M2型丙酮酸激酶

摘要： 糖尿病视网膜病变(DR)是一种糖尿病中最常见的高度特异性微血管并发症,是全球20~65岁人群视力障碍和失明的主要原因,主要表现为视网膜内微血管的异常及新生血管的形成。糖酵解过程是从葡萄糖分解开始到丙酮酸生成的过程,可以为机体迅速提供能量,内皮细胞多数通过糖酵解产生的ATP来维持其功能,包括维持紧密连接和屏障作用。丙酮酸激酶(PK)的M2亚型(PKM2)作为糖酵解的关键酶,在机体的大多数组织中均有表达。内皮细胞和光感受器细胞作为视网膜中的重要细胞成分,在DR的发生发展过程中发挥重要作用。研究表明,PKM2通过代谢和非代谢方式调节内皮细胞和光感受器的功能,在DR发展中发挥重要作用。因此,本文将重点通过内皮细胞和光感受器细胞两个方面来综述PKM2在糖尿病视网膜病变中的研究进展,从而为DR的诊断和治疗提供新思路。

摘要： 肿瘤细胞的新陈代谢与正常细胞有较大差异,肿瘤的可塑性强是导致靶向肿瘤代谢治疗研究进展缓慢的重要原因。丙酮酸激酶是细胞糖酵解通路的关键酶,可催化磷酸烯醇丙酮酸转化为丙酮酸并产生三磷酸腺苷。M2型丙酮酸激酶(PKM2)可以通过增强Warburg效应来促进肿瘤细胞的增殖和合成代谢,还能够进入细胞核内作为共转录因子和蛋白激酶调节基因转录,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本文重点介绍了PKM2在Warburg效应、合成代谢和肿瘤微环境方面的新突破,并简要介绍了PKM2的非代谢功能以及PKM2靶向小分子药物临床转化的最新进展,以期为治疗肿瘤提供新的思路。

摘要： 丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK),作为糖酵解的关键酶之一,可以编码四个不同亚型的基因,其中M2型丙酮酸激酶(PKM2)主要表达在正常人类胚胎发育中,和组织修复、再生密切相关,随着研究的深入,PKM2在肿瘤组织中的作用受到越来越多的关注。PKM2除了代谢作用外,还可以通过PKM2抑制剂和激活剂变构调节四聚体和二聚体,二聚体状态的PKM2可以调节细胞核中的基因表达及细胞增殖。本文综述了PKM2表达调控,重点介绍了PKM2非代谢功能及在抗肿瘤治疗中的临床应用。

摘要： 目的 检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)组织中的表达情况,探讨PKM2对ICC细胞增殖及上皮间质化(EMT)的影响.方法 RT-PCR和免疫组化法检测ICC组织中PKM2的表达,慢病毒载体介导的RNA干扰PKM2的表达,观察其对ICC细胞增殖、侵袭能力及EMT相关生物学特性的影响.结果 RT-PCR结果显示,PKM2在ICC组织中高表达(P<0.05).体外实验显示,PKM2基因沉默在体外抑制了ICC细胞的增殖和侵袭能力,PKM2-RNAi转染组细胞克隆形成数(152±9.63)显著低于空白组(351.5±17.6)及对照组(333.1±21.3)(P<0.05).转染组的侵袭能力明显低于空载(Mock)及对照组(Control)组,发生迁移的细胞数分别为(96.0±7.1)、(185.5±11.3)、(197.1±17.2)(P<0.05).其具体机制是通过抑制Wnt/β-catenin信号传导,进而抑制EMT相关通路.结论 胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2可通过Wnt/β-catenin信号调节EMT,进而调控ICC细胞侵袭的能力.

摘要： 目的 检测M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白在克罗恩病(CD)组织中的表达水平,探究其与患者疾病严重程度及预后的关系.方法 前瞻性选取2015年3月至2017年8月在上海市浦东新区浦南医院就诊的126例CD患者作为研究对象,设为CD组;另选取同期在该院接受结直肠镜检查并切除肠息肉组织的52例患者作为对照组.采用蛋白质印迹法检测CD组织和息肉组织中PKM2蛋白表达水平,分析PKM2蛋白表达水平与CD患者疾病严重程度和预后的关系.结果 与对照组相比较,CD组PKM2蛋白表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.05).CD组患者PKM2蛋白表达水平与CD简化内镜评分(SES-CD)呈负相关(P<0.05).预后不良的CD患者PKM2蛋白表达水平低于预后良好者,差异有统计学意义(P<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,疾病行为、肛周病变和PKM2蛋白表达水平与CD患者的预后关系密切(P<0.05).结论 CD患者PKM2蛋白表达水平越低提示其病情越严重.检测CD组织中PKM2蛋白表达水平有助于评估CD患者疾病严重程度及预后情况.

摘要： 目的 探讨人源基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)2在转化生长因子(TGF)-β1诱导宫颈癌细胞上皮细胞间质化(EMT)中的作用及机制.方法 用10 ng/ml TGF-β1培养,诱导宫颈癌细胞EMT.通过细胞计数试剂盒(CCK)-8评估细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡,通过划痕实验评估细胞迁移.Western印迹检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、信号转导和转录激活因子(STAT)3,蜗牛家族转录抑制因子(SNAIL)2、p-p70s6k和M2型丙酮酸激酶(PKM2).结果 TGF-β1组E-cadherin表达水平较PBS组明显下降,而波形蛋白表达较PBS组明显升高(均P0.05).TIMP2+TGF-β1组E-cadherin水平显著高于TGF-β1组,而STAT3,SNAIL2,Vimentin水平均显著低于TGF-β 组(P<0.05).同时TIMP2+TGF-β1组p70s6k和PKM2水平均显著低于TGF-β1组(P<0.05).与TGF-β1组比较,TIMP2+TGF-β1组HeLa细胞形成纺锤体和成纤维细胞形态程度低.结论 人源TIMP2处理通过抑制mTOR/p70s6k信号传导从而下调PKM2表达,阻断宫颈癌中TGF-β1诱导的EMT过程.

摘要： 目的:探究胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、趋化因子样因子超家族成员6(CMTM6)在乳腺癌组织中的表达及相关性.方法:选取2019年11月至2020年11月我院接诊的79例乳腺癌患者研究对象.免疫组化法检测癌组织、癌旁组织中CARD9、PKM2、CMTM6表达情况,实时荧光定量(RT-PCR)检测癌组织、癌旁组织中CARD9、PKM2、CMTM6表达情况.分析CARD9、PKM2、CMTM6表达与乳腺癌的关系.结果:与癌旁组织相比,癌组织中CARD9、PKM2、CMTM6表达较高(P<0.05).与高中分化程度、无淋巴结转移、Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者相比,低分化程度、有淋巴结转移、Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者CARD9、PKM2、CMTM6表达较高(P<0.05).CARD9、PKM2、CMTM6之间相关性分析显示CARD9、PKM2之间正相关(r=0.257,P=0.022);CARD9、CMTM6之间正相关(r=0.260,P=0.021);PKM2、CMTM6之间正相关(r=0.254,P=0.024).与CARD9、PKM2、CMTM6单项相比,三者联合对乳腺癌的预测价值较高,具有统计学差异(P<0.05).结论:CARD9、PKM2、CMTM6在乳腺癌组织中呈异常高表达且CARD9、PKM2、CMTM6呈线性正相关,与患者分化程度、淋巴结转移、临床分期相关,参与乳腺癌的发生、发展过程,三项联合检测对乳腺癌的预测价值较高.

摘要： 目的 探讨M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞周期阻滞和细胞外基质分泌中的作用.方法 利用TGF-β1刺激人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2(human kidney cell 2)细胞构建体外纤维化细胞模型.采用PKM2变构剂TEPP-46和抑制剂紫草素(Shikonin)抑制二聚体PKM2功能.利用蛋白免疫印迹法检测细胞外基质蛋白纤连蛋白和胶原I以及结缔组织生长因子的表达;利用碘化丙啶染色、流式细胞术检测细胞周期分布情况;利用蛋白免疫印迹法检测细胞周期抑制蛋白p21的表达情况.结果 蛋白免疫印迹法检测显示,TGF-β1处理显著提高HK-2细胞内二聚体PKM2的表达.加用PKM2变构剂TEPP-46或抑制剂Shikonin,显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞外基质蛋白纤连蛋白和胶原I以及结缔组织生长因子的表达.此外,TEPP-46或Shikonin均显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞G1周期阻滞以及周期抑制蛋白p21的表达.结论 二聚体PKM2促进TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞G1周期阻滞和细胞外基质分泌;抑制二聚体PKM2功能有望成为延缓肾小管-间质纤维化的新策略.

摘要： 目的 探究原发性肝癌患者癌组织中M2型丙酮酸激酶(PKM2)、环氧合酶2(COX2)及凋亡蛋白抑制因子(IAPs)的表达及其与放疗敏感性的关系.方法 选取接受三维适形放疗的原发性肝癌患者105例,经肝脏穿刺活检采集肝癌组织,采用免疫组化法检测肝癌组织中PKM2、COX2及IAPs家族[X关联凋亡抑制因子(XIAP)、细胞内凋亡抑制蛋白1(cIAP-1)]蛋白的表达,比较不同放疗效果和敏感性患者癌组织中PKM2、COX2、XIAP及cIAP-1蛋白表达的差异,并分析上述蛋白表达与患者预后的关系.结果 105例患者肝癌组织中PKM2、COX2、XIAP及cIAP-1蛋白表达阳性率分别为81.90％、74.28％、85.71％及82.86％;COX2、XIAP蛋白阳性表达者治疗有效率与阴性者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);放疗敏感患者临床分期、分化程度、肿瘤直径、肝癌组织中PKM2、COX2、XIAP及cIAP-1蛋白表达情况与放疗不敏感者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);高临床分期、低分化程度、COX2、XIAP阳性表达是患者放疗不敏感的独立危险因素(P＜0.05);XIAP阳性表达者复发率和转移率与阴性表达者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 原发性肝癌患者癌组织中PKM2、COX2、XI-AP及cIAP-1阳性率高,其中COX2、XIAP蛋白表达与患者放疗效果、敏感性密切相关,XIAP蛋白表达还与患者复发转移有关.

摘要： 本发明提供包含与至少一个编码序列有效连接的衰老特异性启动子的遗传构建体，所述编码序列编码至少一种具有烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(PCK)活性和/或丙酮酸正磷酸双激酶(PPDK)活性的多肽。所述构建体具有在转基因植物叶衰老期间引起氮素再动员的能力，使得氮可从叶转移到植物的其它部位。本发明提供用这类构建体转化的植物细胞以及植物、产生转基因植物的方法和提高衰老植物的氮素再动员速度和生长速度的方法。本发明还提供已用遗传构建体转化的收获的植物叶，例如烟草叶，以及包含这类收获的植物叶的吸烟制品。

摘要： 本发明公开了一种从丙酮酸发酵液中提取丙酮酸并制备丙酮酸钠的方法，其主要特征是采用一种特殊的有机溶剂以新的工艺从丙酮酸发酵液中一步提取丙酮酸，再以烧碱调节反萃取液的pH值生产丙酮酸钠产品。本发明具有产品质量高、试剂成本低、操作简便高效、环境污染小等特点，特别适用于工业化生产。

摘要： 一种乙酸渗漏型丙酮酸高产菌及其选育方法和用该菌发酵法生产丙酮酸，属于生物工程技术领域。本发明的菌种为一种光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)WSH-LQ307，它由WSH-IP303为出发菌株，经亚硝基胍(NTG)诱变，在培养基中添加以乙酸为补充碳源选育而得到。与出发菌株相比较，其丙酮酸脱羧酶(PDC)活性降低了很多。LQ-307生产丙酮酸的能力强且稳定，以乙酸为补充碳源时，摇瓶培养48小时，丙酮酸产量为46.2g/L，比出发菌株提高了21%。5L发酵罐发酵64小时，丙酮酸的产量达到了68.7g/L，对葡萄糖的转化率为0.651g/g。300L发酵罐发酵65h，丙酮酸产量为63.8g/L，对葡萄糖的转化率为0.588g/g。

摘要： 本发明提供包含与至少一个编码序列有效连接的衰老特异性启动子的遗传构建体，所述编码序列编码至少一种具有烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(PCK)活性和/或丙酮酸正磷酸双激酶(PPDK)活性的多肽。所述构建体具有在转基因植物叶衰老期间引起氮素再动员的能力，使得氮可从叶转移到植物的其它部位。本发明提供用这类构建体转化的植物细胞以及植物、产生转基因植物的方法和提高衰老植物的氮素再动员速度和生长速度的方法。本发明还提供已用遗传构建体转化的收获的植物叶，例如烟草叶，以及包含这类收获的植物叶的吸烟制品。

摘要： 本发明公开了一种从丙酮酸发酵液中提取丙酮酸并制备丙酮酸钠的方法,其主要特征是采用一种特殊的有机溶剂以新的工艺从丙酮酸发酵液中一步提取丙酮酸,再以烧碱调节反萃取液的pH值生产丙酮酸钠产品。本发明具有产品质量高、试剂成本低、操作简便高效、环境污染小等特点,特别适用于工业化生产。

摘要： 一种双膜二步法从丙酮酸发酵液中提取分离丙酮酸钠的方法，其步骤为：1.双膜法提取分离丙酮酸钠浓缩液；2.丙酮酸钠浓缩液制备丙酮酸钠固体：丙酮酸钠浓缩液经乙醇沉淀、沉淀与母液分离、烘干、粉碎、筛分、检验、成品包装等生产步骤得到合格的丙酮酸钠固体产品。本发明具有生产工艺流程短、产品纯度高、利率高、自动化程度高、对环境污染小、生产成本低等优点，特别适合于丙酮酸钠的工业化大规模生产。

摘要： 一种乙酸渗漏型丙酮酸高产菌及其选育方法和用该菌发酵法生产丙酮酸，属于生物工程技术领域。本发明的菌种为一种光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)WSH－LQ307，它由WSH－IP303为出发菌株，经亚硝基胍(NTG)诱变，在培养基中添加以乙酸为补充碳源选育而得到。与出发菌株相比较，其丙酮酸脱羧酶(PDC)活性降低了很多。LQ－307生产丙酮酸的能力强且稳定，以乙酸为补充碳源时，摇瓶培养48小时，丙酮酸产量为46.2g/L，比出发菌株提高了21％。5L发酵罐发酵64小时，丙酮酸的产量达到了68.7g/L，对葡萄糖的转化率为0.651g/g。300L发酵罐发酵65h，丙酮酸产量为63.8g/L，对葡萄糖的转化率为0.588g/g。

摘要： 提供了一种重组微生物，所述微生物包含增加丙酮酸磷酸二激酶活性的基因修饰，一种使用其生产纤维素的方法以及一种生产具有增强的纤维素生产能力的微生物的方法。

摘要： 本发明涉及C4植物的转化方法。它还涉及外源基因在C4植物中过表达的方法。更具体地，本发明涉及到在低温条件下仍保持良好光合作用能力的C4植物的制备，其是通过组成C4光合作用途径酶的高水平表达而实现。在本发明中，使用了一种表达盒，它包括启动子、在上述启动子控制下的编码组成光合作用途径酶的C4植物基因组基因和终止子。编码组成光合作用途径酶的C4植物基因组基因优选地是C4植物基因组来源的PPDK基因或其经过修饰的形式。本发明在提高具有PPDK的C4植物产量(特别是在低温条件下对玉米产量的提高)上特别有用。

摘要： 本发明提供了一种基于有机砷的II型丙酮酸激酶抑制剂及其制备方法和用途。具体地，本发明的PKM2抑制剂为式I化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体或互变异构体、水合物或溶剂化物；其中，X1、X2、R1、R2、R3、R4、R5和n如说明书所定义。本发明的化合物对PKM2具有高抑制活性和高特异性，非常适合用于制备通过抑制PKM2通路从而抑制肿瘤的药物。