等因素对产酶的影响,确定最优发酵培养基组成为(g/L):酵母粉10.0,甘油4.0,牛肉浸膏25.4,NaCl 5.0,pH 8.0,最优培养条件为:20°C诱导表达24 h,蛋白表达量为225 mg/L发酵液,是优化前的4.5倍,同时也是目前报道最高表达量的5.6倍.

摘要： 利用发酵罐对表达双功能谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌和毕赤酵母菌进行发酵工艺优化,确定重组大肠杆菌在25°C,pH6.5,菌体密度OD600为35的诱导条件下,谷胱甘肽合成酶活力可达到75.2 U/mL,比优化前提高了31.3％.通过对重组毕赤酵母的发酵对比实验,确定25°C,pH5.0诱导,溶氧值控制在10％～20％,酶活可提高到133.5 U/mL.经过系统优化后,新型谷胱甘肽合成酶在不同宿主菌中均获得高水平的表达,为工业化生产奠定了基础.

摘要： 采用5 L发酵罐对重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET30-PFDH外源表达NADP+型甲酸脱氢酶进行高密度发酵研究.通过对培养基、溶氧控制、诱导温度、诱导pH、诱导种类和时机的系统优化,在DO-star补料方式下,甲酸脱氢酶发酵液的酶活达到56.9 U/mL,相对于优化前提高了47.8％.在此基础上,利用200 L中试发酵罐对甲酸脱氢酶重组菌进行放大培养及工艺验证,重复6个批次,平均菌体质量浓度和平均酶活达到201.1 g/L和52.3 U/m L.优化后的高密度发酵条件放大重复性好,具备产业化前景.

摘要： 本研究旨在优化重组大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3) harboring pRSF-aad-ldh10-fdh菌株的培养条件,获得高密的供生物转化苯丙氨酸为苯乳酸的细胞.实验考察了摇瓶发酵培养基碳源、氮源种类和浓度,3L发酵罐中转速和通气量及恒速补料、DO-stat和pH-stat等不同分批补料策略对菌体密度的影响.结果 表明,当碳源为4 g/L葡萄糖,氮源为24 g/L安琪酵母浸粉FM802,细胞干重最大可达9.24 g/L;当转速为400 r/min和通气量为1.5 vvm时,细胞干重最大可达10.18g/L;以4 g/(L·h)恒速流加葡萄糖时,细胞干重最大可达13.71 g/L.本研究还对工程菌酶表达的诱导条件进行了优化,菌体培养2h后,添加终浓度为0.08 mmol/L IPTG诱导剂,在25°C下诱导培养14 h所得细胞有利于生物转化.底物苯丙氨酸浓度为60 g/L,转化为苯丙酮酸的转化率为50.2％,转化为苯乳酸的转化率为35.2％.

摘要： VD3羟化酶(VD3 Hydroxylase,VDH)是一种P450单加氧酶,属于CYP107家族,能够催化维生素D3的25位羟基化.铁氧化还原蛋白(Ferredoxin,FDX)和铁氧化还原蛋白还原酶(Ferredoxin reductase,FDR)是两个电子传递链蛋白,参与羟化反应中电子的传递.构建具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌,为骨化醇类化合物的高效转化提供参考.分别构建重组质粒pETDuet-1-fdr-fdx及pACYCDuet-1-vdh,将两个相容性质粒同时转入大肠杆菌BI21(DE3)中.采用IPTG对重组大肠杆菌进行诱导,使其表达目的蛋白,利用SDS-PAGE检测其蛋白大小及可溶性.采用液体传代的方法研究质粒稳定性.酶切鉴定和测序证明重组质粒pETDuet-1-fdr-fdx及pACYC-Duet-1-vdh构建成功.SDS-PAGE结果显示目的蛋白大小与预期一致.重组大肠杆菌可以将阿法骨化醇和艾地骨化醇中间体(AD-M07)分别转化成骨化三醇和艾地骨化醇中间体(AD-M08),转化率分别为36.10％和22.87％,转化时间为12 h,比自养假诺卡氏菌缩短600％.重组大肠杆菌经传代50次,质粒稳定性达到92％以上,说明该重组大肠杆菌菌株稳定性较好.实验成功构建了具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌,为高效转化阿法骨化醇和艾地骨化醇中间体(AD-M07)奠定了基础.

摘要： 苯基乳酸(phenyllactic acid,PLA)是一种重要的有机酸,广泛应用于食品、医药、化妆品等领域.通过构建D-乳酸脱氢酶重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-ldhD利用全细胞催化合成D-苯基乳酸.对重组大肠杆菌的诱导及转化条件进行了优化,最终确定了最佳的诱导条件:OD600=0.8时,添加IPTG至终浓度为0.2 mmol/L,在25°C下诱导4h;最佳的转化条件:pH 7.0磷酸缓冲液,13 g/L苯丙酮酸钠,5 g/L葡萄糖,30 g/L菌体(干重),37°C,200 r/min,转化2h.在最优的条件下,苯基乳酸的产物浓度达到5.2 g/L,产率为40％.该文还探索了苯丙酮酸钠与葡萄糖分批添加对苯基乳酸合成的影响,并初步得到了最佳工艺,经3h转化,苯基乳酸产物质量浓度和产率分别提高到7.38 g/L和52.7％,显示了较好的应用前景,也为后续酶的改造奠定了基础.

摘要： 试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(S T a)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响.选取24头7日龄仔猪,随机分为4个处理组,分别为对照组、STa组、LMG194组和K88组.整个试验期间均以人工乳饲喂,预饲期4 d,试验第5天进行攻毒,STa组、LMG194组及K88组分别在早晚两次口服灌喂2×109 CFU大肠杆菌LMG194-pBAD-STa、LMG194和K88,对照组灌服等量生理盐水,试验第7天早上各组灌服D-木糖并采血,屠宰并取空肠、回肠组织样品,测量仔猪血常规指标、血浆D-木糖含量及二胺氧化酶(DAO)活力,以及吸收与转运相关基因与蛋白表达量.结果显示,与对照组相比,STa组仔猪血液中中性粒细胞、中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05),LMG194组与K88组仔猪血液中中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05);STa组与K88组仔猪血浆D-木糖含量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组血浆DAO活力显著升高(P<0.05);STa组与LMG194组空肠AQP8、AQP10、KCN J13和b0,+A T基因表达量均显著降低(P<0.05),K88组空肠AQP8、AQP10基因表达量显著升高(P<0.05);STa组回肠AQP8基因表达量显著降低(P<0.05),AQP10、SGLT-1基因表达量显著升高(P<0.05),LMG194组、K88组AQP8基因表达量显著升高(P<0.05),K88组AQP10、KCNJ13、b0,+AT、SGLT-1基因表达量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组空肠HSP70蛋白的表达量显著升高(P<0.05).以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪小肠产生炎症,吸收与转运能力下降.

摘要： 近年来，在兽用生物制品的研制过程中众多目的基因在原核和真核细胞中被克隆和表达出来，以便大量快捷获得外源基因产物或基因工程活疫苗，应用于畜禽病的防治。大肠杆菌和毕赤酵母分别作为最常见的外源原核表达系统和真核表达系统具有不同的优势和特点。基因工程菌高密度发酵是获得外源目的产物的一种重要策略,文中介绍了常见的重组大肠杆菌和重组毕赤酵母高密度发酵,并对影响高密度发酵主要因素的研究进展进行了综述,包括宿主菌、接种量、培养基、培养条件、代谢副产物、培养方式等.

摘要： 为了提高重组蛋白的生产效率,本研究利用响应面法试验设计技术,对表达猪肺炎支原体P46蛋白的重组大肠杆菌DE-pET-P46的培养基进行了优化,进过两轮试验后,确定了培养基各营养成分及其最佳配比,相同培养条件下,优化培养基比LB培养基的菌体浓度高出一倍.在生物反应器中利用优化培养基发酵培养该重组大肠杆菌,培养物的湿菌重达39.5g/L.SDS-PAGE电泳结果显示,高密度发酵对重组大肠杆菌DE-pET-P46的rP46的表达和占细胞总蛋白的比例均没有明显的改变.

摘要： 根据史永磊的方法稍作改变.对培养基的氮源及浓度、碳源及浓度和无机盐离子添加剂及浓度作单因素试验,在此基础上运用响应曲面回归分析(Response surface analysis,RSA)方法对重组大肠杆菌发酵培养基进行优化.

摘要： 本文采用基于重组大肠杆菌SOS效应的水质遗传毒性检测方法对济南市四个主要污水厂出水以及污水处理一厂工艺段出水进行了SOS效应-遗传毒性测定。该专利重组大肠杆菌代替常用的鼠伤寒沙门氏菌，重组大肠杆菌是将大肠杆菌umuDC启动基因序列与绿色荧光蛋白基因序列连接，与质粒载体连接后导入大肠杆菌，形成携带绿色荧光蛋白的大肠杆菌。将绿色荧光蛋白的基因导入大肠杆菌体内后，遇到致DNA损伤物，则启动该基因表达，细胞内产生绿色荧光蛋白，可通过检测产生的荧光获得污染物信息。

摘要： 本文系统研究了甘油、酵母浸出物FM888及酵母蛋白胨FP101对重组大肠杆菌(Escherichia coli)KR-C发酵生产酮基还原酶酶的影响.结果表明,2％的初始甘油浓度使得菌体生长和产酶效果较好,而随着甘油浓度越大,在发酵8h后发酵液中乙酸会出现积累量(超过5g/L),明显抑制了菌体生长,产酶量小.同时,考察了酵母浸出物FM888、酵母蛋白胨FP101和混合氮源(FM888∶FP101=7∶3)等三种有机氮源对酮基还原酶基因工程菌生长与产酶的影响.结果发现,当仅用FM88作氮源时,前期生长较快,但是过多的速效氮源会使前期比生长速率过大而积累大量乙酸,会抑制菌体生长和积累,仅用酵母蛋白胨时,8h之后乙酸量较大,菌体生长和产酶亦受到抑制.相反,混合氮源在8h后乙酸快速被利用而被大量消耗,菌体生长和产酶表现良好.此研究确定了酮基还原酶基因工程菌分批发酵产酶的最佳甘油浓度和有机氮源配比.此研究对酮基还原酶进一步研究和工业化发酵生产具有一定指导意义.

摘要： 从毕赤酵母(Pichia Stipitis)中克隆NADPh 依赖性的羰酰还原酶PsCR基因,构建了重组大肠杆菌E. Coli BL21(pET-22b-PsCR),该重组菌能够大量可溶地表达羰酰还原酶,通过考察诱导OD、诱导浓度、诱导时间和温度对酶活的影响,优化了重组大肠杆菌的表达条件,结果表明:在重组菌OD为0.6时加入终浓度为0.8mmol/L的IPTG在25°C诱导10h，比酶活可达32U/mg。利用重组菌进行不对称还原4-氯乙酰乙酸乙酯为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的反应,在添加辅酶NADPh、葡萄糖脱氢酶及分批加入底物的情况下，产物浓度可达23.4g/L,转化率为93.7%,产物的对映体过量值为100%。表明该重组菌对4-氯乙酰乙酸乙酯有极高的活性及立体选择性。

摘要： α-酮基丁酸被广泛应用于医药和食品添加行业.由于化学法和酶法存在诸多不足,利用发酵法生产α-酮基丁酸及其下游相关产品受到越来越多的关注.本研究以L-苏氨酸高产菌E.coli THRD为出发菌株,首先构建了α-酮基丁酸基因工程菌THRDΔrhtA△ilvIH/pWSK29-ilvA,其摇瓶发酵产量可以达到16.25g/L.但同时发现目的产物α-酮基丁酸的积累会严重抑制宿主菌生长,干扰大肠杆菌的正常代谢.为了进一步提高产量及避免化学诱导剂的使用,利用温度诱导型启动子控制苏氨酸脱水酶表达,通过变温控制进行α-酮基丁酸发酵.前期培养温度为35°C,以保证细胞正常生长,然后升高温度至40°C诱导苏氨酸脱水酶表达.最优条件下,发酵28h,α-酮基丁酸产量达40.82g/L,单位产酸速率1.46g/L/h,糖酸转化率18.75％,具备了工业化生产潜力.

摘要： 5-氨基乙酰丙酸(ALA)是一种重要的光动力学药物,同时也可作为除草剂.本实验室在研究中构建了一株含双质粒重组菌株DALA,成功地将外源ALA生产途径引入到大肠杆菌中,该重组菌能够以葡萄糖为唯一碳源发酵生产ALA.ALA化学性质不稳定,且发酵中溶氧对ALA的生产影响较大.本文主要通过发酵罐探索合适的ALA发酵条件,实验采用双阶段发酵法发酵重组菌DALA,发酵温度设为大肠杆菌的最适生长温度37°C.首先,研究了发酵液pH对ALA生产的影响.结果发现,发酵前期(0h-27h),pH保持在6.5;稳定期后期(28h-48h),pH为6.0时有利于ALA的积累.其次,研究了溶氧对重组菌DALA产ALA的影响,通过控制转速与通气量调节发酵液中的溶氧.实验证明,发酵前期转速为500rpm,通气量为2vvm;稳定期后,转速降低至250rpm,同时通气量减少为1vvm,有利于重组菌DALA发酵生产ALA,最后采用双阶段发酵ALA的产量可达到3.46g/L.

摘要： 对荧光假单胞菌2P24基因组中pHlD进行了PCR和AT克隆，并采用E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)高表达系统对pHlD基因进行诱导蛋白表达。对构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)/pHlD进行摇瓶发酵实验并测定产物间苯三酚的含量。摇瓶优化条件下重组菌发酵48h合成间苯三酚产量达811mg/L。

摘要： 为实现重组人B淋巴细胞刺激因子工程菌E.coli DH5 ? /pKKH-BLyS的高密度、高表达发酵, 首先进行了培养条件的摸索, 确定了该工程菌的最佳培养pH值、诱导剂IPTG的浓度、诱导的最佳时间段、溶氧范围以及补料的流加方式等, 根据优化条件，用5L自控发酵罐进行三批重复发酵, 最终菌体密度均达到25 A600以上，菌体获得量均可达湿重30g以上，目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白的40%左右，保持并超过了该重组蛋白在试管和摇瓶中的表达量。此发酵工艺具有周期短、产量高、 重复性稳定性好等特点，为下游的纯化和进一步的大规模生产奠定了基础。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于对溶液中大肠杆菌浓度检测的传感器的制作方法，制备了一种基于石墨烯的1‑氨基芘和麦芽糖的复合膜，通过嫁接刀豆凝聚素A制成对糖类具有敏感性的改性石墨烯复合膜，并将其涂敷在光纤上制成基于改性石墨烯复合敏感膜涂敷粗锥型的生物传感器。其不仅制作简单容易，另外通过此方法制得的传感器在对溶液中大肠杆菌浓度的检测中，具有灵敏度高、检测效果好，响应时间快，精度和可靠性高的优点。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明提供了大肠杆菌重组菌及利用大肠杆菌重组菌生产3,4‑二羟基苯乙醇的方法，大肠杆菌重组菌共表达四种酶，分别为酪氨酸酶、L‑氨基酸氧化酶、酮酸脱羧酶和醇脱氢酶；利用大肠杆菌重组菌，以酪氨酸为底物生产3,4‑二羟基苯乙醇。本发明以酪氨酸为底物，酪氨酸廉价易得，且大多数为生物基来源，不依赖于石化产品，属于可再生资源，此外，由于它的天然属性，在食品、保健品、化妆品领域更易于被消费者认可接受。

摘要： 本发明提供了一种使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具在大肠杆菌基因编辑中的应用，所述使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具包括：pDual‑Cas9‑Parental质粒载体：含有DNA解旋酶基因、复制子、抗生素抗性基因、核酸酶基因、araC基因、阿拉伯糖启动子和Ⅱs型限制酶识别位点；和pDual‑sgRNA‑lacZ质粒载体：含有靶向lacZ基因的sgRNA序列、组成型表达的强启动子、复制子和抗生素抗性基因。本发明筛选得到的NHEJ系统在大肠杆菌中具有良好的连接效率，并可以进行高效的基因编辑，应用前景广阔。

摘要： 本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。

摘要： 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

摘要： 本发明提供了一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L‑苏氨酸的方法，涉及生物工程技术领域。本发明所述大肠杆菌重组核酸，利用磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因对大肠杆菌进行改造，获得一株以葡萄糖为底物的重组大肠杆菌LMT4，利用所述LMT4进行发酵生产，L‑苏氨酸产量以及转化率明显提高，为L‑苏氨酸的工业化生产奠定基础。

摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌及利用重组大肠杆菌生物合成香叶木素的方法，该重组大肠杆菌由重组质粒导入宿主大肠杆菌中得到，重组质粒是由密码子优化后的AnFNSⅠ的编码基因与表达载体pET‑28a(+)连接构建而成，AnFNSⅠ为来源于欧白芷的黄酮合酶1，AnFNSⅠ的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，密码子优化后的AnFNSⅠ的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。以该重组大肠杆菌为全细胞催化剂，催化底物橙皮素，生物合成香叶木素。该方法绿色高效，反应过程不需要使用大量有机溶剂或有毒化学试剂，成本低，安全性高，且易于大规模生产。

摘要： 本发明公开了一种表达猪丹毒杆菌重组蛋白GAPDH的基因gapdh及重组大肠杆菌与应用。其将猪丹毒杆菌的3‑磷酸甘油醛脱氢酶glyceraldehyde‑3‑phosphate dehydrogenase(GAPDH)基因进行了克隆、表达和纯化。本发明通过与猪丹毒康复猪血清的免疫印迹分析发现重组蛋白GAPDH具有很好的免疫原性。本发明小鼠实验表明重组蛋白GAPDH可以诱导产生高滴度抗体并产生有效保护力。这就为猪丹毒新型疫苗的创制提供了新的候选抗原。