卵母细胞成熟

摘要： N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰是指mRNA中腺苷酸(A)的第六位氮原子处发生甲基化,m^(6)A修饰是生物mRNA中最广泛存在的内部修饰。m^(6)A修饰通过调节RNA代谢、稳定性、翻译、降解以及选择性剪接来发挥生物学功能,在细胞分化、生物节律、生殖生理、肿瘤发生等方面起到调控作用。本文综述了目前对m^(6)A修饰的认识,阐述了甲基化转移酶、去甲基化酶、甲基化阅读蛋白3种m^(6)A甲基化酶的作用,总结了m^(6)A修饰在调节动物生殖方面的研究进展,为m^(6)A甲基化在家畜生殖生理方面的相关研究与应用提供参考。

摘要： 目的 探讨小鼠卵母细胞体内成熟过程中细胞周期蛋白依赖性激酶-1(CDK1)蛋白和CDK1 mRNA表达的动态变化。方法 将6~8周龄SPF级ICR雌性小鼠68只随机分为4组,根据获取卵母细胞的时期分为GV组、GVBD组、MⅠ组和MⅡ组,每组17只。腹腔注射10 U孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后,颈椎脱臼处死法处死小鼠,获取GV期卵母细胞;注射PMSG 48 h后注射10 U人绒毛膜促性腺激素(HCG),分别于注射HCG后4 h、8 h和12 h后获取GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞。Western blot检测各阶段卵母细胞CDK1蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各阶段卵母细胞中CDK1 mRNA的表达,并采用Spearman相关分析检验CDK1 mRNA和蛋白表达的相关性。结果 Western blot结果显示,CDK1蛋白在GV、GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞均有表达,且随着卵母细胞的体内成熟,CDK1蛋白表达量持续增加(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,CDK1 mRNA在GV、GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母细胞均有表达;与GV期比较,GVBD期和MⅠ期CDK1 mRNA表达水平均显著下调(P<0.05),而MⅡ期CDK1 mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。Spearman相关分析显示,卵母细胞体内成熟过程中CDK1蛋白与CDK1 mRNA表达的相关性较差(R=0.200)。结论 卵母细胞体内成熟过程中CDK1蛋白的增加并不完全是由转录水平的变化引起的,其他一些机制可能在转录后水平上影响CDK1蛋白的翻译。本研究为进一步深入探讨卵母细胞成熟的分子机制奠定了一定基础。

摘要： 近年来,随着胚胎工程相关技术研究和应用的不断发展,研究者越来越需要数量更多的高质量卵母细胞以满足试验和科研需求。早期研究已表明,卵巢在其保存运输过程中的质量对卵母细胞成熟和后期发育潜力具有重要影响。

摘要： 目的 研究卵母细胞成熟率对卵胞浆内单精子注射(ICSI)有优质胚胎移植周期胚胎发育和妊娠结局的影响.方法 回顾性分析2015年1月至2019年12月在中山大学附属第六医院生殖医学中心接受ICSI助孕的患者资料,拮抗剂方案或激动剂方案促排卵按照卵母细胞成熟率(OMR)分为A组(30％＜OMR≤60％)和B组(OMR＞60％),采用SPSS统计软件倾向性评分匹配年龄、AMH、AFC、获卵数后,A组349例和B组316例纳入分析.比较两组患者的胚胎发育情况及移植D3优质胚胎后的妊娠结局.结果 两组患者间年龄、AMH水平、AFC、基础性激素水平、获卵数和移植胚胎数均无统计学差异(P＞0.05),2PN受精率、优质胚胎率、胚胎种植率、临床妊娠率、早期流产率亦均无统计学差异(P＞0.05).与A组比较,B组可利用胚胎率(79.63％vs.73.43％)及可利用胚胎数[(4.61±2.19)vs.(2.85±1.46)]、优质胚胎数[(3.89±1.93)vs.(2.39±1.31)]显著升高(P＜0.05).结论 随着OMR的升高,ICSI周期的可利用胚胎数、可利用胚胎率更高;当获得优质胚胎移植时,不同OMR患者的ICSI周期鲜胚移植妊娠结局无明显差异.

摘要： 线粒体相关内质网膜(mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane,MAM)是细胞内线粒体与内质网间的物理偶联结构,在调节线粒体动力学、钙信号传递、脂质加工与运输、线粒体自噬以及内质网应激等过程中都发挥着关键作用,MAM的这些生理功能对于卵母细胞的成熟是十分重要的.近年来研究发现,MAM上的多种蛋白参与了卵母细胞的成熟过程.本文综述了国内外近年来MAM相关蛋白参与卵母细胞成熟过程的研究进展,为了解卵母细胞成熟调控机制、卵母细胞质量鉴定以及提高辅助生殖成功率提供新的思考方向.

摘要： 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)是生物体内生长发育过程中的重要信号通路,该通路由多种效应因子组成,在细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、DNA修复和蛋白质合成过程中起关键作用.本文综述了PI3K/Akt信号通路在卵泡发育和卵母细胞成熟方面的研究进展,为相关研究提供理论依据.

摘要： 试验旨在研究猪卵母细胞体外培养过程中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对卵丘细胞的影响.在成熟培养液不变的情况下添加10 μg/L和100 μg/L的GM-CSF,对卵丘卵母细胞复合体(COC)分别培养12、24、48 h,运用CCK8检测试剂盒检测卵丘细胞活性.收集培养48 h的COC,观察卵丘细胞扩展情况,统计卵母细胞极体排出率.结果 显示,GM-CSF对卵母细胞极体排出率无显著影响,但有助于3～4级卵丘细胞的扩散.100 μg/L的GM-CSF作用48 h,能够极显著提高卵丘细胞的细胞活性(P＜0.01).研究表明,100 μg/L的GM-CSF可促进COC中3～4级卵丘细胞的扩展.

摘要： 目的:筛选分析多囊卵巢综合征卵丘细胞中与卵母细胞成熟相关的hub基因及其富集通路与注释.方法:下载GEO数据库中的GSE40400数据集,获取多囊卵巢综合征患者中第一次减数分裂期或第二次减数分裂期卵母细胞周边分离的各3例卵丘细胞转录组数据;首先使用R筛选差异表达mRNAs;再使用string和cytoscape筛选hub蛋白复合体与hub基因;最后使用kobas数据库对hub基因进行功能富集分析.结果:在多囊卵巢综合征卵丘细胞中共筛选出42种与卵母细胞成熟相关的差异表达mRNAs,进一步从中筛选出1个hub蛋白复合体与11种hub基因(BUB1B、CCNB1、CDC20、CENPE、FAM83D、KIF20A、MND1、PBK、TTK、UBE2C和UHRF1);11种hub基因参与的KEGG通路和GO注释与细胞周期和细胞分裂相关.结论:在多囊卵巢综合征卵丘细胞中筛选出11种异常表达的hub基因,它们参与细胞周期和细胞分裂相关的通路与注释,可能与多囊卵巢综合征中卵母细胞的成熟障碍有关.

摘要： 目的:通过构建Id3-Gdf9条件性敲除(CKO)小鼠并研究雌性小鼠的表型,从而确定分化抑制因子3(inhibitor of differentiotion3,Id3)对雌性小鼠生育能力的影响.方法:通过交配繁殖获得Id3-Gdf9 CKO小鼠,以HE染色、卵泡计数对CKO小鼠卵巢中的卵泡发育情况进行检测,以卵母细胞体外成熟实验和体外超排实验对卵母细胞的体外成熟进行检测,通过交配实验对生育力进行检测.结果:qPCR、Western blot结果显示卵母细胞中Id3被成功敲除;对3、8周小鼠卵巢进行HE染色并对各级卵泡进行计数,结果表明CKO小鼠中各级卵泡发育正常;卵母细胞体外成熟以及体外超排实验显示CKO小鼠中卵母细胞体外成熟正常;交配实验表明CKO小鼠生育能力正常.结论:在正常饲养条件下,条件性敲除Id3不影响正常卵泡的发育以及雌性小鼠的生育能力.

摘要： 目的 研究泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase L1,UCH-L1)基因缺失对雌性小鼠生殖系统的影响.方法 利用阴道涂片、免疫组织化学、蛋白质印迹和RNA干扰等方法,分析UCH-L1基因缺失对小鼠卵巢功能及卵泡发育的影响.结果 UCH-L1基因缺失纯合子成年雌性小鼠的体质量降低,运动困难,且子宫偏细.在UCH-L1基因缺失纯合子小鼠的卵巢和子宫中检测不到UCH-L1蛋白表达,卵巢体积明显小于杂合子小鼠,其卵巢皮质层存在一些原始卵泡或闭锁卵泡,没有成熟卵泡和黄体.雌激素受体(estrogen receptor,ER)、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)、黄体生成素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)及孕酮受体(progesterone receptor,PR)等生殖关键受体在UCH-L1缺失纯合子小鼠和杂合子小鼠卵巢中都有表达,其中纯合子小鼠卵巢中ER的表达水平明显低于杂合子小鼠.通过RNA干扰的方法下调生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞中UCH-L1的表达,能明显降低卵母细胞的成熟率.结论 UCH-L1基因缺失雌性小鼠不具备形成成熟卵泡及排卵的能力,卵巢中ER表达量显著降低.推测UCH-L1有可能通过下调卵巢中ER的表达,影响卵母细胞成熟及排卵过程.

摘要： 将雪龙黑牛卵巢分别于38.5°C、32°C、4°C3个不同温度放置4h、8h、12h、24h、48h不同时间间隔的卵母细胞成熟率、卵裂率及囊胚发育率。结果显示，放置于不同温度下(38.5°C、32°C、4°C)4h后，卵裂率依次为74.3％、80.3％、73.5％，囊胚发育率为30.8％、34.5％、30％；8h后，观察其卵裂率为50.9％、71.3％、71.2％，囊胚发育率为24.6％、33.7％、23.1％；12h后，其卵裂率为O、4％、69.5％，囊胚发育率为O、4％、20.7％；24h后，仅放置于4°C的卵母细胞仍然可以观察到生长，其卵裂率55.8％，囊胚发育率为20％；48h后，放置于4°C的卵母细胞的卵裂率为20％、囊胚发育率为0.8％。上述观察结果表明，雪龙黑牛卵巢在≤8h的运输途中可以存放于4°C一38.5°C，≥12h的运输时间，则仅能于4°C下存储，若≥48h，雪龙黑牛卵巢卵裂率及囊胚发育率极低，即停止发育。因此，本试验结果提示，雪龙黑牛卵巢的运输应尽量在4°C条件下进行，且运输时间≤48。

摘要： 目的：旨在利用树鼩卵母细胞的成熟培养、体外受精等方法,生产树鼩的"试管婴儿",以期通过此途径来实现生产转基因树鼩动物模型。 方法：使用促性腺激素作用于树鼩超数排卵、TCM199完全培养基对卵母细胞进行体外成熟培养、卵母细胞与体外获能的附睾精子进行体外受精、受精卵发育至桑椹胚、囊胚的实验。 结果：卵母细胞成熟率A级76.7％、B级55.01％、C级17.39％,受精率52％、受精卵采用体细胞共培养与非共培养的分裂率分别为37.14％和9.6％。桑椹胚/囊胚发育率分别为13.57％和0％,(P＜0.05)。 结论：树鼩卵母细胞的成熟培养、体外受精实验方法可行,受精卵在体外能发育到囊胚阶段.该试验结果为转基因树鼩动物模型生产奠定了基础。

摘要： Uhrf1蛋白是一个重要的表观遗传调控因子.卵母细胞的发育、成熟及后续早期胚胎发育,正是受到表观遗传精确调控的,且该蛋白在卵母细胞中表达丰度很高,因而推测该蛋白在这个过程中发挥了重要作用.但由于Uhrf1全敲小鼠胚胎致死,到目前为止,对卵母细胞中表达的Uhrf1蛋白的功能尚属空白.在本研究中,构建了卵母细胞特异性敲除Uhrf1ZP3CKO小鼠,探究母源性Uhrf1蛋白的功能.CKO雌鼠完全不孕,对其卵巢形态观察、卵泡计数结果表明其卵泡发育的过程未受影响.进一步研究结果显示CKO小鼠卵母细胞能够正常受精,而阻滞于囊胚发育前的早期胚胎的各个阶段.CKO小鼠卵母细胞的5mC水平下降,部分组蛋白表达异常.以上结果表明CKO小鼠卵母细胞质量异常,导致后续早期胚胎发育的阻滞.本研究将在此基础上,进一步探讨在临床工作中,外观正常人的卵母细胞受精后阻滞在囊胚期前与Uhrf1蛋白相关的分子机制,增加对卵母细胞及早期胚胎发育表观遗传调控的理解.

摘要： 应用在不成熟卵母细胞体外培养成熟中的饲养细胞，其特征是以雌性小鼠骨髓间充质干细胞MSC作为饲养细胞。该饲养细胞获取容易，能分泌多种细胞因子和生长因子，可以促进体外培养的不成熟卵母细胞90％以上发育成熟，并且促进体外培养的卵巢组织块内的各级卵泡发育、排卵及成熟；克服IVM培养液及饲养细胞所存在的不足，提高培养成熟率，为未成熟卵母细胞体外培养成熟技术更好服务于珍稀及濒危动物保存、畜牧良种培育和商业化生产、胚胎干细胞的细胞生物学研究和建立人类“卵子库”，提供生殖保险开辟更为广阔的前景。

摘要： 本发明涉及细胞培养，具体公开了一种未成熟卵母细胞的培养方案其可促进未成熟卵母细胞的体外成熟，具体其包含卵泡颗粒细胞和培养该卵泡颗粒细胞的培养液，所述培养该卵泡颗粒细胞的培养液中含有CNP或其变体或其类似物和HDAC(组蛋白去乙酰化酶)抑制剂。本发明进一步地提供了包含CNP或其变体或其类似物和HDAC抑制剂的体外成熟培养液及其相关组合物，以及上述培养基、培养液以及组合物在促进未成熟卵母细胞体外成熟的应用。

摘要： 本发明涉及一种促进未成熟卵母细胞体外成熟的培养基及其应用。本发明通过研究不同的添加物对未成熟卵母细胞的作用，筛选出一种能促进未成熟卵母细胞体外成熟的培养基，该培养基是在常规卵母体外成熟培养液中添加20‑100μM的BAPTA‑AM而制得，该培养基安全无毒副作用，能够使未成熟卵母细胞特别是三级卵丘‑卵母细胞复合体中的卵母细胞减数分裂，提高该类细胞的体外发育能力，促进细胞成熟，提高细胞成熟后的孤雌激活后卵裂率和囊胚发育率，进一步提高胚胎质量。本发明培养基的应用为动物胚胎的体外繁殖技术提供了有利支持，应用前景良好。

摘要： 本发明属于生殖生物学领域，具体涉及一种促进未成熟卵母细胞体外成熟的NO微泡制剂及促进卵母细胞体外成熟的方法，其由壳膜层与内层空腔组成，所述内层空腔填充有包含NO的气体；所述壳膜层包括脂质材料、起泡剂、冻干支撑剂，所述脂质材料、起泡剂、冻干支撑混合后加入溶剂进行冷冻干燥后制成冻干粉末，得到壳膜层；所述的脂质材料成分选自天然磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物中的一种或多种；所述起泡剂为吐温‑80；所述冻干支撑剂为Poloxamer 188。本发明提供的NO微泡制剂添加进常规卵母细胞体外培养液中可实现NO长效释放，并且生物安全性高，促进了GV期卵母细胞的体外成熟率，具有良好的应用前景。

摘要： 未成熟卵母细胞的诱导方法包括：将由FIGLA、NOBOX、LHX8和TBPL2组成的4种基因、或者它们的转录物或表达蛋白导入到选自由多能干细胞、外胚层样细胞和原始生殖细胞组成的组中的至少1种细胞中。成熟卵母细胞的制作方法包括：将由FIGLA、NOBOX、LHX8和TBPL2组成的4种基因、或者它们的转录物或表达蛋白导入到选自由多能干细胞、外胚层样细胞和原始生殖细胞组成的组中的至少1种细胞中；以及对导入后的所述细胞和卵巢体细胞进行共培养。

摘要： 本发明公开了一种无血清的牛卵母细胞体外成熟培养液及卵母细胞培养方法，属于细胞培养技术领域。本发明公开的一种无血清的牛卵母细胞体外成熟培养液，包括无Hepes的M199基础培养液、无脂肪酸BSA、HMG、17β‑雌二醇、EGF、L‑cysteine、bFGF、100xGlutamax、叶酸、胆酸、CXCL12。本发明公开的牛卵母细胞体外成熟培养液在不使用血清的情况下培养牛卵母细胞，提高了牛卵母细胞的成熟率，并有效提高体外受精胚胎和体细胞核移植胚胎的早期胚胎发育率。

摘要： 应用在不成熟卵母细胞体外培养成熟中的饲养细胞，其特征是以雌性小鼠骨髓间充质干细胞MSC作为饲养细胞。该饲养细胞获取容易，能分泌多种细胞因子和生长因子，可以促进体外培养的不成熟卵母细胞90％以上发育成熟，并且促进体外培养的卵巢组织块内的各级卵泡发育、排卵及成熟；克服IVM培养液及饲养细胞所存在的不足，提高培养成熟率，为未成熟卵母细胞体外培养成熟技术更好服务于珍稀及濒危动物保存、畜牧良种培育和商业化生产、胚胎干细胞的细胞生物学研究和建立人类“卵子库”，提供生殖保险开辟更为广阔的前景。

摘要： 本发明涉及一种促进人未成熟卵母细胞体外成熟技术。基于CNP的人未成熟卵母细胞双相体外成熟技术（CNP based biphasic IVM,C‑IVM）模拟卵母细胞体内发育的过程，分阶段实现卵母细胞体外成熟：从小窦卵泡获取未成熟卵冠丘复合体（cumulus‑oocyte complex,COCs）后，首先进行（1）预培养（pre‑IVM），利用C型利钠尿肽（C‑type natriuretic peptide,CNP）抑制卵母细胞减数分裂，同时促进卵母细胞的细胞质成熟；然后进行（2）体外成熟（IVM）培养，利用双调蛋白（amphiregulin,AREG）和FSH促进卵母细胞核成熟，排出第一极体，形成MII卵母细胞。本发明能够促进成熟度较低的人类卵母细胞在体外形成具有高发育潜能的成熟卵母细胞，显著改善目前IVM效率低下的状态，具有灵活、安全和高效的特点。

摘要： 本发明涉及牛卵母细胞体外成熟方法和所用的成熟液，具体地说，本发明成熟培养液的组成为：发情牛血清、碳酸氢钠、EGCG、Hepe、雌二醇、牛卵泡液、黄体生成素、半胱氨酸、卵泡刺激素、TCM‑199。本发明提供的牛卵母细胞体外成熟的方法包括如下步骤：提供卵母细胞；使所述卵母细胞移入成熟培养液滴中，进行体外成熟培养22～24h。本发明方法可以显著地改善卵母细胞的生物学性能，例如卵母细胞成熟过程中卵丘扩展性能、卵母细胞第一极体的排出性能、卵母细胞成熟及成熟质量、卵母细胞受精能力、卵母细胞的核成熟和早期胚胎发育能力等方面显著更优异。

摘要： 本发明涉及牛卵母细胞体外成熟方法和所用的成熟液，具体地说，本发明成熟培养液的组成为：发情牛血清、碳酸氢钠、EGCG、Hepe、雌二醇、牛卵泡液、黄体生成素、半胱氨酸、卵泡刺激素、TCM‑199。本发明提供的牛卵母细胞体外成熟的方法包括如下步骤：提供卵母细胞；使所述卵母细胞移入成熟培养液滴中，进行体外成熟培养22～24h。本发明方法可以显著地改善卵母细胞的生物学性能，例如卵母细胞成熟过程中卵丘扩展性能、卵母细胞第一极体的排出性能、卵母细胞成熟及成熟质量、卵母细胞受精能力、卵母细胞的核成熟和早期胚胎发育能力等方面显著更优异。